00

k ˜ OFICINA ESPANOLA DE PATENTES Y MARCAS 19 k kInt. Cl. : A62D 3/00 11 N´ umero de publicaci´on: 2 158 485 7 51 ˜ ESPANA C12R 1/00 B09C 1/00...
3 downloads 0 Views 106KB Size
k

˜ OFICINA ESPANOLA DE PATENTES Y MARCAS

19

k kInt. Cl. : A62D 3/00

11 N´ umero de publicaci´on:

2 158 485

7

51

˜ ESPANA

C12R 1/00 B09C 1/00

k

TRADUCCION DE PATENTE EUROPEA

12

kN´umero de solicitud europea: 97901070.9 kFecha de presentaci´on : 20.01.1997 kN´umero de publicaci´on de la solicitud: 0 881 923 kFecha de publicaci´on de la solicitud: 09.12.1998

T3

86 86 87 87

k

54 T´ıtulo: Bacteria de la especie Comamonas acidovorans P4a y procedimiento para la des-

contaminaci´ on microbiana de materiales contaminados con herbicidas del tipo de ´ acido fenoxi-ac´ etico.

k

73 Titular/es:

k

72 Inventor/es: M¨ uller, Roland;

k

74 Agente: Fern´ andez Candelas, Carlos

30 Prioridad: 22.02.1996 DE 196 08 319

UFZ-UMWELTFORSCHUNGSZENTRUM LEIPZIG-HALLE GMBH Permoserstrasse, 15 04318 Leipzig, DE

45 Fecha de la publicaci´ on de la menci´on BOPI:

01.09.2001

45 Fecha de la publicaci´ on del folleto de patente:

ES 2 158 485 T3

01.09.2001

Aviso:

k k

Babel, Wolfgang y Hoffmann, Doreen

k

En el plazo de nueve meses a contar desde la fecha de publicaci´on en el Bolet´ın europeo de patentes, de la menci´on de concesi´on de la patente europea, cualquier persona podr´a oponerse ante la Oficina Europea de Patentes a la patente concedida. La oposici´on deber´a formularse por escrito y estar motivada; s´olo se considerar´a como formulada una vez que se haya realizado el pago de la tasa de oposici´ on (art. 99.1 del Convenio sobre concesi´on de Patentes Europeas). Venta de fasc´ ıculos: Oficina Espa˜ nola de Patentes y Marcas. C/Panam´ a, 1 – 28036 Madrid

1

ES 2 158 485 T3

DESCRIPCION Bacteria de la especie Comamonas acidovorans P4a y procedimiento para la descontaminaci´on microbiana de materiales contaminados con herbicidas del tipo de a´cido fenoxi-ac´etico. El invento se refiere a la nueva cepa bacteriana alcalifila Comamonas acidovorans P4a y a un procedimiento para la descontaminaci´on microbiana en condiciones desde neutras hasta fuertemente alcalinas de materiales contaminados por herbicidas y de aguas contaminadas por los a´cidos 2,4dicloro- y/o 4-cloro-2-metil-fenoxi-ac´eticos o sales de ´estos. El procedimiento se puede usar para el reacondicionamiento de materiales procedentes de la demolici´on de edificios, p.ej. en solares que anteriormente ocupaban industrias qu´ımicas, o en edificios usados para almacenar y distribuir tales tipos de sustancias, o bien en la purificaci´ on de aguas alcalinas procedentes de la producci´ on de dichos herbicidas, o en la purificaci´on de suelos, aguas superficiales y aguas subterr´aneas que se hab´ıan contaminado con estos herbicidas. La mamposter´ıa de edificios en los que se hab´ıan estado fabricando los herbicidas durante d´ecadas est´a muy contaminada. Las contaminaciones incluyen la gama de los respectivos materiales de partida, compuestos intermedios y productos finales. Los materiales eluidos acuosos procedentes de dichos materiales son de car´acter fuertemente alcalino. Corrientes residuales acuosas fuertemente alcalinas, que est´an contaminadas con estas sustancias, surgen tambi´en en la producci´ on de a´cidos fenoxi-alcanoicos y sus sales. La contaminaci´on alcanza tambi´en al medio ambiente de estos (anteriores) sitios y solares. Las contaminaciones se encuentran en los suelos y en las aguas subterr´ aneas, estando los valores del pH situados frecuentemente tambi´en en un medio alcalino. Estos compuestos son t´oxicos, y algunos de ellos presentan efectos cancer´ıgenos y terat´ogenos. La meta es eliminar estos compuestos, cuya eliminaci´on se requiere indispensablemente a fin de evitar riesgos para la salud de las personas expuestas, y proteger al medio ambiente. Despu´es de la demolici´on de tales edificios e instalaciones y de la trituraci´ on de la mamposter´ıa por medio de unidades desmenuzadoras, se obtienen correspondientemente materiales contaminados. Antes de la utilizaci´on ulterior de dichos materiales, han de llevarse a cabo medidas de descontaminaci´on practicables y de bajo costo. Similarmente, esto se aplica a la evacuaci´ on de las aguas procedentes de la producci´ on de dichos compuestos que contienen estos componentes en una forma concentrada. Se ha encontrado que la introducci´ on de estas aguas de producci´ on en instalaciones de clarificaci´ on y depuraci´ on industriales puede dar lugar a una importante interferencia en el equilibrio biol´ ogico y, por lo tanto, en el rendimiento de estas instalaciones, afectando al tiempo de permanencia y al grado de degradaci´on. Una soluci´ on eficaz para este problema requiere condiciones especiales e implica algunas condiciones previas. Est´ an disponibles para finalidades de descontaminaci´ on diversos procedimientos sobre una base f´ısica-qu´ımica. Aunque los procedimientos 2

