[UK]

Monospecific Anti-Human-Globulins Anti-IgG, Anti-IgM, Anti-C3, Anti-C3d, Anti-C4 (rabbit, polyclonal) Anti-IgA (rabbit, polyclonal) For the detection of the respective immunoglobulin classes in a direct or indirect antiglobulin-test Tube test [REF]

804 501

5 ml

Anti-IgG

[REF]

804 521

2 ml

Anti-IgM

[REF]

804 541

2 ml

Anti-IgA

[REF]

804 561

2 ml

Anti-C3

[REF]

804 581

2 ml

Anti-C4

[REF]

804 601

5 ml

Anti-C3d

[PRES] Preservative: < 0.1 % NaN3 [ACT]

Activity / Min.titer

[IVD] Diagnostic reagent for in vitro use only To be used by trained laboratory personnel only. The [ACT] is printed on the vial label. Symbols are used according to regulation EN 980. Symbols not contained in regulation EN 980 are described. Test purpose Monospecific anti-human-globulins (Anti-IgG, Anti-IgM, Anti-C3, Anti-C3d, AntiC4, Anti-IgA) are used for the direct antiglobulin-test to demonstrate the in vivo coating of red blood cells with antibodies of the respective immunoglobulin classes as in the diagnosis of autoimmune hemolytic anemia, Morbus haemolyticus neonatorum and hemolytic transfusion reactions. The indirect antiglobulin-test is used to demonstrate the in-vitro coating of red blood cells with antibodies, antibody detection and identification as well as compatibility testing (cross-matching). Test principle The test principle is a hemagglutination test. Monospecific anti-human-globulin acts as a link between the antibody coating of the respective antibody class and/or complement coating of neighboring red cells and leads to agglutination. Uncoated red cells will not agglutinate. Reagent Monospecific anti-human-globulins are not of human origin. They are antibodies against the respective immunoglobulin class or complement components. They agglutinate in a saline medium, are reactive at room temperature and are suited for use in tube tests. Material required but not supplied • Pipettes (drop volume 40-50 μl) • Isotonic saline solution • IgG-coated red cells (e.g. Coombscell-E [REF] 816 030) • Glass tubes • Laboratory centrifuge Sample material Blood samples should be taken following general blood sampling guidelines. Direct antiglobulin-test: Use a fresh blood specimen preferably collected in EDTA. EDTA anticoagulated blood is used to prevent in-vitro fixation of complement which could cause false positive results. Test procedure Prior to use all reagents must be brought up to room temperature. A. Direct Antiglobulin-test Tube Test 1. Prepare a 3 – 5 % suspension of the red cells in isotonic saline. 2. Wash 1 drop of this red cell suspension 3 times, umbilical cord blood 6 times, with isotonic saline. Remove as much wash solution in the last step as possible. 3. Add 2 drops of monospecific antihuman globulin and mix. 4. Centrifuge for 2 minutes at 150 - 200 x g or 20 seconds at 800 - 1000 x g. 5. Gently dislodge the cell button and observe for agglutination. Control for anti-IgG in case of negative result 6. Add 1 drop of IgG-coated cells (e.g. Coombscell-E). 7. Centrifuge for 2 minutes at 150 - 200 x g or 20 seconds at 800 - 1000 x g. 8. Gently dislodge the cell button and observe for agglutination. Positive reaction: The results of the direct antiglobulin-test can be considered valid. Negative reaction: A technical error was made and the test must be repeated. Note After addition of Anti-Human-Globulin immediate centrifugation and reading is recommended since an IgG coating can cause weak reactions due to incubation. For direct antiglobulin-tests a weak complement coating can be increased by incubating (5-10 minutes at room temperature) and repeated centrifugation. B. Indirect Antiglobulin-test Tube Test 1. Suspend red cells to be tested 3 - 5 % in isotonic saline.

2. 3. 4. 5. 6. 7.

In an appropriately marked tube add 1 drop of red cell suspension (or of red test cells) and add 2 drops serum to be tested (or 1 drop of test reagent). Incubate for 30-60 minutes at 37°C. Wash the cells 3 times with isotonic saline. Decant supernatant saline completely. Add 2 drops of monospecific Anti-Human-Globulin to the red cell sedi-ment and mix. Centrifuge for 2 minutes at 150 - 200 x g or 20 seconds at 800 - 1000 x g. Gently dislodge the cell button and observe for agglutination.

