U n iv e rs id a d V e ra c ru z a n a

Inmediata: puede ser causada por tension, convulsiones, personas que han recibido algun tipo de anestesia, ansiedad, administracion de adrenalina. > Aguda: puede ser por algun tipo de infeccion, necrosis tisular (infarto), anemia hemolftica, intoxicacion por medicamentos, o pacientes que esten tomando corticoesteroides. > Cronica: pacientes con inflamacion cronica, glomerunolefritis y neoplasias. NEUTROPE > Production deficiente: en trastornos de celulas precursoras, en deficiencia de

vitamina

B12

o

acido

folico,

quimioterapia,

radioterapia,

en

enfermedades congenitas o pancreaticas. > Incremento

en

la

destruccion

celular:

en

infecciones

graves,

en

hiperesplenismo y reacciones inmunitarias muy fuertes. EOSINOFILIAf : > Infestacion parasitaria, en reacciones alergicas, en infecciones tipo lepra, brucelosis, tuberculosis, o enfermedades micoticas, asma, reacciones medicamentosas, dermatitis, neoplasias y trastornos intestinales. EOSINOPENIA > Es muy raro, principalmente en situaciones muy fuertes de tension, en reacciones inflamatorias, en administracion de glucocorticoides, adrenalina o prostaglandinas. BASOFILIA |

:

> En trastornos

mieloproliferativos

cronicos,

enfermedades

inflamatorias y despues de la exposicion de radiaciones. -50-

intestinales,

MANUAL DE PRACTICAS DE LABORATORIO DE CIENCIAS MORFOLQGICAS Y FISIOLOGICAS M ONOCITOSISf: > Sfndromes mielodisplacicos, leucemias agudas, tumores linfocitarios, en anemia hemdlftica, en neutropenia cronica. LINFOCITOSIsf : > En mononucleosis infecciosa, en infecciones por burdetella pertusis, en infecciones por citomegalovirus, en toxoplasmosis, en infecciones virales como varicela y hepatitis, en sffilis, en periodos de convalecencia, en linfocemia aguda, en leucemia linfocitica cronica y en linfoma. LINFOPENIA j : > En neoplasias diseminadas, en enfermedades de tejido conectivO, con lupus eritematoso sistematica, en pacientes con quimioterapia, radioterapia, administracion

de

corticoesteroides,

enfermedades

inmunodeficientes

casos

de

congenitas

o

tuberculosis,

en

adquiridas,

en

enfermedades agudas, cronicas y en casos de tension y esfuerzos. CUESTIONARIO. 1 ^Cual es la utilidad de un frotis sangufneo? R= El frotis sangufneo sirve para observar las celulas sangufneas (eritrocitos, leucocitos y plaquetas) y evaluar su morfologfa y cantidad en la sangre periferica, para asf ayudar a confirmar el diagnostico de diferentes afecciones de la sangre. 2.- iC om o se tine un frotis sangufneo? R= Despues de realizar el extendido, se deja secar, y se Neva a tenir con colorante de Writght durante 5 minutos, posteriormente, anadir solucion buffer durante 10 minutos, enjuagar con agua corriente y dejar secar al aire.

-5 1 -

MANUAL DE PRACTI'CAS DE LABORATORIO DE CIENCIAS MORFOLQGICAS Y FISIOLOG1CAS PRACTICA Ns 8 DETERMINACION DE HEMATOCRITO SUSTENTO TEORICO. El hematocrito es el porcentaje del volumen de la sangre que ocupa la fraccion de los globulos rojos. Las cifras normales de hematocrito en personas oscilan entre: hombres, de 36,0% a 45,0%; mujeres, de 36,1% a 44,3%, dependiendo de diversos factores fisiologicos, como la edad y la condicion fisica del sujeto. Su determination se basa en la separation de los eritrocitos y el plasma mediante una centrifugation capaz de empacar a los hematfes en el menor volumen posible; este sera llevado al 100% con el total de la sangre, por lo que el resultado sera expresado en porcentaje. El volumen del plasma que queda atrapado entre las celulas debe ser el menor posible para evitar mediciones erroneas. Es obvio, que el anticoagulante utilizado para realizar esta determinacion sea capaz de mantener inalterado el volumen eritrocitario. La determinacion de hematocrito es un examen de sangre que mide el tarnaho y numero de globulos rojos, al igual que suministra un porcentaje de estos globulos que se encuentran ,en toda la sangre. Este examen casi siempre se ordena como parte de un conteo sanguineo completo. El examen visual del plasma sobrenadante en el tubo de hematocrito puede aportar information valiosa relativa a la causa de anemia. Los niveles elevados de bilirrubina