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

2

t´ermicos son eficaces, ´estos implican altos costos. Otra v´ıa podr´ıa ser la de aplicar los procesos de extracci´on o lavado con subsiguiente eliminaci´ on por adsorci´ on de contaminantes - incluso en el caso de aguas contaminadas, pero ´estos meramente transfieren el problema a otro soporte, aunque algunas veces en una forma muy concentrada. Esencialmente, los m´etodos microbianos est´an siendo considerados como variantes eficaces y m´as econ´omicas en las que los compuestos org´ anicos experimentan degradaci´ on como un resultado de la actividad de los microorganismos para producir biomasa, agua, di´oxido de carbono y calor. Con este fin se pueden emplear microorganismos ind´ıgenas adaptados al medio correspondiente. Sin embargo, tambi´en es posible a˜ nadir a materiales contaminados unos microorganismos cultivados ex situ (especies o consorcios) como cultivos de partida, cuando el reacondicionamiento se puede realizar en una diversidad de reg´ımenes de tratamiento (es decir, in situ, en el solar, fuera del solar, en reactores, en pozos, y similares). Con aguas contaminadas y concentradas, el tratamiento y la degradaci´on por separado en reactores constituir´ıan una medida evidente. Es bien conocida la descontaminaci´ on productiva de fenoles clorados y metilados y de a´cidos fenoxi-alcanoicos en el margen de valores neutros del pH usando cultivos singulares (Pieper, D.H. y colaboradores, Arch. Microbiol. 150, 95 (1988); Horvath, M. y colaboradores, Appl. Microbiol. Biotechnol. 33, 213 (1990); Kilpi, S., Microbiol. Ecol. 6, 261 (1980); Short, K.A. y colaboradores, Can. J. Microbiol. 36, 822 (1990); Tiedje, J.M. y colaboradores, J. Agr. Food Chem. 17, 1.021 (1969)) y consorcios (Bloedorn, I., Tesis Doctoral de 1990, Universidad de Halle; Haugland, R.A. y colaboradores, Appl, Env. Microbiol. 56, 1.357 (1990); Lappin, H.M., Appl. Env. Microbiol. 49, 429 (1985); Oh, K.H. y Tuovinen, O.H., J. Ind. Microbiol. 6, 275 (1990). Adem´ as de los factores antes mencionados, el entorno que preocupa implica la circunstancia complicadora de que los materiales eluidos procedentes de dichos tipos de materiales tienen unos valores del pH hasta de 12,5 como resultado del m´odulo alcalino de es´ stas son unas condiciones que tas sustancias. E restringen gravemente la diversidad de las espe´ ste es el medio de los denominados organiscies. E mos alcalifilos (K. Horikoshi: “Microorganisms in Alkaline Enviroments” (microorganismos en entornos alcalinos), VCH Weinheim, Nueva York, 1991). M´ as recientemente, se ha demostrado que los microorganismos concentrados procedentes de dicha mamposter´ıa contaminada son capaces, en forma de consorcios, de degradar por completo a diversos derivados de a´cidos fenoxi-alcanoicos en materiales eluidos acuosos que tienen unos valores del pH hasta de 12,5 (M¨ uller y colaboradores, documento de patente alemana DE 44 24 756.7). Hasta la fecha, sin embargo, no se han detectado organismos algunos que sean capaces, como un cultivo puro, de utilizar dichos a´cidos fenoxialcanoicos clorados y metilados, particularmente 2,4-D y MCPA, como una fuente de carbono y

