Crescina Re-Growth
STUDIEN ZUR WIRKSAMKEIT VON CRESCINA
Auszüge ausgewählter In-vivo- und In-vitro-Tests
Labo Cosprophar AG – Basel – Schweiz
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Crescina Re-Growth Ausgewählte Wirksamkeitstests
Dieses Dokument enthält Zusammenfassungen einiger Wirksamkeitstests, die mit Crescina Re-Growth durchgeführt wurden. Alle Tests wurden von unabhängigen externen Labors durchgeführt. Alle Tests und Abbildungen sind authentisch und stammen aus den Originalberichten, die von den Leitern der Wirksamkeitsstudien erstellt wurden. Aus Gründen der Vertraulichkeit sind statt der Namen der Labors nur die Buchstabenkodes der einzelnen Tests angegeben.
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Crescina Re-Growth Ausgewählte Wirksamkeitstests
Test
Seite
Test DMG99................................................................................................................ 5 Test DMG01.............................................................................................................. 27 Test ECF06 ............................................................................................................... 36 Test ABH05............................................................................................................... 55 Test VCB05............................................................................................................... 64
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Crescina Re-Growth Ausgewählte Wirksamkeitstests
Test DMG99 Art der Studie: Klinische Studie zur Beurteilung der Aktivität einer Haar-Lotion bei Probanden mit Ausdünnung des Kopfhaares infolge von androgenetisch bedingter Alopezie und/oder Effluvium anderer Genese. Ziel: Klinische Beurteilung und Anwendung nichtinvasiver Instrumente zur Bestimmung der Wirksamkeit einer 3-monatigen Behandlung mit Crescina hinsichtlich des Nachwachsens der Haare. Art des Tests: In-vivo-Test mit 25 Probanden. Dauer des Tests: 90 Tage Datum der Durchführung: 5. Mai 1999
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Crescina Re-Growth Test DMG99
Datum: 5. Mai 1999 An dem Test „Klinische Studie zur Beurteilung der Aktivität einer Haar-Lotion (Crescina) bei Probanden mit Ausdünnung des Kopfhaares infolge von androgenetisch bedingter Alopezie und/oder Effluvium anderer Genese“ nahmen 25 Probanden – 14 Frauen und 11 Männer – im Alter von 23 bis 45 Jahren mit androgenetisch bedingter Alopezie (Ludwig-Stadium I-II bei den Frauen bzw. Hamilton-Stadium II-III bei den Männern) und/oder Effluvium anderer Genese teil.
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Crescina Re-Growth Test DMG99
Ziele Der Test diente der klinischen Prüfung von Crescina mithilfe von Instrumenten zur Beurteilung seiner Wirksamkeit hinsichtlich der Förderung des Nachwachsens der Haare bei Personen mit verschiedenen Formen der Ausdünnung des Kopfhaares infolge von androgenetisch bedingter Alopezie und/oder Effluvium anderer Genese. Getesteter Hautbereich: Kopfhaut.
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Crescina Re-Growth Test DMG99
Methode Behandlung an jedem zweiten Tag über einen Zeitraum von 90 Tagen. Nach 1 Monat, 2 Monaten und 3 Monaten Untersuchungen und Messungen zur Beurteilung folgender Parameter: 1) Ausmass von Alopezie und/oder Effluvium, 2) Ausmass von Seborrhoe an Kopfhaut und Haaren, 3) Schuppenbildung, 4) Zugtest. Vor Beginn und am Ende der Behandlung wurden ausserdem folgende Massnahmen durchgeführt: -
Ein für die digitale Zählung der Haare ausgewähltes Kopfhautareal wurde rasiert und fotografiert.
-
Ein von Alopezie betroffener Bereich wurde fotografiert.
-
Zur morphologischen Beurteilung (Zustand von Haarzwiebel [Bulbus] und Haarschaft, Durchmesser und Glanz des Schafts) mittels optischem Mikroskop wurden Haarproben genommen.
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Crescina Re-Growth Test DMG99
Testergebnisse -
Statistisch signifikante Zunahme der wachsenden Haare um 13% im Vergleich zum Ausgangswert, gemessen mittels digitaler Zählung. - Betrachtung der Haarzwiebeln (Bulbi) unter dem optischen Mikroskop: Zunahme der Bulbi in der Anagenphase (Nachwachsen neuer Haare) von 3,7 auf 25,9% der untersuchten Bulbi; Abnahme der Bulbi in der Telogenphase (Haarausfall) von 81,5 auf 57,7% der untersuchten Bulbi. - Morphometrische Analyse: Zunahme des durchschnittlichen Durchmessers der einzelnen Haare um 11,2% im Vergleich zum Ausgangswert. Glanz unverändert. - Klinische Beurteilung: Statistisch signifikante Verringerung der Schuppenbildung, bei 66,7% der Fälle hinsichtlich der Quantität und 57,1% der Fälle hinsichtlich der Fettigkeit. Keine signifikanten Unterschiede hinsichtlich des Ausmasses der Seborrhoe von Haut und Haaren. Die Analyse von Fotos der von Haarausfall betroffenen Bereiche zeigte, dass der Ausfallprozess gestoppt wurde.