serica,

caracterfsticos

de

pacientes

con

anemia

hemolitica

o

megaloblastica, se detectan por el color amarillo (icterico) del plasma. En las deficiencias de hierro y en los procesos inflamatorios, el plasma se observa mas palido de lo normal. Los aumentos en el numero de leucocitos y plaquetas pueden apreciarse, como una delgada capa de celulas grises, situada por encima de los eritrocitos empacados.

-52-

MANUAL DE PRACTICAS DE LABORATORIO DE CIENCIAS MORFOLOGICAS Y FISIOLOGICAS Es importante enfatizar que el hematocrito refleja la concentration de los eritrocitos pero no la masa total de estos. Es asf como el hematocrito esta bajo en la hiperhidremia del embarazo sin que la masa total de eritrocitos circulante este reducida; y puede estar normal o elevado en los casos de shock hipovolemico acompahado de hemoconcentracion aunque la masa total de eritrocitos pueda estar disminuida en forma importante debido a la perdida de sangre caracterfstica de esta situation clfnica.

OBJETIVO. Realizar y aprender la tecnica de la determinacion de hematocrito, en base a los valores de referencia, tanto en hombres como en mujeres. Asf como identificar la importancia y utilidad clfnica de la determinacion de hematocrito, ejecutando correctamente el macro y micrometodo.

DESCRIPCION DE LA PRACTICA. En esta practica se busca realizar de manera correcta la determinacion de hematocrito, mediante el macro y micrometodo. TECNICA (MICROHEMATOCRITO). 1. Mezclar la sangre por inmersion, por lo menos durante 5 min, no agitarla. 2. Llenar las dos terceras partes de un tubo capilar por el lado no marcado. 3. Sellar el extremo opuesto (marcado por una banda azul) con la flama del mechero. 4. Centrifugar a 12, 000 rpm de 5 a 8 min, se lee usando una regia, las alturas del volumen y del volumen total de la muestra. 5. Se mide toda la muestra, ese sera el 100%, posteriormente se mide solo la parte roja (eritrocitos), hasta antes de la parte blanca (leucocitos). 6. La determinacion se hace mediante una regia de tres, multiplicando el valor de lo eritrocitos por 100 y dividiendolo entre el volumen total de la muestra. -53-

MANUAL DE PRACTICAS DE LABORATORIO DE CIENCIAS MORFOLOGICAS Y FISIOLOGICAS

HEMATOCRITO= ALTURA DE ERITROCITOS (mm)

X100

ALTURA DEL VOLUMEN TOTAL (mm)

1. El valor resultante, sera expresado en porcentaje. 2.

Tambien

se

puede

obtener

el

resultado,

utilizando

un

lector de

microhematocrito, en el cual se coloca el capilar y se mide el total tanto del paquete globular, como de los demas componentes sangufneos. Solamente se mide el paquete globular.

VOLUMEN TOTAL DE LA MUESTRA: 5.1 cm

Ulifatttes rojos

VOLUMEN DE ERITROCITOS: 2.4 cm

TUBO DESPUES DE HABERSE CENTRIFUGADO CALC ULOS:

(2.4cm) (100%)

5.1CM-

-►100%

2.4CM-

-► x

= (47.06%

5.1cm -54-

MANUAL DE PRACTICAS DE LABORATORIO DE CIENCIAS MORFOLOGICAS Y FISIQLQGICAS VENTAJAS: •

El plasma que queda atrapado entre las celulas es mmimo (1%)

•

Resultados muy predecibles.

DESVENTAJAS: •

Relativamente mas diffcil de realizar, sobre todo el sellado y dominar la lectura.