Control for anti-IgG in case of negative result 8. Add 1 drop of IgG-coated cells (e.g. Coombscell-E). 9. Centrifuge for 2 minutes at 150 - 200 x g or 20 seconds at 800 - 1000 x g. 10. Gently dislodge the cell button and observe for agglutination. Positive reaction: The results of the indirect antiglobulin-test can be considered valid. Negative reaction: A technical error was made and the test must be repeated. Interpretation of results Evaluation of the reaction strength is carried out according to the Technical Manual (2): Reaction strength Agglutination 4+ One single agglutinate. No free red cells. 3+ Strong reaction. Some large agglutinates. 2+ Medium-size agglutinates, no free red cells. 1+ Numerous small agglutinates against a background of free red cells. +/Just a few macroscopically detectable agglutinates within red cell suspension. Numerous microscopically detectable agglutinates. Homogenous red cell suspension without detectable agglutinates. Performance characteristics and limitations of the method In case of negative results in a direct or indirect antiglobulin-test, a repetition with antibody coated test cells should be carried out. A negative control result is caused by either errors in the test procedure or a decrease of the reagent’s reactivity. In case of questionable results of unknown origin our Bio-Rad Service will assist you (phone: +49-6103-3130-611). Shelf life After opening the reagent the product can be stored until its expiry date under proper storage conditions (2..8°C). The expiry date is printed on the label. Do not use damaged vials. Warning and precautions Turbidity or other visible changes may indicate a bacterial contamination. In this case the reagent must be discarded. The cause for turbidity must be examined by the manufacturer. All handling techniques are to be performed according to the manufacturer’s instructions. If not, it is the sole responsibility of the user. Used tests must be discarded as hazardous material. Waste management according to national guidelines. Monospecific Anti-Human-Globulins do not contain materials of human origin. An infection with hepatitis, HIV or other infectious agents can be considered impossible. Nevertheless, all test reagents of biological origin must be regarded as potential transmitters of infectious agents. Appropriate safety precautions are recommended. Internal quality controls according to national guidelines, e.g. (1), are recommended at regular intervals. References (1) Richtlinien zur Gewinnung von Blut und Blutbestandteilen und zur Anwendung von Blutprodukten (Hämotherapie), Gesamtnovelle 2005, Deutscher Ärzte-Verlag Köln. (2) Technical Manual, 15th edition, Section 1, American Association of Blood Banks Key: Underline = Addition or significant change ◄= Deletion of text

[DE]

Monospezifische Anti-Human-Globuline Anti-IgG, Anti-IgM, Anti-C3, Anti-C3d, Anti-C4 (Kaninchen, polyklonal) Anti-IgA (Kaninchen, polyklonal) Zum Nachweis der entsprechenden Immunglobulinklassen mit dem direkten oder indirekten Antihumanglobulintest Röhrchentest [REF]

804 501

5 ml

Anti-IgG

[REF]

804 521

2 ml

Anti-IgM

[REF]

804 541

2 ml

Anti-IgA

[REF]

804 561

2 ml

Anti-C3

[REF]

804 581

2 ml

Anti-C4

[REF]

804 601

5 ml

Anti-C3d

[PRES] Konserviert mit : < 0,1 % NaN3 [ACT]

Activität / Mindestiter

|0197 186153/20 – 08/2012

[IVD] Reagenz zur In-vitro-Diagnostik Nur für die Verwendung durch geschultes Laborpersonal. Der [ACT] ist dem Fläschchenetikett zu entnehmen. Symbole werden entsprechend der Norm EN 980 verwendet. In EN 980 nicht enthaltene Symbole sind im weiteren Text erklärt. Verwendungszweck Die monospezifischen Anti-Human-Globuline (Anti-IgG, Anti-IgM, Anti-C3, AntiC3d, Anti-C4, Anti-IgA) werden verwendet, um im direkten Antihumanglobulintest in vivo an Erythrozyten gebundene Antikörper der entsprechenden Immunglobulinklassen nachzuweisen. Sie kommen zum Einsatz bei der Diagnose von autoimmunhämolytischen Anämien, des Morbus haemolyticus neonatorums und von hämolytischen Transfusionsreaktionen. Mit dem indirekten Antihumanglobulintest werden Antikörper nachgewiesen, die in vitro an Erythrozyten gebunden sind. Dieser Test dient der Antikörpersuche und -Identifizierung sowie der Verträglichkeitsuntersuchung (Kreuzprobe).

