S Determinar la presencia de bacterias coliformes en una
muestra de agua
Introducción
S Las tres pruebas básicas para determinar la presencia de
bacterias coliformes (asociada con materia fecal) en el agua son: S La prueba presuntiva S La prueba de confirmación S La prueba completa
Pruebas para determinar bacterias coliformes S Las pruenbas se realizan secuencialmente para cada una de
las muestras. S Bacterias coliformes S Bacterias gram negativas S Bacilos S No formadoras de esporas S Anaerobos fermentativos S Fermentan lactosa
Coliformes fecales Microbiología Agua spp. S Incluyen E.coli algunas Klebsiellade y Enterobacter ¿Qué es un coliforme?
Grupo de especies de varios géneros
Klebsiella pneumoniae
Escherichia coli
Citrobacter freundaii Enterobacter aerogenes
Prueba Presuntiva
S Es una prueba específica para determinar la presencia de
bacterias coliformes. S Se realiza agregando alícuotas de muestra de agua que se
quiere evaluar en caldo de fermentación que contienen lactosa y que posea un tubo invertido. S Un resultado positivo de esta prueba indica que la muestra
de agua no es potable.
Prueba de Confirmación S Confirman la presencia de bacteria coliformes en muestras
de aguas que dieron resultados positivos a las pruebas presuntivas. S Un resultado positivo de una prueba presuntiva debe
confirmarse ya que resultados positivos pueden deberse a organismos de origen no coliformes que no son reconocidos como contaminantes causados por materia fecal.
Coliformes
S En la prueba de confirmación se usa Eosine Methylene Blue
(EMB) un medio de cultivo selectivo y diferencial o Endo Agar.
S El EMB contiene azul de metileno que inhibe el crecimiento de
organismos gram positivos ( selectivo).
S En un ambiente ácido, EMB forma un complejo que se precipita
sobre las colonias coliformes y produce un centro negro y borde verde metálico (diferencial).
S Esta reacción es característica para Escherichia coli., el principal
indicador de contaminación con materia fecal.
S El Endo Agar tiene el colorante fuchsina y en presencia de
ácidos producidos por las bacterias coliformes, la fuchsina forma un complejo de color rosado obscuro que convierte a la colonias coliformes y sus alrededores en color rosado.
Prueba Completa
S Análisis final de la muestra de agua. Se utiliza para examinar las
colonias coliformes que aparecieron en el medio EMB en la prueba de confirmación.
S Se selecciona una colonia aislada para ser transferida a un tubo
con caldo de lactosa y se siembra en un tubo con agar inclinado para hacer la tinción Gram.
S Despúes de hacer la inoculación y la incubación, los tubos que
muestren la formación de gas en el caldo de lactosa y den positivos en la tinción Gram (Gram negativos) comprueban la presencia de bacterias coliformes en la muestra de agua.
Parte Práctica Prueba Presuntiva S Mezcle las muestras de agua. S Agregue con una pipeta estéril 1 mL de la muestra de agua a tres
tubos de LB1X y a tres tubos LB 2X
LB1X= Caldo con lactosa S LB 2X=Caldo con doble concentración de lactosa S
S Saque los gases del tubo durham S Incube los tubos por 48 horas a 37 grados. S Si se observa la presencia de gas en el tubo durham es muy posible
que tengan bacterias coliformes. S Resultados positivos se realiza la prueba de confrmación
Parte Práctica Prueba Confirmativa S Cultivos que dieron positivos a la presuntiva se utilizan para esta
parte.
S Identificar placas petri debidamente. S Transferir bacterias del medio de cultivo de la prueba presuntiva a
las placas de EMB utilizando la técnica de siembra por dilución.
S Incubar todas las cajas petri en posición invertida a 37 grados por
24 horas.
S Observar placas y guardar para realizar prueba completa.
Parte Práctica Prueba Completa S Inocular en tubos con caldo de lactosa y agar inclinado con
las colonias aisladas en EMB . S Incubar todos los tubos durante 24 horas a 37 grados. S Observar los tubos y hacer la tinción Gram.