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Crescina Re-Growth Test DMG99
Schlussfolgerungen Den Ergebnissen zufolge, die bei Probanden mit verschiedengradiger Ausdünnung des Haares nach 3-monatiger Behandlung erzielt wurden, ist Crescina offensichtlich in der Lage, den Prozess des Haarausfalls zum Stehen zu bringen und das Nachwachsen zu fördern. Veränderungen der Hautoberfläche wurden nicht beobachtet.
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Crescina Re-Growth Test DMG99
Ergebnisse der elektronischen Haarzählung
Minimum
+4%
Maximum
+45%
Nach dreimonatiger Behandlung betrug der Anteil der nachwachsenden Haare minimal 4% bis maximal 45%. Die Haare wurden elektronisch gezählt. Wir zeigen zunächst die Resultate in Tabellenform, anschliessend folgen Fotografien der von Haarausfall betroffenen und mit Crescina Re-Growth behandelten Bereiche der einzelnen Probanden (siehe Beispiele auf den nächsten Seiten). Bei keinem der Probanden wurde eine Verschlechterung beobachtet.
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Crescina Re-Growth Test DMG99
Ergebnisse der Untersuchungen zum Zustand der Haarzwiebeln Behandlungsbeginn
Anagenphase (Wachstum) Telogenphase (Abstossung)
von von
3,7% 81,5%
Behandlungsende
auf auf
25,9% 57,7%
Die Betrachtung der Haarzwiebeln unter dem optischen Mikroskop zeigte nach dreimonatiger Behandlung eine Zunahme der Bulbi in der Anagenphase, d.h. in der Phase des Wachstums neuer Haare, von 3,7% auf 25,9% und eine Abnahme der Bulbi in der Telogenphase (Ruhe- und Abstossungsphase) von 81,5% auf 57,7%.
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Crescina Re-Growth Test DMG99
Ergebnisse der Untersuchungen des Haarschafts
+ 11,2% Die morphometrische Analyse der vergrösserten Fotos der Haare ergab eine durchschnittliche Zunahme des Durchmessers (Schaftdicke) um 11,2% nach dreimonatiger Behandlung.
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Crescina Re-Growth Test DMG99
Fotos, die zur elektronischen Haarzählung verwendet wurden
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Crescina Re-Growth Test DMG99
KLINISCHE STUDIE ZUR BEURTEILUNG DER AKTIVITÄT EINER HAAR-LOTION (CRESCINA) BEI PROBANDEN MIT AUSDÜNNUNG DES KOPFHAARES INFOLGE VON ANDROGENETISCH BEDINGTER ALOPEZIE UND/ODER EFFLUVIUM ANDERER GENESE – FOTOS, DIE ZUR DIGITALEN HAARZÄHLUNG VERWENDET WURDEN Proband Nr. 6 Scheitelbereich T0 (A)
Scheitelbereich T0
Proband Nr. 6
Initialen GA
Scheitelbereich T3 (A)
Scheitelbereich T3
Geschlecht w
Alter 43
Zunahme (%) 22%
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Crescina Re-Growth Test DMG99
KLINISCHE STUDIE ZUR BEURTEILUNG DER AKTIVITÄT EINER HAAR-LOTION (CRESCINA) BEI PROBANDEN MIT AUSDÜNNUNG DES KOPFHAARES INFOLGE VON ANDROGENETISCH BEDINGTER ALOPEZIE UND/ODER EFFLUVIUM ANDERER GENESE – FOTOS, DIE ZUR DIGITALEN HAARZÄHLUNG VERWENDET WURDEN Proband Nr. 8 Scheitelbereich T0 (A)
Scheitelbereich T0
Proband Nr. 8
Initialen CM
Scheitelbereich T3 (A)
Scheitelbereich T3
Geschlecht w
Alter 39
Zunahme (%) 26%
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Crescina Re-Growth Test DMG99