9. 10.

Reaktion positiv: Der negative Reaktionsausfall im indirekten Antihumanglobulintest ist gültig. Reaktion negativ: Bei der Testdurchführung ist ein Fehler unterlaufen, der Testansatz muss wiederholt werden. Interpretation der Ergebnisse

Die Bewertung der Technical Manual (2): Reaktionsstärke 4+ 3+ 2+ 1+

Testprinzip Das Testprinzip ist ein Hämagglutinationstest. Monospezifische Anti-Human-Globuline wirken als Bindeglied zwischen den Antikörpern der entsprechenden Antikörperklassen oder Komplementfaktoren, die an Erythrozyten angelagert sind und bringen diese zur Agglutination. Erythrozyten, die nicht sensibilisiert sind, werden nicht agglutiniert. Reagenz Monospezifische Anti-Human-Globuline sind nicht humanen Ursprungs. Es sind Antikörper gegen die entsprechenden Immunglobulinklassen oder Komplement-Komponenten. Sie agglutinieren im Kochsalzmedium, sind reaktiv im Raumtemperaturbereich und für den Einsatz im Röhrchentest geeignet. Zusätzlich benötigte Reagenzien und Materialen • Pipetten (Tropfenvolumen 40-50 μl) • IgG-sensibilisierte Erythrozyten (z.B. Coombscell-E [REF] 816 030) • Isotone Kochsalzlösung • Glasröhrchen • Laborzentrifuge Probenmaterial Blutproben werden nach allgemeingültigen Entnahmeverfahren gewonnen. Für den direkten Antihumanglobulintest sollte frisches EDTA-Blut verwendet werden. EDTA blockiert die in-vitro Anlagerung von KomplementKomponenten, die zu falsch positiven Ergebnissen führen kann. Testdurchführung Vor Gebrauch alle Reagenzien auf Raumtemperatur bringen. A. Direkter Antihumanglobulintest Röhrchentest 1. Die zu untersuchenden Erythrozyten 3 bis 5%-ig in isotoner Kochsalzlösung suspendieren. 2. 1 Tropfen dieser Suspension 3 mal, Nabelschnurblute 6 mal, mit isotoner Kochsalzlösung waschen. Die letzte Waschlösung möglichst vollständig entfernen. 3. 2 Tropfen monospezifisches Antihumanglobulin zufügen und mischen. 4. 2 Minuten bei 150 - 200 x g oder 20 Sekunden bei 800 - 1000 x g zentrifugieren. 5. Unter leichtem Aufschütteln auf Agglutination prüfen. Kontrolle für Anti-IgG bei negativem Ergebnis 6. 1 Tropfen IgG-beladene Zellen (z.B. Coombscell-E) hinzufügen. 7. 2 Minuten bei 150 - 200 x g oder 20 Sekunden bei 800 - 1000 x g zentrifugieren. 8. Unter leichtem Aufschütteln auf Agglutination prüfen. Reaktion positiv: Der negative Reaktionsausfall im direkten Antihumanglobulintest ist gültig. Reaktion negativ: Bei der Testdurchführung ist ein Fehler unterlaufen, der Testansatz muss wiederholt werden. Hinweis: Nach der Zugabe von AHG sollte sofort zentrifugiert und abgelesen werden, da sich bei einer IgG-Beladung positive Reaktionen durch eine Inkubation abschwächen können. Bei direkten Antihumanglobulintests mit Anti-Komplement-Reagenzien muss vor dem Zentrifugieren 5-10 Minuten bei Raumtemperatur inkubiert werden. B. Indirekter Antihumanglobulintest Röhrchentest 1. Die zu untersuchenden Erythrozyten 3 bis 5%ig in isotoner Kochsalzlösung suspendieren. 2. In einem entsprechend beschrifteten Röhrchen je 1 Tropfen der Erythrozytensuspension bzw. der Testerythrozyten und 2 Tropfen des zu untersuchenden Serums (bzw. 1 Tropfen Testreagenz) vorlegen. 3. 30-60 Minuten bei 37°C inkubieren. 4. Die Erythrozyten 3 mal mit isotoner Kochsalzlösung waschen. Den Überstand vollständig dekantieren. 5. Dem Sediment 2 Tropfen monospezifisches Anti-Human-Globulin zufügen und mischen. 6. 2 Minuten bei 150 - 200 x g oder 20 Sekunden bei 800 - 1000 x g zentrifugieren. 7. Unter leichtem Aufschütteln auf Agglutination prüfen. Kontrolle für Anti-IgG bei negativem Ergebnis 8. 1 Tropfen IgG-beladene Zellen (z.B. Coombscell-E) hinzufügen.