3

ES 2 158 485 T3

energ´ıa en un medio fuertemente alcalino y, por lo tanto, de afectar a la degradaci´ on productiva. Aunque dichos cultivos ax´enicos est´an restringidos en cuanto a su espectro metab´ olico en comparaci´on con los consorcios, dicha restricci´on no es desventajosa, siempre y cuando que ´estos tengan un rendimiento o comportamiento metab´ olico adecuado para la respectiva contaminaci´on. Por otro lado, sin embargo, ´estos ofrecen la gran ventaja de una manipulaci´ on bien definida. El objeto del invento fue proporcionar una cepa de microorganismos que fuese utilizable como un cultivo puro en la descontaminaci´ on de materiales contaminados con los productos intermedios y finales procedentes de la producci´ on de herbicidas, particularmente ´acido 2,4-dicloro-fenoxiac´etico (2,4-D) y a´cido 4-cloro-2-metil-fenoxi-ac´etico (MCPA) o sus sales, tales como los materiales de demolici´on procedentes de edificios e instalaciones, suelos, aguas residuales de producci´ on o aguas subterr´ aneas, y que pudiera permitir el establecimiento de un procedimiento de descontaminaci´ on productiva para los herbicidas antes mencionados. De acuerdo con el invento, dicho objeto se consigue por medio de una cepa P4a identificada como Comamonas acidovorans. Dicha cepa crece en un margen desde ligeramente a´cido hasta alcalino en 2,4-D y MCPA o sus sales como la u ´ nica fuente de carbono y energ´ıa, y es estable y metab´ olicamente activa hasta llegar a valores del pH de 12,5. De este modo, es posible degradar los herbicidas antes mencionados incluso en un margen fuertemente alcalino y descontaminar, p.ej., la mamposter´ıa afectada o los respectivos medios acuosos. La cepa ha sido aislada a partir de una mamposter´ıa contaminada con herbicidas y ha sido depositada en la Colecci´on Alemana de Microorganismos y Cultivos Celulares Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH bajo el n´ umero DSM 10474, el 9 de Enero de 1996. La cepa se hace crecer ex situ a unos valores del pH de 6 a 11, preferiblemente de 8 a 10, en 2,4-D y/o MCPA o sus sales, siendo opcionalmente estabilizado el crecimiento por adici´on de una compleja fuente de carbono y energ´ıa. Por una parte, el procedimiento de descontaminaci´ on del invento que usa la cepa P4a y el crecimiento de la cepa P4a se pueden realizar de un modo continuo a˜ nadiendo materiales eluidos acuosos de materiales contaminados con 2,4-D y/o MCPA o aguas contaminadas con 2,4D y/o MCPA, en un r´egimen de diluci´on hasta de 0,2 h−1 , a un cultivo de Comamonas acidovorans P4a en una concentraci´ on de aproximadamente 10 partes en peso por parte en peso de la masa seca bacteriana, creciendo dicho cultivo a unos valores alcalinos del pH, comprendidos preferiblemente entre los pH de 8,5 a 9,5. Componentes esenciales del crecimiento, tales como nitr´ogeno y f´ osforo, deben estar presentes en concentraciones adecuadas. En tales condiciones, estos herbicidas experimentan una degradaci´ on cuantitativa, siendo convertidos de este modo en biomasa bacteriana, agua, CO2 , HCl y calor. El crecimiento puede ser soportado y mantenido a˜ nadiendo hasta 0,25 partes en peso, por parte en peso de los her-