KLINISCHE STUDIE ZUR BEURTEILUNG DER AKTIVITÄT EINER HAAR-LOTION (CRESCINA) BEI PROBANDEN MIT AUSDÜNNUNG DES KOPFHAARES INFOLGE VON ANDROGENETISCH BEDINGTER ALOPEZIE UND/ODER EFFLUVIUM ANDERER GENESE – FOTOS, DIE ZUR DIGITALEN HAARZÄHLUNG VERWENDET WURDEN
Proband Nr. 14 Scheitelbereich T0 (A)
Scheitelbereich T0
Proband Nr. 14
Initialen LBM
Scheitelbereich T3 (A)
Scheitelbereich T3
Geschlecht m
Alter 35
Zunahme (%) 45%
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Crescina Re-Growth Test DMG99
Fotos eines von Alopezie betroffenen Bereichs
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Crescina Re-Growth Test DMG99
KLINISCHE STUDIE ZUR BEURTEILUNG DER AKTIVITÄT EINER HAAR-LOTION (CRESCINA) BEI PROBANDEN MIT AUSDÜNNUNG DES KOPFHAARES INFOLGE VON ANDROGENETISCH BEDINGTER ALOPEZIE UND/ODER EFFLUVIUM ANDERER GENESE – FOTOS EINES VON ALOPEZIE BETROFFENEN BEREICHS (HAARANSATZ – RECHTE FRONTOTEMPORALREGION) Proband Nr. 1 Stirnbereich T3
Stirnbereich T0
Proband Nr. 1
Initialen SM
Geschlecht m
Alter 39
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Crescina Re-Growth Test DMG99
KLINISCHE STUDIE ZUR BEURTEILUNG DER AKTIVITÄT EINER HAAR-LOTION (CRESCINA) BEI PROBANDEN MIT AUSDÜNNUNG DES KOPFHAARES INFOLGE VON ANDROGENETISCH BEDINGTER ALOPEZIE UND/ODER EFFLUVIUM ANDERER GENESE – FOTOS EINES VON ALOPEZIE BETROFFENEN BEREICHS (HAARANSATZ – RECHTE FRONTOTEMPORALREGION) Proband Nr. 2 Stirnbereich T3
Stirnbereich T0
Proband Nr. 2
Initialen CR
Geschlecht w
Alter 54 20
Crescina Re-Growth Test DMG99
KLINISCHE STUDIE ZUR BEURTEILUNG DER AKTIVITÄT EINER HAAR-LOTION (CRESCINA) BEI PROBANDEN MIT AUSDÜNNUNG DES KOPFHAARES INFOLGE VON ANDROGENETISCH BEDINGTER ALOPEZIE UND/ODER EFFLUVIUM ANDERER GENESE – FOTOS EINES VON ALOPEZIE BETROFFENEN BEREICHS (HAARANSATZ – RECHTE FRONTOTEMPORALREGION) Proband Nr. 4 Stirnbereich T3
Stirnbereich T0
Proband Nr. 4
Initialen MP
Geschlecht w
Alter 31 21
Crescina Re-Growth Test DMG99
KLINISCHE STUDIE ZUR BEURTEILUNG DER AKTIVITÄT EINER HAAR-LOTION (CRESCINA) BEI PROBANDEN MIT AUSDÜNNUNG DES KOPFHAARES INFOLGE VON ANDROGENETISCH BEDINGTER ALOPEZIE UND/ODER EFFLUVIUM ANDERER GENESE – FOTOS EINES VON ALOPEZIE BETROFFENEN BEREICHS (HAARANSATZ – RECHTE FRONTOTEMPORALREGION) Proband Nr. 16 Stirnbereich T3
Stirnbereich T0
Proband Nr. 16
Initialen DM
Geschlecht w
Alter 30 22
Crescina Re-Growth Test DMG99
KLINISCHE STUDIE ZUR BEURTEILUNG DER AKTIVITÄT EINER HAAR-LOTION (CRESCINA) BEI PROBANDEN MIT AUSDÜNNUNG DES KOPFHAARES INFOLGE VON ANDROGENETISCH BEDINGTER ALOPEZIE UND/ODER EFFLUVIUM ANDERER GENESE – FOTOS EINES VON ALOPEZIE BETROFFENEN BEREICHS (HAARANSATZ – RECHTE FRONTOTEMPORALREGION) Proband Nr. 20 Stirnbereich T3
Stirnbereich T0
Proband Nr. 20
Initialen VD
Geschlecht m
Alter 32 23
Crescina Re-Growth Test DMG99
Fotos, die zur Messung der Haardurchmesser mittels optischer Mikroskopie verwendet wurden
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Crescina Re-Growth Test DMG99 KLINISCHE STUDIE ZUR BEURTEILUNG DER AKTIVITÄT EINER HAAR-LOTION (CRESCINA) BEI PROBANDEN MIT AUSDÜNNUNG DES KOPFHAARES INFOLGE VON ANDROGENETISCH BEDINGTER ALOPEZIE UND/ODER EFFLUVIUM ANDERER GENESE – FOTOS, DIE ZUR MESSUNG DER HAARDURCHMESSER MITTELS OPTISCHER MIKROSKOPIE VERWENDET WURDE Proband Nr. 9 T3 Durchmesser bei Studienende 0,0869 mm
+ 40% T0 Durchmesser bei Studienbeginn 0,0622 mm
Proband Nr.