MBio-Rad Medical Diagnostics GmbH Industriestr. 1, D-63303 Dreieich, Germany Tel.: +49-6103-3130-0, Fax: +49-6103-3130-724 www.bio-rad.com, [email protected]

2 Minuten bei 150 - 200 x g oder 20 Sekunden bei 800 - 1000 x g zentrifugieren. Unter leichtem Aufschütteln auf Agglutination prüfen.

+/-

Reaktionsstärken erfolgt analog den Vorgaben des Agglutinationsbild Ein einziges Agglutinat. Keine freien Erythrozyten. Starke Reaktion. Einige große Agglutinate. Mittelgroße Agglutinate, keine freien Erythrozyten. Viele kleine Agglutinate innerhalb eines Hintergrunds freier Erythrozyten. Wenige makroskopisch erkennbare Agglutinate innerhalb der Erythrozytensuspension. Zahlreiche mikroskopisch erkennbare Agglutinate. Homogene Erythrozytensuspension ohne erkennbare Agglutinate.

Leistungsmerkmale und Grenzen der Methode Negative Ergebnisse im indirekten oder direkten Antihumanglobulintest sollten mit antikörperbeladenen Testzellen überprüft werden. Ein negatives Ergebnis dieser Kontrolle lässt auf einen Fehler in der Testdurchführung oder auf einen Reaktivitätsverlust des Reagenzes schließen. Bei zweifelhaften Ergebnissen unklarer Ursache steht der Bio-Rad-Service (Tel. 06103-3130-611) für Rückfragen zur Verfügung. Haltbarkeit Nach Öffnung des Reagenzes ist das Produkt bei sachgemäßer Lagerung (2..8°C) bis zum Ende der angegebenen Laufzeit haltbar. Die Laufzeit ist dem Reagenzienetikett zu entnehmen. Bei beschädigten Fläschchen darf das Produkt nicht mehr verwendet werden. Warnhinweise und Vorsichtsmaßregeln Eine Trübung des Produktes kann ein Hinweis auf bakterielle Verunreinigung sein. In diesem Fall darf das Produkt nicht eingesetzt werden, da die Ursache der Trübung durch den Hersteller geklärt werden muss. Alle Techniken sind nach den Vorgaben des Herstellers anzuwenden. Jede Abweichung von den Vorgaben des Herstellers liegt in der Verantwortung des Anwenders. Abgearbeitete Tests müssen als Abfall der Gruppe B wie beschrieben im „Merkblatt über die Vermeidung und die Entsorgung von Abfällen aus öffentlichen und privaten Einrichtungen des Gesundheitsdienstes“ und der „Richtlinie für Krankenhaushygiene und Infektionsprävention“, entsorgt werden. Monospezifische Anti-Human-Globuline sind nicht humanen Ursprungs. Eine Infektion mit Hepatitis-, HIV- oder anderen infektiösen Erregern ist daher praktisch ausgeschlossen. Dennoch sollten alle Testreagenzien biologischen Ursprungs als potentielle Überträger von infektiösen Krankheitserregern betrachtet werden. Angemessene Sicherheitsvorkehrungen werden in den Gebrauchsinformationen empfohlen. Regelmäßige interne Qualitätskontrollen sollten gemäß den jeweiligen nationalen Richtlinien (1), durchgeführt werden. Literatur (1) Richtlinien zur Gewinnung von Blut und Blutbestandteilen und zur Anwendung von Blutprodukten (Hämotherapie), Gesamtnovelle 2005, Deutscher Ärzte-Verlag Köln. (2) Technical Manual, 15th edition, Sect. 1, American Association of Blood Banks Schlüssel: Unterstrichen = Zusatz oder wichtige Änderung ◄= Entfernter Text

[FR]