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

4

bicidas, de una compleja fuente de carbono tal como un extracto de levadura, no siendo necesaria en este caso la adici´on de m´ as elementos de crecimiento esenciales. El procedimiento de descontaminaci´ on del invento y/o el crecimiento de la cepa P4a se pueden realizar tambi´en de un modo discontinuo, comprendiendo la producci´ on de biomasa opcionalmente una etapa de crecimiento usando un medio nutriente usual de por s´ı, que incluye una compleja fuente de carbono y energ´ıa, con acondicionamiento subsiguiente de la cepa. Ventajosamente, dicho acondicionamiento se puede realizar despu´es de haber hecho crecer la cepa sobre un medio o material que contiene 2,4-D y/o MCPA (es decir, in situ). As´ı, por ejemplo, la descontaminaci´ on discontinua se realiza a˜ nadiendo una biomasa bacteriana cultivada exteriormente en 2,4-D y/o MCPA, preferiblemente en la presencia de hasta 0,25 partes en peso de un extracto de levadura por parte en peso de herbicidas, a un pH de 8 a 10. Similarmente, la biomasa se puede hacer crecer usando una biomasa que ha sido cultivada en 2,4-D y/o MCPA y luego ha sido hecha crecer subsiguientemente de modo adicional sobre un substrato de crecimiento complejo, preferiblemente un extracto de levadura, peptona y fructosa, en una relaci´on de 1:1:0,5, durante 24 - 48 horas, y se somete subsiguientemente a un tratamiento adicional durante hasta 24 horas en 2,4-D y/o MCPA, preferiblemente a 0,2 g/l. La biomasa se ha de a˜ nadir a concentraciones de 0,1 a 1 g/l o´ kg a un material contaminado con 2,4-D y/o MCPA a una concentraci´ on hasta de 2 g/l en un medio acuoso que puede tener unos valores del pH de hasta 12,5. En tales condiciones, la descontaminaci´on de hasta 0,4 g/l de 2,4-D a una concentraci´ on de la biomasa de 0,7 g/l se desarrolla en el transcurso de 24 horas a unos valores del pH hasta de 9, en el transcurso de 3 d´ıas a unos valores del pH hasta de 11, y en el transcurso de 5 d´ıas a unos valores del pH de hasta 12. A una concentraci´ on de 2,4-D de 0,8 g/l, la degradaci´on completa se desarrolla en el transcurso de un d´ıa a unos valores del pH de hasta 9, en el transcurso de 2 d´ıas a unos valores del pH de hasta 10, y en el transcurso de 5 d´ıas a unos valores del pH hasta de 11. Incluso a una concentraci´on de 2,4-D de 1,6 g/l, una degradaci´on completa a unos valores de pH de 11 todav´ıa se consigue en el transcurso de 7 d´ıas. El comportamiento y rendimiento de degradaci´on en dichas condiciones discontinuas es sorprendente puesto que el crecimiento es observado solamente hasta llegar a valores del pH de 11, y puesto que las concentraciones del substrato en r´egimen permanente son < 0,1 g/l a lo largo de una amplia gama como un resultado de las condiciones de cultivo que se seleccionan. Evidentemente, por acondicionamiento del medio, es decir por disminuci´ on del valor del pH externo a unos valores comprendidos entre 9 y 10, la cepa es capaz de influir activamente sobre las oportunidades de su propia supervivencia a trav´es de actividades metab´ olicas y es capaz de tolerar unas concentraciones externas correspondientemente m´as 3

5

ES 2 158 485 T3

altas de estos compuestos t´oxicos por crecimiento y propagaci´ on. En conjunto, era sorprendente el hecho de que se consiguiese dicha resistencia a valores altos del pH y que se tolerase dicha alta carga de estos compuestos t´oxicos. Hasta la fecha, esto no ha sido observado con microorganismos neutr´ ofilos en contexto con la degradaci´ on de dichos herbicidas. La degradaci´ on de los herbicidas por crecimiento y propagaci´on se desarrolla en condiciones aerobias. Es ventajoso seleccionar un r´egimen de temperaturas de 4 a 38◦ C, preferiblemente de 20 a 30◦C. El procedimiento de descontaminaci´ on se puede dise˜ nar tambi´en de manera tal que las c´elulas de Comamonas acidovorans P4a sean aplicadas como revestimiento sobre estructuras ensanchadoras de la superficie, p.ej. sobre gr´ anulos de poliuretano tratados en su superficie. Sobre ´estos tiene lugar un crecimiento en exceso que, particularmente despu´es de haber inoculado con una biomasa bacteriana generada ex situ, da como resultado unos reg´ımenes comparables de degradaci´on despu´es del desarrollo de una u ´nica tanda. Los medios contaminados con 2,4-D y/o MCPA se pueden hacer pasar sobre dicho reactor de lecho fijo, y la degradaci´ on se puede realizar de un modo continuo. Los reg´ımenes de alimentaci´on que hacen posible una degradaci´ on completa se determinan por el nivel de contaminaci´on y la capacidad del reactor de lecho fijo. En funcionamiento a largo plazo, inclusive el aspecto de dimensiones industriales, el tiempo de degradaci´ on de los contaminantes se puede reducir incluso m´as mediante un crecimiento excesivo correspondientemente aumentado y/o por mantenimiento de una alta actividad potencial de dicha cepa. Sin pretender que sea limitativo, el procedimiento del invento ser´a ilustrado con m´ as detalle haciendo referencia a las siguientes realizaciones. Ejemplo 1 Cultivaci´ on de la cepa de acuerdo con el invento El crecimiento inicial de la cepa P4a de Comamonas acidovorans se efect´ ua en un medio m´ınimo. Por gramo de biomasa que se ha de formar, este medio tiene la siguiente composici´ on (en mg/ l): NH4 Cl: 700; KH2 PO4 : 158; MgSO4 x7H2 O: 8; CaCl2x2H2 O: 10; FeSO4 x7H2 O: 2,5; ZnSO4 x7H2 O: 0,23; MnSO4 x4H2 O: 0,42; CuSO4 x5H2 O: 0,39; Na2 MoO4 : 0,12; NaCl: 3.000. La cultivaci´ on se realiza en un margen de valores del pH de 8 a 10 a 30◦ C y a una concentraci´on de ox´ıgeno disuelto de > 30 % del valor de saturaci´ on con aire. Los 2,4-D y/o MCPA o sus sales se usan como fuente de carbono y energ´ıa. Es tambi´en posible la alimentaci´on directa de un medio acuoso que contiene los componentes 2,4-D y/o MCPA. Para soportar el crecimiento, se puede ofrecer por a˜ nadidura un extracto de levadura a una concentraci´ on de 0,25 partes en peso por parte en peso del substrato de herbicidas. Los reg´ımenes de crecimiento se ajustan a 0,1 - 0,2 h−1 . Una vez que se hubieran alcanzado unas condiciones estables de crecimiento, el cultivo se puede usar para descontaminar las aguas