Initialen
Geschlecht
Alter
9
GL
m
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Durchschnittliche Zunahme bei Auswertung von 22 Probanden 11,2% 25
Crescina Re-Growth Test DMG99
KLINISCHE STUDIE ZUR BEURTEILUNG DER AKTIVITÄT EINER HAAR-LOTION (CRESCINA) BEI PROBANDEN MIT AUSDÜNNUNG DES KOPFHAARES INFOLGE VON ANDROGENETISCH BEDINGTER ALOPEZIE UND/ODER EFFLUVIUM ANDERER GENESE – FOTOS, DIE ZUR MESSUNG DER HAARDURCHMESSER MITTELS OPTISCHER MIKROSKOPIE VERWENDET WURDEN Proband Nr. 14 T3 Durchmesser bei Studienende 0,1037 mm
+ 82% T0 Durchmesser bei Studienbeginn 0,0622 mm
Proband Nr.
Initialen
Geschlecht
Alter
14
LBM
m
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Durchschnittliche Zunahme bei Auswertung von 22 Probanden 11,2% 26
Crescina Re-Growth Ausgewählte Wirksamkeitstests
Test DMG01 Art der Studie: Klinische Studie zur Beurteilung der Aktivität einer Haar-Lotion bei Probanden mit Ausdünnung des Kopfhaares infolge von androgenetisch bedingter Alopezie und/oder Effluvium anderer Genese. Ziel: Bestimmung der Wirksamkeit einer 3-monatigen Behandlung mit Crescina mittels klinischer Beurteilung und Anwendung nichtinvasiver Instrumente bei Probanden mit Ausdünnung des Kopfhaares infolge von androgenetisch bedingter Alopezie und/oder Effluvium anderer Genese. Art des Tests: In-vivo-Test mit 42 Probanden. Dauer des Tests: 90 Tage Datum der Durchführung: 20. Februar 2001
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Crescina Re-Growth Test DMG01
Datum: 20. Februar 2001 An dem Test „Klinische Studie zur Beurteilung der Aktivität einer Haar-Lotion (Crescina) bei Probanden mit Ausdünnung des Kopfhaares infolge von androgenetisch bedingter Alopezie und/oder Effluvium anderer Genese“ nahmen 42 Probanden teil, die Crescina anwendeten. Die Lotion wurde direkt auf die Kopfhautbereiche aufgetragen, die am stärksten von der Ausdünnung der Haare betroffen waren, und sanft einmassiert, bis sie vollständig eingezogen war. Die Behandlung wurde über einen Zeitraum von 90 Tagen durchgeführt. Vor Behandlungsbeginn (T0) sowie nach 2 (T2) und nach 3 Monaten (T3) wurde ein Fototrichogramm angefertigt. Ausserdem wurde in jedem Teststadium (0, 2 und 3) ein von der Alopezie betroffener Bereich fotografiert. Zusammensetzung der Stichprobe: 42 Probanden: 24 Frauen und 18 Männer mit Alopezie unterschiedlicher Grade (Ludwig-Stadium I-II bei Frauen, Hamilton-Stadium II-III-IV-V bei Männern) und/oder Effluvium anderer Genese.
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Crescina Re-Growth Test DMG01
Testergebnisse - Fototrichografie bei Probanden mit der Diagnose Effluvium: Statistisch signifikante Zunahme des prozentualen Anteils der Haare in der Anagenphase von 27 auf 61%. - Weibliche Probanden unabhängig von der Einschlussdiagnose: Hochsignifikante prozentuale Zunahme der Haare in der Anagenphase von 20 auf 55% bereits nach 2 Monaten (T2) und von 20 auf 50% nach 3 Monaten (T3). - Weibliche Probanden mit der Diagnose Alopezie: Statistisch signifikante Zunahme der Haare in der Anagenphase von 17 auf 48% bereits 2 Monate nach Behandlungsbeginn. - Männliche Probanden mit der Diagnose Effluvium/Alopezie, Hamilton-Stadium II, III oder IV: Signifikante Zunahme des durchschnittlichen Anteils der Haare in der Anagenphase von 27 auf 56% nach 3 Monaten. - Männliche Probanden mit der Diagnose Alopezie, Hamilton-Stadium II oder III: Zunahme von 35% vor Behandlungsbeginn (T0) auf 69% nach 2 Monaten (T2) und 83% nach 3 Monaten (T3).
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Crescina Re-Growth Test DMG01
Schlussfolgerungen Crescina kann trophisch wirken und stimuliert den Haarwuchs bei Personen mit Ausdünnung der Haare infolge verschiedener Ursachen. Personen mit der Diagnose Effluvium: Besserung nach zweimonatiger Behandlung. Personen mit der Diagnose Alopezie: Zunahme der Haare in der Anagenphase im Verhältnis zu den Haaren in der Telogen-/Katagenphase.