LECTOR DE MICROHEMATOCRITO TECNICA (MACROHEMATOCRITO). 1. Mezclar la sangre por inmersion por lo menos durante 5 minutos. NO AGITARLA. 2. Llenar el tubo de Wintrobe hasta la marca de “0-10” usando una jeringa con canula larga o una pipeta Pasteur. Es importante vigilar que no se formen burbujas en la columna de sangre o en el fondo del tubo al llenarlo. Esto se logra haciendo resbalar la sangre por las paredes del tubo, iniciando en el fondo y sacando la canula a medida que se va llenando. 3. Centrifugar el tubo a 3000 rpm durante 30 minutos. La velocidad de centrifugacion se debera ajustar al radio de la centrifuga, considerando que siempre se debera tener una fuerza centrifuga relativa mayor a 2000 G. -5 5 -

MANUAL DE PRACTICAS DE LABORATORIO DE CIENCIAS MORFOLOGICAS Y FISIOLOGICAS 4. Leer el Ifmite superior de la columna de eritrocitos, inmediatamente por debajo de la capa gris de leucocitos, en la columna de la derecha (escala ascendente de 0 a 10 cm). 5. El resultado se informa en milfmetros por ciento. VENTAJAS: • •

Es un metodo estandarizado. i Sencillo de realizar y de facil lectura.

DESVENTAJAS: I

•

El plasma atrapado entre celulas es alrededor del 3% del volumen. i

i

•

Puede dar resultados inconstantes debido a que existen alteraciones morfologicas, el plasma que queda atrapado entre celulas se incrementa.

VALORES DE REFERENCIA: Al igual que con la hemoglobina y los eritrocitos, se modifican con la edad, sexo y altura sobre el nivel del mar. En la CD. De Xalapa, Ver. a 1400 m sobre el nivel del mar, son los siguientes: HOMBRES

40.7 A 50.3%

MUJERES

36.1 A 44.6%

NINOS DE 3 MESES A 10 ANOS

37%

NINOS DE 10 A 15 ANOS

39%

EQUIPO REQUERIDO. •

Microcentrifuga para tubos capilares. Centrifuga -56-

MANUAL DE PRACTICAS DE LABORATORIO DE CIENCIAS MORFOLOGICAS Y FISIOLOGICAS

MATERIAL. Tubos capilares Mechero Regia Vacutainer o material para extraction. Tubos de Wintrobe Pipeta Pasteur con bulbo Mechero de Bunsen Gradilla

MATERIAL BIOLOGICO. •

Sangre obtenida con EDTA

CUESTIONARIO. 1. iQ ue es el hematocrito? R= El hematocrito es el porcentaje del volumen de la sangre que ocupa la fraction de los globulos rojos.

2. ^Que importancia cllnica tiene el hematocrito? R= Sirve para el diagnostico de la anemia, en conjunto con la determination de hemoglobina. -57-

MANUAL DE PRACTICAS DE LABORATORIO DE CIENCIAS MORFOLOG1CAS Y FISIOLQGICAS PRACTICA Ns 9 RECUENTO DE GLOBULOS ROJOS

SUSTENTO TEORICO. La muestra de sangre se diluye lo suficiente para contar cifras legibles utilizando un liquido de dilucion isotonico que permita ademas identificarlos adecuadamente, impidiendo la aglutinacion y la hemolisis y destruya otros elementos que pudieran interferir en el recuento, que se realiza en la camara de Neubauer, cuya capacidad es conocida. El recuento de eritrocitos consiste en la cuenta del numero de celulas sangufneas rojas por volumen de unidad en una muestra de sangre venosa. Se obtiene mediante medicion directa y como tal no define ninguna patologfa; es indispensable para obtener el volumen corpuscular medio VCM, de todas maneras este parametro es obtenido directamente por el equipo para obtener el tamano promedio de los eritrocitos y la hemoglobina corpuscular media que si es un parametro calculado a partir de la hemoglobina y el recuento de globulos rojos. OBJETIVO. Identificar la importancia y utilidad clfnica del recuento de eritrocitos, asf mismo ejecutar correctamente el recuento de globulos rojos en muestras de sangre.

