Universidad de Colima Facultad de Medicina Centro Universitario de Investigación Biomédica

MODELO EXPERIMENTAL PARA EVALUAR LA GENOTOXICIDAD TRANSFERIDA POR LECHE MATERNA DURANTE LA LACTANCIA

Tesis que para obtener el grado de

Maestro en Ciencias Médicas Presenta:

LUIS RAYMUNDO BAÑALES MARTÍNEZ Médico Pediatra Neonatólogo

Asesores: Dra. en C. Belinda Claudia Gómez Meda Dra. en C. Xóchitl A. Rocío Trujillo Trujillo

Colima, Col., mayo de 2009

i

MODELO EXPERIMENTAL PARA EVALUAR LA GENOTOXICIDAD TRANSFERIDA POR LECHE MATERNA DURANTE LA LACTANCIA

i

Este trabajo se realizó en el

LABORATORIO DE MUTAGÉNESIS

División de Medicina Molecular Centro de Investigación Biomédica de Occidente Instituto Mexicano del Seguro Social

COLABORADORES: Dr. en C. Guillermo M. Zúñiga González Dra. en C. Ana Lourdes Zamora Pérez Dra. en C. María de Lourdes Lemus Varela

ii

Agradecimientos

Al Laboratorio de Mutagénesis Centro de Investigación Biomédica de Occidente Instituto Mexicano del Seguro Social

Al Posgrado en Ciencias Médicas Universidad de Colima

Al Consejo Nacional de Ciencia y Tecnología (CONACYT). Beca de postgrado / No. de registro Becario CONACyT 206635

Al Fondo de Fomento a la Investigación (FOFOI) Instituto Mexicano del Seguro Social Financiamiento 2005/1/I/171

A mi esposa Ana Ruth y mis hijas Ana Valeria, Miranda, Galia y María Fernanda, ya que sin su apoyo constante no hubiera terminado este propósito.

A todos mis asesores, Dra. Belinda, Dr. Guillermo, Dra. Anita y Dra. Xóchitl, gracias por la paciencia y tiempo dedicado.

A mis compañeros de post grado por su amistad y compañerismo, y a todos aquellos que directa o indirectamente contribuyeron con la realización de este trabajo.

MUCHAS GRACIAS

iii

Índice de Cuadros y Figuras

Página Cuadros 1.

Definición de variables

22

2.

Datos de camadas y crías por partos por cada grupo de estudio

28

3.

Valores de eritrocitos micronucleados / 10,000 eritrocitos totales en los grupos de estudio a los diferentes tiempos de muestreo

30

4.

Valores de eritrocitos policromáticos micronucleados / 1,000 eritrocitos policromáticos en los grupos de estudio a los diferentes tiempos de muestreo

32

5.

Valores de eritrocitos policromáticos / 1,000 eritrocitos totales en los grupos de estudio a los diferentes tiempos de muestreo

34

Figuras 1.

Glándula mamaria

6

2.

Formación de micronúcleos

8

3.

Eritrocito micronucleado de sangre periférica

10

4.

Precursores de eritrocitos en mamíferos

11

5.

Estructura del bazo

12

6.

Estructura química de la ciclofosfamida

15

7.

Espermatozoides de rata Wistar

23

8.

Ratas Wistar lactantes

24

9.

Eritrocitos micronucleados de los grupos de estudio

31

10.

Eritrocitos policromáticos micronucleados de los grupos de estudio

33

11.

Eritrocitos policromáticos de los grupos de estudio

35

12.

Eritrocitos de sangre periférica de crías de rata Wistar

39

iv

13.