Antiglobulines humaines monospécifiques Anti-IgG, Anti-IgM, Anti-C3, Anti-C3d, Anti-C4 (lapin, polyclonal) Anti-IgA (lapin,polyclonal) Pour la détection de la classe d´immunoglobulines correspon-dante par le test direct ou indirect à l´antiglobuline humaine Test en tube [REF]

804 501

5 ml

Anti-IgG

[REF]

804 521

2 ml

Anti-IgM

[REF]

804 541

2 ml

Anti-IgA

[REF]

804 561

2 ml

Anti-C3

[REF]

804 581

2 ml

Anti-C4

[REF]

804 601

5 ml

Anti-C3d

[PRES] Conservé avec: 0,1 % de NaN3 [ACT]

Activité / Titre minimum

[IVD] Réactif pour usage diagnostique in vitro Ne doit être utilisé que par le personnel de laboratoire formé à cet effet.

|0197 186153/20 – 08/2012

Le [ACT] figure sur l´étiquette du flacon. Les symboles sont utilisés conformément à la norme EN 980. Les symboles non contenus dans la norme EN 980 sont expliqués dans le texte. Application Les antiglobulines humaines monospécifiques (Anti-IgG, Anti-IgM, Anti-C3, Anti-C3d, Anti-C4, Anti-IgA) sont utilisées pour déterminer, dans le test direct à l´antiglobuline humaine in vivo, les anticorps de la classe d´immuno-globulines correspondante liés aux érythrocytes. Ils sont indiqués pour le diagnostic d´anémies hémolytiques autoimmunitaires, de la maladie hémolytique du nouveau-né et de réactions hémolytiques à des transfusions sanguines. Le test indirect aux antiglobulines humaines permet de mettre en évidence des anticorps, qui sont liés in vitro à des érythrocytes. Le présent test est destiné au dépistage et à l´identification des anticorps, ainsi qu´à l´étude de tolérance (essais croisés). Principe du test Le test est basé sur le principe de l´hémagglutination. Les antiglobulines humaines monospécifiques forment un lien entre les anticorps appartenant à la classe d´anticorps correspondante ou bien les facteurs de complément fixés aux érythrocytes et les font agglutiner. Les érythrocytes non sensibilisés ne s´agglutinent pas. Réactif Les antiglobulines humaines monospécifiques ne sont pas d´origine humaine. Ce sont des anticorps dirigés contre la classe correspondante d´immunoglobulines ou de composants de complément. Ils s´agglutinent en mileu salin, ils sont réactifs dans la plage des températures ambiantes et indiqués pour le test en tube. Réactifs supplémentaires et matériel nécessaire • Pipettes (volume par goutte 40-50 µl) • Coombscell-E ([REF] 816 030) • Solution saline isotonique • Tubes de verre • Centrifugeuse de laboratoire Echantillons Les échantillons sanguins sont prélevés selon des méthodes généralement reconnues. Pour le test direct à l´antiglobuline humaine, il convient d´utiliser du sang EDTA frais. L'EDTA inhibe la fixation in vitro de composants de complément, qui peut conduire à des résultats faussement positifs. Mode opératoire Porter tous les réactifs à température ambiante avant l´emploi. A. Test direct à l´antiglobuline humaine Test en tube 1. Préparer une suspension d´érythrocytes dans une solution saline isotonique de 3 à 5%. 2. Laver 1 goutte de cette suspension 3 fois, le sang de cordon ombilical 6 fois, avec la solution saline isotonique, tout en ayant soin de faire disparaître le mieux possible la dernière solution de lavage. 3. Ajouter 2 gouttes d´antiglobuline humaine monospécifique et mélanger. 4. Centrifuger pendant 2 minutes à 150 - 200 x g ou pendant 20 sec à 800 1000 x g. 5. Lire la force de réaction de l ´agglutination en agitant doucement. Contrôle pour Anti-IgG en cas de résultat négatif 6. Ajouter 1 goutte de cellules sensibilisées avec des IgG (par ex. CoombcellE). 7. Centrifuger pendant 2 minutes à 150 - 200 x g ou pendant 20 sec à 800 1000 x g. 8. Lire la force de réaction de l´agglutination en agitant doucement. Réaction positive:

La réaction négative du test direct à l´antiglobuline humaine est valable. Réaction négative: Il y a erreur dans le mode opératoire, le test doit être répété. Note: Il convient de centrifuger immédiatement après l´adjonction d´AGH et de lire le résultat rapidement car un temps d´incubation serait susceptible d´atténuer la réaction positive en présence de cellules sensibilisées aux IgG. Dans les tests directs à l´antiglobuline humaine avec des réactifs anticomplément il convient de laisser incuber pendant 5 à 10 minutes à température ambiante avant de centrifuger. B. Test indirect à l´antiglobuline humaine Test en tube 1. Préparer à partir de l'echantillon sanguin une suspension d'erythrocytes dans une solution saline isotonique de 3 à 5 %. 2. Déposer dans un tube adéquatement marqué respectivement 1 goutte de suspension d´érythrocytes (ou d´érythrocytes test) et 2 gouttes de sérum à analyser (ou respectivement 1 goutte de réactif test). 3. Incuber pendant 30-60 minutes à 37°C. 4. Il convient de laver les érythrocytes 3 fois avec une solution saline isotonique. Décanter intégralement le surnageant. 5. Ajouter au sédiment 2 gouttes d´antiglobuline humaine monospécifique et mélanger. 6. Centrifuger pendant 2 minutes à 150 - 200 x g ou pendant 20 sec à 800 1000 x g. 7. Lire la force de réaction de l ´agglutination en agitant doucement.

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Contrôle pour Anti-IgG en cas de résultat négatif 8. Ajouter 1 goutte de cellules sensibilisées avec des IgG (par ex. CoombcellE) 9. Centrifuger pendant 2 minutes à 150 - 200 x g ou pendant 20 sec à 800 1000 x g. 10. Lire la force de réaction de l´agglutination en agitant doucement. Réaction positive:

La réaction négative du test indirect à l´antiglobuline humaine est valable. Réaction négative: Il y a erreur dans le mode opératoire, le test doit être répété. Interprétation des résultats L´évaluation des intensités de réaction s´opère conformément aux dispositions du Technical Manual (2): Force de Agglutination réaction 4+ Un agglutinat unique. Aucun érythrocyte libre. 3+ Réaction forte. Quelques agglutinats de grande dimension. 2+ Agglutinats de moyenne dimension, aucun érythrocyte libre. 1+ Nombreux agglutinats de faible dimension sur un fond d´érythrocytes libres. +/Peu d´agglutinats macroscopiquement reconnaissables à l´intérieur de la suspension d´érythrocytes. Nombreux agglutinats reconnaissables au microscope. Suspension d´érythrocytes homogène sans agglutinats reconnaissables. Performances et limites de méthodes Il convient de vérifier à l´aide de cellules de test chargées d´anticorps les résultats négatifs du test direct ou indirect à l´antiglobuline humaine. Si ce contrôle donne un résultat négatif, ceci doit laisser soupçonner une erreur dans le mode opératoire ou bien une perte de réactivité du réactif. En cas de résultats douteux dont la cause ne serait pas évidente, veuillez vous adresser au Bio-Rad-Service (Tél. +49 6103–3130-611) qui se tient à votre disposition. Stabilité Une fois le flacon ouvert et stocké adéquatement (2..8°C), le produit est stable jusqu´à la date de péremption. La date de péremption figure sur l´étiquette du réactif. Si le flacon est endommagé, le produit ne doit plus être utilisé. Avertissements et précautions Tout aspect turbide du produit peut indiquer une contamination bactérienne. Dans ce cas, ne pas utiliser le produit, car le fabricant est dans l´obligation d´éclaircir la cause de la turbidité de celui-ci. Toutes les techniques doivent être appliquées conformément aux dispositions du fabricant. Toute dérogation aux dispositions du fabricant relève de la responsabilité de l´utilisateur. En application des directives nationales respectives, les matériaux de tests utilisés doivent être évacués. Les antiglobulines humaines monospécifiques ne sont pas d´origine humaine. Une contamination par le virus de l´hépatite, du HIV ou par d´autres agents infectieux est de ce fait pratiquement exclue. Cependant, il importe de considérer tous les réactifs de test d´origine biologique comme vecteurs potentiels d´agents pathogènes. Les mesures de sécurité appropriées sont décrites dans la notice d´emploi. Il convient d´effectuer en interne des contrôles de qualité réguliers conformément aux directives nationales respectivement en vigueur par ex. (1). Bibliographie (1) Richtlinien zur Gewinnung von Blut und Blutbestandteilen und zur Anwendung von Blutprodukten (Hämotherapie), Gesamtnovelle 2005, Deutscher Ärzte-Verlag Köln. (2) Technical Manual, 15th ed., Sect. 1, American Assoc. of Blood Banks Clé : Souligner = Addition ou modification significative ◄= Effacement du texte