DESCRIPCION DE LA PRACTICA. A partir de una muestra de sangre con EDTA, se procedera a realizar un conteo de celulas rojas, siguiendo la tecnica estandarizada, y los calculos establecidos.

-58-

MANUAL DE PRACTICAS DE LABORATORIO DE CIENCIAS MORFOLOGICAS Y FISIOLOGICAS TECNICA. 1. Mezclar la sangre por lo menos durante 5 minutos. 2. Llenar la pipeta de toma hasta la marca 0.5. 3. Diluir con liquido de Hayen, llenando hasta la marca 101; se debe evitar la formacion de burbujas, que alterarfan la dilucion. Para ello, se recomienda rotar la pipeta al aspirar y mantenerla en posicion vertical. El exceso en la punta se elimina con papel secante. Con esto obtenemos una dilucion de 1 :200 . 4. Agitar durante un minuto. 5. Inmediatamente, eliminar las cuatro primeras gotas y cargar la camara de Neubauer en sus dos cuadriculas. Dejar reposar un minuto a temperatura ambiente para permitir la sedimentacion de las celulas. 6. Contar al microscopio con el objetivo seco debil o fuerte, verificando primero que la distribution de las celulas sea homogenea; en caso contrario, se debera repetir la prueba. La cuenta se realiza en 80 cuadros pequenos del area central

de la camara, seleccionando para ello un cuadro mediano

central y cuatro angulares. 7. Multiplicar el numero de eritrocitos contados por 10,000 para obtener el total de globulos rojos por mm3 de sangre. 8. La formula para realizar los calculos es la siguiente: NX200X10X400 = NX 10,000 80 DONDE: N: es el numero de eritrocitos contados. 200: es el titulo de dilucion. 10: correction de la profundidad de la camara para ajustar el volumen a 1 mm3 -59-

MANUAL DE PRACTICAS DE LABORATORIO DE CIENCIAS MORFOLOGICAS Y FISIOLOGICAS 400: total de cuadros pequenos del cuadro central de la camara. 80: total de cuadros pequenos contados.

PIPETA DE TOMA PARA GLOBULOS ROJOS Y LEUCOCITOS

L: CUADROS PARA LEUCOCITOS

E: CUADROS PARA ERITROCITOS.

-6 0 -

MANUAL DE PRACTICAS DE LABORATORIO DE CIENCIAS MORFOLOGICAS Y FISIOLOGICAS areas en donde se cuentan globulos blancos

| areas en donde se cuentan eritrocitos

CAMARA DE NEUBAUER

VALORES DE REFERENCIA: Al igual que con la hemoglobina, se modifican con la edad, el sexo y la altura sobre el nivel del mar. En la Cd. de Xalapa Veracruz, a 1400 m sobre el nivel del mar, son los siguientes: -6 1 -

MANUAL DE PRACTICAS DE LABORATORIO DE CIENCIAS MORFOLOGICAS Y FISIOLOGICAS ERITROCITOS VALORES DE REFERENCIA EDAD

SEXO

VALORES (X105/mm3)

RECIEN NACIDO

M ASC0 FEM

4.5 a 6.5

1 MES A 2 ANOS

M ASC0 FEM

3.5 a 4.0

3 A 10 ANOS

MASC 0 FEM

4.1 a 5.0

11 A 60 ANOS

FEM

4.0 a 5.2

11 A 60 ANOS

MASC

4.6 a 5.8

MAS DE 60 ANOS

MASC 0 FEM

4.1 a 5.0

En la siguiente tabla, se muestran los valores promedio de eritrocitos a diferentes alturas sobre el nivel del mar: ERITROCITOS VALORES DE REFERENCIA A DIFERENTES ALTITUDES MUJERES NIVEL DEL

HOMBRES

MEDIA

RANGO

MEDIA

RANGO

4.65

3.88 a 5.42

5.15

4.39 a 5.91

1000

4.69

4.17 a 5.21

5.28

4.63 a 5.93

1860

4.92

4.33 a 5.51

5.76

4.94 a 6.58

2220

4.99

4.27 a 5.71

5.69

5.10 a 6.28

2670

4.95

4.31 a 5.59

5.63

4.95 a 6.31

MAR NIVEL DEL MAR

EQUIPOY MATERIAL •

Microscopio.

