UNIVERSITÀ DEGLI STUDI DI MILANO SCUOLA DI DOTTORATO IN MEDICINA MOLECOLARE

CICLO XXVI Anno Accademico 2012/2013

TESI DI DOTTORATO DI RICERCA Settore disciplinare MED08

Expression analysis of microRNA in prostate cancer and identification of novel diagnostic biomarker

Dottorando : Irene FORNO Matricola N°R09146 TUTORE : Silvano BOSARI

DIRETTORE DEL DOTTORATO: Mario CLERICI

Sommario

Introduzione: Il tumore alla prostata (PCa) è una delle neoplasie più comuni tra gli uomini nel mondo occidentale e, globalmente, rappresenta la sesta causa di morte dovuta a cancro. L'approccio diagnostico attuale si basa sulla misurazione dei livelli sierici dell’antigene prostatico PSA (prostate specific antigen), nonostante recenti studi clinici abbiano dimostrato che questo marcatore non riduce significativamente la mortalità associata a PCa. In questo scenario abbiamo ipotizzato che i microRNA possano essere nuovi potenziali biomarcatori di PCa. Scopo

del

lavoro:

L'identificazione

di

microRNA,

coinvolti

nella

progressione neoplastica del tumore prostatico come nuovi biomarcatori diagnostici aggiuntivi al PSA, prognostici e predittivi di aggressività tumorale. La nostra strategia sperimentale ha previsto l’uso di linee cellulari di prostata non tumorigeniche e a diverso grado di malignità, modelli murini di carcinoma prostatico e casistiche di pazienti affetti da PCa. Materiali e metodi: Linee cellulari commerciali: analisi dell'espressione globale dei miRNA tramite piattaforma low-density array nelle linee di PCa (LNCap, PC3, DU145), normali o iperplastiche (RWPE-1 e BPH-1). Casistiche cliniche: analisi di miRNA selezionati, in un set di pazienti (n=58) nei tessuti di parenchima normale, pre-neoplastico (prostatic intraepithelial neoplasia, PIN) e tumorale. I risultati ottenuti sono stati correlati a parametri clinicopatologici dei pazienti. I potenziali target proteici dei miRNA selezionati sono stati valutati in una casistica più ampia mediante tissue micro-array (TMA). Modello murino transgenico TRAMP: analisi globale di espressione dei miRNA in ghiandole di PIN e tumorali, e nello stroma associato. Linee cellulari primarie: ottenimento di linee di fibroblasti derivate da resezioni chirurgiche di PCa (n=10). Risultati: Dallo screening nelle linee cellulari abbiamo selezionato 23 miRNA poi valutati nei 58 pazienti. Tredici miRNA hanno mostrato differenze di espressione significative (p