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Crescina Re-Growth Test DMG01
Ergebnisse der Auswertung der Fototrichogramme nach 3-monatiger Behandlung Allgemeines Schema (Alopezie + Effluvium) Vor der Behandlung Nach der Behandlung Anteil (%) der Haare in der Anagenphase
27%
Anteil (%) der Haare in der Telogenphase
73%
Durchschnittlicher Haardurchmesser (mm)
0,070
53%
Zunahme (%) +26% nach 2 Monaten
47%
-26% nach 2 Monaten
0,082
+17% nach 3 Monaten
Bei den in der Tabelle dargestellten Ergebnissen ist der Unterschied zwischen den Geschlechtern nicht berücksichtigt. Die Betrachtung der Fotos vom frontoparietalen Bereich aller Probanden mit blossem Auge ergibt eindeutig, dass sich bei 41% der Behandelten die Situation nach 3monatiger Behandlung mit Crescina deutlich gebessert hat. Bezogen auf die männlichen Probanden allein betrug der Anteil sogar 61%.
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Crescina Re-Growth Test DMG01
Fotodokumentation der von Alopezie betroffenen und mit Crescina Re-Growth behandelten Bereiche
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Crescina Re-Growth Test DMG01
Proband 46
T0
T2
T3
33
Crescina Re-Growth Test DMG01
Proband 68
T0
T2
T3
34
Crescina Re-Growth Test DMG01
Proband 71
T0
T2
T3
35
Crescina Re-Growth Ausgewählte Wirksamkeitstests
Test ECF06 Art der Studie: Beurteilung der Wirkung einer Haar-Lotion auf das Nachwachsen der Haare beim Menschen nach Applikation unter normalen Anwendungsbedingungen. Ziel: Beurteilung der Wirksamkeit von Crescina hinsichtlich des Nachwachsens der Haare bei Probanden mit androgenetisch bedingter Alopezie. Art des Tests: In-vivo-Test mit 18 Probanden. Dauer des Tests: 90 Tage Datum der Durchführung: 24. Mai 2006
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Crescina Re-Growth Test ECF06
Datum: 24. Mai 2006 An dem Test „Beurteilung der Wirkung einer Haar-Lotion auf das Nachwachsen der Haare beim Menschen nach Applikation unter normalen Anwendungsbedingungen“ nahmen 18 Probanden teil, die sich mit der Anwendung von Crescina Re-Growth gemäss Anweisungen von Labo einverstanden erklärt hatten. Die Teilnehmer waren Männer im Alter von 20 bis 55 Jahren mit androgenetisch bedingter Alopezie in den Stadien II bis IV (entspricht den Stadien I – VII auf der Hamilton-Norwood-Skala). Die Wirksamkeit wurde mithilfe des Fototrichografie-Verfahrens beurteilt. Fototrichogramme wurden zu Studienbeginn unter Baseline-Bedingungen (M0) sowie 56 Tage (M2) und 84 Tage (M3) nach Behandlungsbeginn angefertigt. Zu denselben Zeitpunkten sowie zusätzlich nach 28 Tagen (M1) wurde zur Beurteilung der Zunahme der Zugfestigkeit der Haare ein Zugtest durchgeführt. Außerdem wurde der Durchmesser der bei dem Zugtest geprüften Haare gemessen. Zu diesem Zweck wurde unter Baseline-Bedingungen (M0) sowie 84 Tage (M3) nach Behandlungsbeginn eine rasterelektronenmikroskopische (SEM-) Analyse durchgeführt.
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Crescina Re-Growth Test ECF06
Testergebnisse: -
Die Testergebnisse belegen eine signifikante Zunahme der Haare in der Anagenphase: +10,4% nach 84-tägiger Behandlung. In demselben Zeitraum (84 Tage) nahm die Zahl der Haare in der Telogenphase um signifikante 9,4% ab. Nach 2-monatiger Behandlung war bei 78% und nach 3-monatiger Behandlung bei 71% der Probanden der Anteil der Haare in der Anagenphase angestiegen. Nach 2-monatiger Behandlung zeigten 57% und nach 3-monatiger Behandlung 71% der Probanden eine Zunahme der Haardichte. Nach 3-monatiger Behandlung verloren 9 von 14 Probanden (64%) beim Zugtest weniger Haare.