•

Pipetas de thoma para globulos rojos con boquilla.

•

Camara de Neubauer. -6 2 -

MANUAL DE PRACTICAS DE LABORATORIO DE CIENCIAS MORFOLOGICAS Y FISIOLOGICAS •

Gradilla.

•

Tubos de ensaye de 13X100 mm.

•

Pipeta serologica de 5 ml.

MATERIAL BIOLOGICO. •

Sangre con E.D.T.A

REACTIVOS. •

Liquido diluyente de Hayen.

CUESTIONARIO. 1 i En que consiste el recuento de globulos rojos? R= El recuento

de eritrocitos consiste en la cuenta del numero de celulas

sangumeas rojas por volumen de unidad en una muestra de sangre venosa. 2.- ^Por que es diluida la muestra? R= La muestra de sangre se diluye lo suficiente para contar cifras legibles utilizando un liquido de dilucion isotonico que permita ademas identificarlos adecuadamente, impidiendo la aglutinacion y la hemolisis y destruya otros elementos que pudieran interferir en el recuento, que se realiza en la camara de Neubauer, cuya capacidad es conocida.

-6 3 -

MANUAL DE PRACTICAS DE LABORATORIO DE CIENCIAS MORFOLOGICAS Y FISIOLOGICAS PRACTICA N9 10 LIQUIDO CEFALORRAQUIDEO. SUSTENTO TEORICO. Aproximadamente el 70% del Ifquido cefalorraqufdeo se forma en los plexos coroideos ventriculares a traves de un proceso combinado de secrecion activa y ultrafiltracion a partir del plasma. Alrededor del 30% de LCR se forma como Ifquido intersticial, elaborado dentro los espacios intracelulares del cerebro y de la medula espinal. La reabsorcion de LCR se produce a traves de las vellosidades aracnoideas de los senos durales. EL LIQUIDOCEFALORRAQUIDEO ES: • Un Ifquido transparente e incoloro que se produce dentro de las cavidades o ventrfculos del cerebro, por el plexo coroides y el plasma sangufneo que se derrama. • Bana al cerebro, la medula espinal y las meninges. La acumulacion excesiva de Ifquido cerebroespinal resulta en la dilatacion anormal de los espacios en el cerebro llamados ventrfculos. Esta dilatacion ocasiona una presion potencialmente perjudicial en los tejidos del cerebro y es causante de la hidrocefalia. Su production es aproximadamente 500 ml diarios, aunque el sistema solo cuente con 120 a 150 ml. El LCR es sustituido en su totalidad tres veces diarias, cada 6 a 7 horas es renovado completamente. La funcion principal del LCR es mantener flotando al encefalo, actuando como amortiguador. Del mismo modo sirve de vehfculo para eliminar los desechos y fluir entre el craneo y al espina dorsal para compensar los cambios en el volumen de sangre intracraneal y en menor grado, desechos y nutrir al cerebro.

-64-

sirve como vehfculo para eliminar

MANUAL DE PRACTICAS DE LABORATORIO DE CIENCIAS MORFOLOGICAS Y FISIOLOGICAS COMPOSIClbN. •

Sodio.

•

Cloro.

•

Magnesio.

•

Potasio.

•

Bicarbonato y fosfatos.

•

Glucosa.

•

Protemas.

OBTENCION DE LIQUIDO CEFALORRAQUIDEO MEDIANTE TECNICA DE PUNCION LUMBAR: 1. -Se selecciona el sitio de puncion, generalmente en la L-4 Y L-5 o mas abajo, en el espacio L-5 se observa una pequena saliente osea que ayuda localizar el sitio de puncion, en este sitio se limpia con alguna solucion antiseptica y el area circundante se cubre con una sabana esteril de manera que no obstruya el campo visual. 2. A continuation se inyecta un anestesico local lentamente en la dermis alrededor del sitio elegido para la puncion. 3. Posteriormente se introduce una aguja especial con estilete en la linea media entre ambas apofisis del espacio lumbar hasta que penetre en el espacio subracnoideo. 4. Con la aguja adentro del espacio, se extrae el estilete y se coloca en su lugar un manometro para medir la presion LCR.