4

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

6

que est´ an contaminadas con derivados de a´cidos fenoxi-ac´eticos. Ejemplo 2 Procedimiento continuo de descontaminaci´ on En procedimientos continuos de degradaci´ on acoplada con el crecimiento, unos medios acuosos contaminados con 2,4-D y/o MCPA se alimentan a unos reg´ımenes de diluci´on hasta de 0,2 h−1 . En funcionamiento de tratamiento estable, el valor del pH se mantiene en un margen de 7 a 10, preferiblemente de 8 a 9. Si es necesario, ciertos componentes esenciales del crecimiento, particularmente nitr´ ogeno, f´ osforo y sodio, deben estar presentes en cantidades apropiadas. Cuando se alimentan aguas naturales, es despreciable la cantidad de oligoelementos requeridos. Unas complejas fuentes de carbono y energ´ıa se pueden a˜ nadir a fin de estabilizar el crecimiento. En estas condiciones previas, la degradaci´ on completa de 2,4-D y/o MCPA se consigue a los reg´ımenes antes se˜ nalados. La degradaci´on se puede vigilar usando m´etodos espectrofotom´etricos o cromatogr´ aficos (HPLC = cromatograf´ıa de l´ıquido de alto rendimiento), o a trav´es de la liberaci´on, p.ej., de cloruros. Ejemplo 3 Procedimiento discontinuo de descontaminaci´ on La descontaminaci´on de materiales y aguas que se han contaminado puede realizarse tambi´en de un modo discontinuo. A este fin, se cultivan Comamonas acidovorans P4a de un modo continuo en 2,4-D y/o MCPA como fuente de carbono y energ´ıa de acuerdo con el procedimiento antes descrito, o de un modo discontinuo por adici´ on secuencial de 2,4-D ´o MCPA a concentraciones de 0,2 a 0,5 g/l. La propagaci´ on ulterior de dicha biomasa cultivada previamente en uno de los dos herbicidas o sobre ambos herbicidas se puede efectuar haci´endola crecer durante una pasada de 24 a 48 horas en un medio de crecimiento complejo que contiene p.ej. un extracto de levadura, peptona y fructosa en una relaci´ on en peso de 1:1:0,5. Esta fase de crecimiento es seguida por una fase de acondicionamiento mediante la adici´ on de 0,2 a 0,5 g/l de 2,4-D ´o MCPA. Despu´es de 24 horas, esta biomasa, o una biomasa producida de un modo continuo como antes se ha descrito, se usa en la descontaminaci´on de medios acuosos contaminados con 2,4-D y/o MCPA. A una concentraci´on de 0,7 g de masa seca bacteriana por litro, la degradaci´ on de 2,4-D o´ MCPA en una concentraci´on de 0,8 g/l se desarrolla a unos valores del pH hasta de 9 en el transcurso de 2 d´ıas y a unos valores del pH hasta de 11 en el transcurso de 7 d´ıas. Con una concentraci´ on de herbicidas de 0,4 g/l, la degradaci´ on se desarrolla en el transcurso de 5 d´ıas incluso a un valor del pH de 12. El tiempo requerido es proporcional a la concentraci´on de biomasa. A una concentraci´on de 0,1 g de masa seca bacteriana por litro, el tiempo requerido para la degradaci´ on completa de 0,4 g/l de 2,4-D a un valor del pH de 10 aumenta hasta 3 d´ıas y a un valor del pH de 11 aumenta hasta 6 d´ıas. Similares valores para la degradaci´on completa en funci´ on del valor del pH se obtienen con el MCPA.