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Crescina Re-Growth Test ECF06
Tabelle 3 Monate Anteil (%) der Haare in der Anagenphase
+10,4%
Anteil (%) der Haare in der Telogenphase
-9,4%
Anteil (%) der Probanden mit Zunahme der Haare in der Anagenphase
71%
Anteil (%) der Probanden mit Zunahme der Haardichte
71%
Anteil (%) der Probanden mit weniger Haarverlust beim Zugtest
64%
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Crescina Re-Growth Test ECF06
Fotodokumentation einiger behandelter Probanden
40
Crescina Re-Growth Test ECF06
Probanden-Referenz
MO
M3
41
Crescina Re-Growth Test ECF06
Probanden-Referenz 3
MO
M3
42
Crescina Re-Growth Test ECF06
Probanden-Referenz 5 MO
M3
43
Crescina Re-Growth Test ECF06
Probanden-Referenz 6
MO
M3
44
Crescina Re-Growth Test ECF06
Probanden-Referenz 7
MO
M3
45
Crescina Re-Growth Test ECF06
Probanden-Referenz 8
MO
M3
46
Crescina Re-Growth Test ECF06
Probanden-Referenz 10
MO
M3
47
Crescina Re-Growth Test ECF06
Probanden-Referenz 11
MO
M3
48
Crescina Re-Growth Test ECF06
Probanden-Referenz 13
MO
M3
49
Crescina Re-Growth Test ECF06
Elektronenmikroskopische Vergrösserung von Haaren einiger Studienteilnehmer
50
Crescina Re-Growth Test ECF06 Probanden-Referenz 5 MO 650X
M3 650X
51
Crescina Re-Growth Test ECF06 Probanden-Referenz 6 MO 650X
M3 650X
52
Crescina Re-Growth Test ECF06 Probanden-Referenz 7 MO 650X
M3 650X
53
Crescina Re-Growth Test ECF06 Probanden-Referenz 13 MO 650X
M3 650X
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Crescina Re-Growth Ausgewählte Wirksamkeitstests
Test ABH05 Art der Studie: Wirkungen von Crescina auf humane primäre epidermale und dermale Zellen. Ziel: Verifikation der Hauptwirkungen von Crescina (Cystein, Lysin und Glycoprotein) auf die Zellproliferation und die Proteinsynthese bei Fibroblasten und Keratinozyten. Art des Tests: In-vitro-Test an menschlichen Fibroblasten und Keratinozyten. Dauer des Tests: 72 Stunden Datum der Durchführung: 21. September 2005
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Crescina Re-Growth Test ABH05
Datum: 21. September 2005 In-vitro-Evaluation der stimulierenden Wirkung kosmetischer Zubereitungen für die Behandlung von Haarausfall auf menschliche Fibroblasten und Keratinozyten. In-vitro-Verfahren stellen eine interessante Alternative zu den herkömmlichen In-vivoTests zur Beurteilung der biologischen Eigenschaften von Kosmetikprodukten dar und entsprechen den gültigen europäischen Kosmetikvorschriften, die die Hersteller verpflichten, die Sicherheit und Wirksamkeit ihrer Produkte ohne Verwendung von Tieren zu prüfen (Richtlinie des Rates der Europäischen Wirtschaftsgemeinschaft Nr. 76/768/EWG vom 27.07.1976, Abl. L262 vom 27.09.1976; Richtlinie 93/35/EWG des Rates vom 14.06.1993 zur VI. Änderung der Richtlinie 76/768/EWG, Abl. L151 vom 23.06.1993). Das von uns getestete Produkt dient zur Verlängerung der Entwicklung der Haarfollikel und des Haarwuchses. Das Bindegewebe der Dermis besteht hauptsächlich aus Fibroblasten; diese bilden die im Bulbus liegende Papille des Haarfollikels, während die Keratinozyten für die Keratinsynthese verantwortlich sind. Die Entwicklung des Haarfollikels und das Wachstum der Haare beruhen auf epithelial-mesenchymalen Interaktionen zwischen den haarspezifisch differenzierten Keratinozyten der Epidermis und Clustern dermaler Fibroblasten der Papille. Die Fähigkeit der getesteten Verbindungen, die Proliferation von Fibroblasten und Keratinozyten zu fördern oder/und die Leistung der einzelnen Zellen hinsichtlich der Protein-Neosynthese zu steigern, sind von grossem Interesse bei der Formulierung eines wirksamen Produktes mit dem Ziel, die Wachstumsphase des Bulbus zu verlängern. Der In-vitro-Test an Zellen aus der Haut ist ein vereinfachtes, aber dennoch sehr informatives Modell für die Reaktionen, die in vivo auftreten können, auch wenn zu manchen Aspekten wie zum Beispiel der perkutanen Resorption keine Voraussagen möglich sind.