5. Se extraen de 10-20 ML de LCR que se dividen en 3 muestras de 2 a 3ml cada una en tubos distintos esteriles y con rotulos secuenciales:

-65-

MANUAL DE PRACTICAS DE LABO RATO RIO DE CIENCIAS MORFOLOGICAS Y FISIOLOGICAS •

El tubo 1 se utiliza para pruebas bioquimicas y serologicas.

•

El tubo 2 para microbiologia.

•

El tubo 3 para pruebas citologicas.

6. Al retirar la aguja se mide nuevamente la presion, en caso de encontrar hipertension intracraneanal se extrae muy poco Ifquido por el riesgo de que el tallo cerebral quede fuera de lugar. 7. Se coloca una gasa esteril en el sitio de puncion. 8. Los tubos.se rotulan con el # secuencial 1, 2, 3, el nombre del paciente y la fecha enviandose inmediatamente al laboratorio. Existen otros metodos alternatives que se utilizan en casos especiales, como la puncion sisternal o suboxipital, que implica ser una puncion debajo del hueco occipital. Esto resulta peligroso, porque esta muy cerca del tronco encefalico, siempre es realizado con fluoroscopia (rayos X especiales). La puncion ventricular, es menos comun, se realiza en el quirofano, en la cual se hace un orificio en el craneo y se inserta una aguja directamente en uno de los ventriculos del cerebro.

Se recotecta el .liquido. cefalorraquideo

IMPORTANCE CLINICA: Las infecciones del SNC se dividen en varias categorfas que pueden ser diferenciadas facilmente entre si mediante el examen del LCR.

-66-

MANUAL DE PRACTICAS DE LABORATORIO DE CIENCIAS MORFOLOGICAS Y FISIOLQGICAS La meningitis es una inflamacion caracterizada por la inflamacion de las meninges. La causa mas frecuente de este tipo de inflamacion es a causa de bacterias (Neisseria meningitidis, Haemophilius influenza, Streptococus pneumonae) las cuales progresan de una manera muy rapida llevando a un fatal desenlace. Estos agentes Ilegan por medio de la nariz o la boca, alojandose en las meninges y Ifquido cerebroespinal. Las meningitis causadas por hongos, intoxicaciones, medicamentos o virus, son menos frecuentes, y por lo regular siguiendo un tratamiento adecuado pueden curarse mas facilmente, a diferencia de las meningitis bacterianas. Aunque cualquier persona puede contraer meningitis, es una enfermedad especialmente frecuente en ninos y personas inmunosuprimidas. Los sfntomas mas frecuentes son dolor de cabeza y rigidez de la nuca que tiende a asociarse con fiebre, intolerancia anormal a la luz o a los sonidos y trastornos de la conciencia. A menudo, especialmente en ninos pequenos, solo se presentan sfntomas inespecfficos, tales como irritabilidad y somnolencia. Si se presentan erupciones en la piel, puede indicar una forma particular de meningitis, como la meningococcemia.

Existen diferentes maneras de prevenir la meningitis. Algunas vacunas existentes contra la meningitis en el mercado solo protegen un solo tipo de bacteria determinada. Existen vacunas contra el meningococo C, otra que protege contra el

Haemophilus influenza tipo

B (Hib) y, tambien, la del neumococo. Es por ello que

cuando uno recibe una vacuna contra la meningitis (actualmente referida a la del meningococo C), solo quedara inmune frente al tipo de germen pero no frente al resto de las multiples posibilidades. Es decir, que aunque recibamos muchas vacunas contra la meningitis, siempre es posible contraer meningitis por otros germenes o causantes externos.