Eritrocitos policromáticos micronucleados de sangre periférica de crías de rata Wistar

41

v

Abreviaturas

AAP

Academia Americana de Pediatría (por sus siglas en inglés)

ADN

Acido desoxirribonucleico

ANOVA

Análisis de varianza (estadística)

ARN

Acido ribonucleico

CIBO

Centro de Investigación Biomédica de Occidente

CMNO

Centro Médico Nacional de Occidente

EMN

Eritrocitos micronucleados

ENC

Eritrocitos normocromáticos

EPC

Eritrocitos policromáticos

EPCMN

Eritrocitos policromáticos micronucleados

ET

Eritrocitos Totales

IMSS

Instituto Mexicano del Seguro Social

MN

Micronúcleos

SPSS

Programa Estadístico para Ciencias Sociales (por sus siglas en inglés)

v.o.

Vía oral

vi

Índice

Página Resumen

1

Summary

2

1.

Introducción

3

2.

Marco teórico

5

2.1. Lactancia materna

5

2.2. Secreción láctea y glándula mamaria

6

2.3. Pruebas para detectar genotóxicos

7

2.4. Micronúcleos

7

2.5. Eritrocitos

9

2.6. Sistema reticuloendotelial: papel del bazo

11

2.7. Bioensayos

12

2.8. Agentes micronucleogénicos

13

2.9. Mecanismos de acción de agentes micronucleogénicos

14

2.10. Ciclofosfamida

14

2.11. Genotóxicos en la leche materna

15

3.

Justificación

17

4.

Planteamiento del problema

18

5.

Hipótesis

19

6.

Objetivos

20

6.1. General

20

6.2. Particulares

20

7.

21

Material y Métodos

vii

7.1. Sede y registro

21

7.2. Diseño

21

7.3. Universo de estudio

21

7.4. Criterios de inclusión

21

7.5. Criterios de eliminación

21

7.6. Definición de variables

22

7.7. Tamaño de la muestra

22

7.8. Desarrollo del estudio

23

7.9. Inducción de micronúcleos

24

7.10. Formación de grupos

24

7.11. Grupos de trabajo

24

7.12. Toma de muestras

25

7.13. Análisis de muestras

25

7.14. Consideraciones éticas

26

7.15. Análisis estadístico

26

7.16. Diagrama de flujo

27

8.

Resultados

28

8.1. Inducción de MN

29

8.2. Análisis de EMN y EPCMN

29

8.2.1. EMN

29

8.2.2. EPCMN

31

8.3. Análisis de EPC

33

9.

Discusión

36

10. Conclusiones

43

11. Perspectivas

44

12. Bibliografía

45 viii

Glosario

52

Anexos

55

Anexo 1. Autorización y registro del proyecto de investigación por el Comité Local de Investigación en Salud, CIBO, IMSS

55

Anexo 2. Preparación y análisis de muestras

56

ix

RESUMEN

Introducción: La exposición a genotóxicos es frecuente y en ocasiones las madres que lactan están expuestas a agentes que podrían resultar dañinos a sus hijos, pero ninguna recomendación de prescripción durante la lactancia se basa en su potencial genotóxico. Objetivo: Se implementó un modelo para detectar genotóxicos transferidos durante la lactancia materna, mediante la prueba de micronúcleos en eritrocitos de sangre periférica. Material y Métodos: Se formaron 4 grupos de ratas Wistar hembras (5/grupo) y se analizaron 4 crías por hembra después de administrar vía oral a cada rata madre 0.5 ml de agua al grupo control y 0.5 ml de 5, 10 ó 20 mg de ciclofosfamida/kg/3 días a los grupos experimentales. Se tomó frotis sanguíneo de cada cría cada 24h/6días, se procesaron y observaron con microscopio de fluorescencia y los datos se analizaron con ANOVA de medidas repetidas. Resultados: Los valores basales obtenidos fueron en promedio de 21.40±5.27 eritrocitos micronucleados (EMN), 3.56±1.61 eritrocitos policromáticos micronucleados (EPCMN) y 616.26±137.93 eritrocitos policromáticos (EPC). Se observó incremento de EMN y EPCMN en los 3 grupos experimentales (p