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Crescina Re-Growth Test ABH05
Dieser Test diente zur quantitativen Beurteilung der Wirkungen der getesteten Stoffe auf die Zellproliferation und die Gesamtproteinsynthese. Die vorliegende Studie befasst sich mit der Beurteilung der In-vitro-Wirksamkeit eines Kosmetikproduktes unter Verwendung menschlicher Keratinozyten und Fibroblasten. Zellproliferation und Proteinsynthese nach Exposition gegenüber dem Wirkstoff unter besonderen Bedingungen wurden beurteilt. Das getestete Präparat enthält die hauptsächlichen Inhaltsstoffe von Crescina: Glycoprotein, Cystein und Lysin.
57
Crescina Re-Growth Test ABH05
Ergebnisse Die Zubereitung Crescina Re-Growth stimuliert sehr wirksam Fibroblasten aus der menschlichen Haut. Typisch für diese der Dermis angehörenden Zellen ist, dass sie die Entwicklung der Haarpapille in der Haarzwiebel fördern. Das Produkt wirkt sich also in der Dermis positiv auf die Bildung von Haarpapillen aus und stimuliert darüber hinaus wirksam die Protein-Neosynthese.
58
Crescina Re-Growth Test ABH05
Zellproliferation Selbst unter den niedrigeren Testdosen war nach 24 Stunden ebenso wie nach 48 und 72 Stunden eine eindeutige positive Wirkung der Produkte auf die FibroblastenProliferation (Steigerung der Zellvitalität >100%) im Vergleich zu den unbehandelten Zellen zu beobachten. Bei den mit 2,5 mg/ml Crescina Re-Growth behandelten Fibroblasten betrug die Zunahme der Zellproliferation nach 72-stündiger Behandlung +32%.
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Crescina Re-Growth Test ABH05
Gesamtprotein-Neosynthese Nach 48-stündiger Exposition gegenüber Crescina Re-Growth in der Konzentration von 5 mg/ml war sowohl bei Fibroblasten (+20%) als auch bei Keratinozyten (+23%) eine Stimulation der Protein-Neosynthese zu beobachten.
60
Crescina Re-Growth Test ABH05
Unbehandelte Zellkultur unter dem optischen Mikroskop (350x)
Mit Crescina behandelte Zellkultur unter dem optischen Mikroskop (350x)
61
Crescina Re-Growth Test ABH05
Wachstumstest mit Fibroblasten CRESCINA RE-GROWTH 2,5 mg/ml Zunahme der Zellproliferation (%)
Zunahme der Zellproliferation nach Behandlung der Zellen mit dem Testprodukt
62
Crescina Re-Growth Test ABH05
Proteinsynthese durch Fibroblasten und Keratinozyten
Gesamtproteingehalt der behandelten (5 mg/ml) Zellen nach 48 Stunden im Vergleich zu unbehandelten Kontrollzellen
Keratinozyten
Fibroblasten
CRESCINA RE-GROWTH Zunahme (%) des Gesamtproteingehalts im Vergleich zu unbehandelten Zellen
Zunahme (%) des Gesamtproteingehalts nach 48 Stunden im Vergleich zu unbehandelten Zellen
CRESCINA RE-GROWTH
FIBROBLASTEN
KERATINOZYTEN
+20%
+23%
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Crescina Re-Growth Ausgewählte Wirksamkeitstests
Test VCB05 Art der Studie: In-vitro-Evaluation der aktivitätssteigernden Wirkung einer kosmetischen Zubereitung zur Behandlung von Haarausfall auf menschliche Fibroblasten und Keratinozyten. Ziel: Quantitative Bestimmung der Wirksamkeit des Testprodukts bezüglich der Zellproliferation und der Steigerung des Gesamtproteingehalts der Zellen. Art des Tests: In-vitro-Test unter Verwendung menschlicher Fibroblasten und Keratinozyten. Dauer des Tests: 72 Stunden Datum der Durchführung: 27. Juli 2005
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Crescina Re-Growth Test VCB05
Datum: 27. Juli 2005 Wirkungen von Crescina® auf primäre epidermale und dermale Zellen vom Menschen Zweck des Tests Eine wässrige Lösung mit den Hauptinhaltsstoffen von Crescina (Glycoprotein und die Aminosäuren Lysin und Cystein) wurde im Hinblick auf folgende Parameter getestet: 1) Proliferation der primären Keratinozyten und Fibroblasten 2) Proteinsynthese in den primären Keratinozyten und Fibroblasten
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Crescina Re-Growth Test VCB05
Testprotokoll Ziel 1: Bestimmung der Zellproliferation Die Zellen (10.000 Zellen/Vertiefung) wurden, ohne Unterschied zwischen Keratinozyten und Fibroblasten, mit der Crescina-Lösung in aufsteigender Konzentration oder mit einer negativen Kontrolllösung behandelt und auf die Wirkungen dieser Behandlung nach verschiedenen Zeitspannen (24, 48 und 72 Stunden) beobachtet. Die Zellproliferation wurde mithilfe des Alamar-Blue-Tests beurteilt: Alamar Blue ist ein Redox-Indikator, der mit der Aussendung eines fluoreszierenden Signals auf chemische Reduktionsprozesse in dem in der Kultur vorhandenen Wachstumsmedium reagiert und auf diese Weise die metabolische Aktivität anzeigt. Ziel 2: Bestimmung des Proteingehalts Keratinozyten und Fibroblasten wurden in Crescina-Lösungen mit unterschiedlichen Konzentrationen (siehe oben) bzw. in einer negativen Kontrolllösung gezüchtet, und nach verschiedenen Zeitspannen (siehe oben) wurden die Lysate gewonnen. Der Proteingehalt wurde mittels Bicinchoninsäure-(BCA-)Assay bestimmt.