-67-

MANUAL DE PRACTICAS DE LABORATORIO DE CIENCIAS MORFOLQGICAS Y FISIOLOGICAS PRUEBAS DE LABORATORIO: -Examen ffsico del LCR: •

Aspecto: en condiciones normales, el LCR es cristalino, con un aspecto y viscosidad comparables al agua. Los leucocitos o eritrocitos pueden producir un LCR opaco o turbio. La turbidez a su vez, puede estar causada por microorganismos (bacterias u hongos).

•

Color: el LCR es totalmente incoloro, patologicamente adquiere coloracion amarillenta o rojiza.

•

Densidad: 1.oo6- 1.008.

-Examen quimico de LCR: •

Glucosa: 50 a 75 mg/100ml en adultos, y en ninos de 70 a 90 mg/100ml.

•

Protefnas: de 15 a 40 mg/100 ml.

•

Cloruros: 700 a 750 mg/100 ml.

-Examen citologico: •

Cuenta celular total en adultos 0-10/mm3 y en ninos de 0-20/mm3.

•

Observacion de celulas epiteliales.

•

En condiciones normales, el LCR no presenta celularidad.

-Examen microbiologico: •

Tincion de Gram.

•

Tincion con tinta china.

•

Cultivo.

-68-

:

MANUAL DE PRACTiCAS DE LABORATORIO DE CIENCIAS MORFOLQGICAS Y FISIOLQG1CAS OBJETIVO. Conocer la importancia clfnica que tiene el Ifquido cefalorraqufdeo (LCR), asf como las pruebas qufmicas, citologicas y microbiologicas que se le realizan; del mismo modo aprender a evaluar el aspecto ffsico y conocer la manera de extraction de LCR. DESCRIPCION DE LA PRACTICA. En esta practica se busca llevar a cabo las diferentes pruebas que se le realizan al LCR, como son el examen ffsico, qufmico y microbiologico. TECNICA. > EXAMEN FISICO: 1. Observar el aspecto y color del Ifquido cefalorraqufdeo. 2. Medir el volumen del LCR. 3. Medir la densidad del LCR, colocando una gota en el refractometro, y se observa a contra luz la medida que marca la densidad. 4. Medir el pH del LCR colocando una gota sobre la tira reactiva indicadora de pH.

TIRA REACTIVA INDICADORA DE pH -69-

MANUAL DE PRACTICAS DE LABORATORIO DE CIENCIAS MORFOLOGICAS Y FISIOLOGICAS

SE OBSERVA LA DENSIDAD EN EL REFRACTOMETRO.

>

EXAMEN CITOLOGICO: 1. Con la ayuda de una pipeta Pasteur, se coloca una pequena gota de liquido cefalorraquideo en la camara de neubauer. 2. Se le coloca el cubreobjetos a la camara de neubauer. 3. Se enfoca la camara de neubauer en el microscopio, en el objetivo de 40X y se observa si existe celularidad.

-70-

MANUAL DE PRACTICAS DE LABORATORIO DE CIENCIAS MORFOLOGICAS Y FISIOLOGICAS > EXAMEN MICROBIOLOGICO: 1. Se realiza un frotis de LCR y se fija con calor, cuidando no quemar la muestra. 2. Posteriormente, se tine mediante la tecnica de Gram: 1 minuto de cristal violeta, se enjuaga con agua corriente, 1 minuto de lugol y se enjuaga con agua corriente, se decolora con alcohol acetona hasta que deje de salir hilos del colorante y por ultimo se tine con safranina durante 30 s, se enjuaga con agua corriente y se deja secar al aire. 3. Se observa al microscopio en 100X con aceite de inmersion para ver si existe la presencia de bacterias. MATERIAL DE LABORATORIO. •

Pipeta Pasteur.

•

Camara de Neubauer.

•

Lampara de alcohol.

•

Portaobtejos:

•

Cubreobjetos.

•

Refractometro.

•

Microscopio.

REACTIVOS. •

Colorante cristal violeta.

•

Yodo lugol

•

Alcohol acetona.

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MANUAL DE PRACTICAS DE LABORATORIO DE CIENCIAS MORFOLOGICAS Y FISIOLQGICAS •

Safranina.

MATERIAL BIOLOGICO. •

Muestra de LCR.

CUESTIONARIO. 1.