7

ES 2 158 485 T3

REIVINDICACIONES 1. La cepa bacteriana alcalifila Comamonas acidovorans P4a (DSM 10474). 2. Un procedimiento para la descontaminaci´on microbiana de materiales o aguas contaminadas con a´cido 2,4-dicloro-fenoxi-ac´etico (2,4-D) y/o ´acido 4-cloro-2-metil-fenoxi-ac´etico (MCPA) o sus sales, caracterizado porque se usa en dicha descontaminaci´on la cepa bacteriana alcalifila Comamonas acidovorans P4a (DSM 10474), llev´andose a cabo dicha descontaminaci´ on en la presencia de los componentes del crecimiento usados convencionalmente para el g´enero Comamonas y a unos valores de pH de 6 a 12,5 y a unas temperaturas de 4 a 38◦C en condiciones aerobias. 3. El procedimiento de acuerdo con la reivindicaci´on 2, caracterizado porque la descontaminaci´ on se realiza en materiales eluidos acuosos procedentes de materiales contaminados o en dichos materiales en un estado mojado. 4. El procedimiento de acuerdo con la reivindicaci´on 2 o´ 3, caracterizado porque la cepa bacteriana Comamonas acidovorans P4a se hace crecer ex situ en 2,4-D y/o MCPA o sus sales a unos valores de pH de 6 a 11, preferiblemente de 8 a 10, siendo estabilizado dicho crecimiento opcionalmente por adici´on de una compleja fuente de carbono y energ´ıa. 5. El procedimiento de acuerdo con la reivindicaci´on 4, caracterizado porque la cepa Co-

5

10

15

20

25

30

8

mamonas acidovorans P4a se hace crecer de un modo continuo a unos reg´ımenes de diluci´on hasta de 0,2 h−1 , siendo descontaminados de un modo continuo al mismo tiempo los materiales eluidos acuosos procedentes de los materiales contaminados. 6. El procedimiento de acuerdo con la reivindicaci´on 4, caracterizado porque la cepa Comamonas acidovorans P4a se hace crecer de un modo discontinuo, comprendiendo la producci´ on de biomasa una etapa de crecimiento que utiliza un medio nutriente usual de por s´ı que incluye una compleja fuente de carbono y energ´ıa, con acondicionamiento subsiguiente de la cepa. 7. El procedimiento de acuerdo con la reivindicaci´on 6, caracterizado porque dicho acondicionamiento se realiza despu´es de haber hecho crecer la cepa en una compleja fuente de carbono y energ´ıa en el seno de un medio o material que contiene 2,4-D y/o MCPA. 8. El procedimiento de acuerdo con una de las reivindicaciones 6 ´o 7, caracterizado porque la descontaminaci´on se efect´ ua de un modo discontinuo por adici´ on de biomasa de Comamonas acidovorans P4a a materiales o aguas que se hab´ıan contaminado en una concentraci´ on de 0,1 a 1 g por litro o kilogramo. 9. El procedimiento de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 2 a 8, caracterizado porque la descontaminaci´on se realiza en un reactor de lecho fijo.

35

40

45

50

55

60

NOTA INFORMATIVA: Conforme a la reserva del art. 167.2 del Convenio de Patentes Europeas (CPE) y a la Disposici´ on Transitoria del RD 2424/1986, de 10 de octubre, relativo a la aplicaci´ on del Convenio de Patente Europea, las patentes europeas que designen a Espa˜ na y solicitadas antes del 7-10-1992, no producir´ an ning´ un efecto en Espa˜ na en la medida en que confieran protecci´ on a productos qu´ımicos y farmac´euticos como tales.

65

Esta informaci´ on no prejuzga que la patente est´e o no inclu´ıda en la mencionada reserva.

5