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Crescina Re-Growth Test VCB05
Ergebnisse und Diskussion Ziel 1: Bestimmung der Zellproliferation Bezüglich der Keratinozytenkulturen ergab der Alamar-Blue-Assay zu den einzelnen Messzeitpunkten bei den behandelten Zellen eine Zunahme der Zellvitalität, die bei den unbehandelten Zellen nicht zu beobachten war (+54,8%, +56,3% und +61,6% nach 24-, 48- bzw. 72-stündiger Exposition gegenüber der Crescina-Lösung). Die Befunde sprechen dafür, dass Crescina die Stoffwechselaktivität der Zellen steigert und das zelluläre Energieniveau anhebt. Bezüglich der Fibroblastenkulturen ergab der Alamar-Blue-Assay nach 24-, 48- und 72-stündiger Behandlung eine Zunahme des Zellstoffwechsels, die bei den unbehandelten Zellen nicht zu beobachten war (ermittelte Maximalwerte: +58,5% nach 24 Stunden; +111,4% nach 48 Stunden; +195,7% nach 72 Stunden). Der Alamar-Blue-Assay ergab nach 24, 48 und 72 Stunden bei den behandelten Zellen eine deutliche Steigerung des Zellstoffwechsels, die bei den unbehandelten Zellen nicht zu beobachten war (ermittelte Maximalwerte: +80,3% nach 24 Stunden; +119,3% nach 48 Stunden; +91,4% nach 72 Stunden). Ziel 2: Bestimmung des Proteingehalts Bezüglich der Keratinozytenkulturen zeigte der BCA-Test bei den behandelten Zellen eine Zunahme des Proteingehalts, die bei den unbehandelten Zellen nicht zu beobachten war (ermittelte Maximalwerte: +160,3% nach 24-stündiger, +242,1% nach 48-stündiger und +73,9% nach 72-stündiger Exposition gegenüber der Crescina-Lösung).
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Crescina Re-Growth Test VCB05
Schlussfolgerungen Ziel 1: Bestimmung der Zellproliferation Crescina bewirkt eine Zunahme der Stoffwechselaktivität der Zellen (Alamar-BlueAssay) mit der Folge einer Anhebung des zellulären Energieniveaus im Vergleich zu unbehandelten Zellen. Die Beschleunigung des Zellstoffwechsels konnte auch zu einer zahlenmässigen Zunahme der Zellen führen; dies beruhte auf der längeren Lebensdauer der einzelnen Zellen im Vergleich zu der negativen Kontrolle, bei der ein hoher Zellumsatz festzustellen war. Ziel 2: Bestimmung des Proteingehalts Crescina bewirkt bei den behandelten Keratinozyten eine deutliche Zunahme des Proteingehalts, die bei den Zellen der negativen Kontrolle nicht zu beobachten war. Die von Crescina induzierte Zunahme des Proteingehalts beruht weniger auf dem Mechanismus der Proliferation als vielmehr auf der verbesserten Vitalität der Zellen.
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Crescina Re-Growth Test VCB05
Wirkungen von Crescina auf die Proliferation menschlicher Keratinozyten (48 Std., Alamar-Blue)
Wirkungen von Crescina auf die Proliferation menschlicher Keratinozyten (72 Std., Alamar-Blue)
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Crescina Re-Growth Test VCB05
Wirkungen von Crescina auf die Proliferation menschlicher Fibroblasten (1000 Zellen, 48 Std., Alamar-Blue)
Wirkungen von Crescina auf die Proliferation menschlicher Fibroblasten (1000 Zellen, 72 Std., Alamar-Blue)
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Crescina Re-Growth Test VCB05
Wirkungen von Crescina auf den Proteingehalt menschlicher Keratinozyten (24 Std.)
Wirkungen von Crescina auf den Proteingehalt menschlicher Keratinozyten (48 Std.)
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Crescina Re-Growth Test VCB05
Wirkungen von Crescina auf den Proteingehalt menschlicher Fibroblasten (72 Std.)
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