[ES]

Antiglobulinas humanas monoespecíficas Anti-IgG, Anti-IgM, Anti-C3, Anti-C3d, Anti-C4 (conejo, policlonales) Anti-IgA (conejo, policlonales) Para la determinación de las correspondientes clases de inmunoglobulina con el test directo o indirecto de antiglobulina humana Test en tubo [REF]

804 501

5 ml

Anti-IgG

[REF]

804 521

2 ml

Anti-IgM

[REF]

804 541

2 ml

Anti-IgA

[REF]

804 561

2 ml

Anti-C3

[REF]

804 581

2 ml

Anti-C4

[REF]

804 601

5 ml

Anti-C3d

[PRES] Conservación: < 0,1 % de NaN3 [ACT]

Actividad / titulo minimo

|0197 186153/20 – 08/2012

[IVD] Reactivo para uso diagnóstico in vitro Para ser utilizado exclusivamente por personal cualificado de laboratorio. El [ACT] viene indicado en la etiqueta de los viales. Los símbolos se emplean de acuerdo con la norma EN 980. Los símbolos no contenidos en la norma EN 980 son explicados en el presente texto. Finalidad prevista Las antiglobulinas humanas monoespecíficas (Anti-IgG, Anti-IgM, Anti-C3, Anti-C3d, Anti-C4, Anti-IgA) se emplean para determinar los anticuerpos de las correspondientes clases de inmunoglobulina unidos a los eritrocitos en el test de antiglobulina humana in vivo. Se emplean para diagnosticar anemias hemolíticas autoinmunes, el Morbus haemolyticus neonatorums (eritroblastosis neonatal) y reacciones hemolíticas transfusionales. Con el test indirecto de antiglobulina humana se determinan los anticuerpos unidos in vitro a los eritrocitos. El presente test sirve para la detección y la identificación de anticuerpos, así como para determinar la compatibilidad (test cruzado). Principio del test El test se basa en el principio del test de hemaglutinación. Las antiglobulinas humanas monoespecíficas funcionan de enlace entre los anticuerpos de la correspondiente clase o de los factores del comple-mento que están unidos a los eritrocitos, provocando la aglutinación. Los eritrocitos no sensibilizados no aglutinan. Reactivo Las antiglobulinas humanas monoespecíficas no son de origen humano. Son anticuerpos contra la clase de inmunoglobulina correspondiente o contra los componentes complementarios. Aglutinan en medio salino, son reactivos a temperatura ambiente y están destinados para ser empleados en test en tubo de ensayo. Reactivos y materiales necesarios que no se suministran • Pipetas (volumen de dispensación: 40-50 μl) • Coombscell-E ([REF] 816 030) • Solución salina isotónica • Tubos de ensayo de vidrio • Centrifugadora de laboratorio Muestras Las muestras de sangre se obtendrán según los métodos generalmente válidos. Para el test directo de antiglobulina humana se empleará sangre fresca con EDTA. EDTA bloquea la fijación in vitro de componentes complementarios que podría originar resultados falsamente positivos. Procedimiento Llevar todos los reactivos a temperatura ambiente antes de su empleo. A. Test directo de antiglobulina humana Test en tubo 1. Preparar una suspensión eritrocitaria al 3 – 5 % de la muestra de sangre con solución salina isotónica. 2. Lavar 1 gota de suspensión eritrocitaria 3 veces, sangre de cordón umbilical 6 veces, con solución salina isótonica; la última solucíon de lavado debe ser eliminada lo más completamente posible. 3. Añadir 2 gotas de antiglobulina humana monoespecífica y mezclar. 4. Centrifugar 2 minutos a 150 - 200 x g ó 20 segundos a 800 - 1000 x g. 5. Verificar la aglutinación agitando suavemente. Control para el Anti-IgG en caso de resultado negativo 6. Añadir 1 gota de células recubiertas con IgG (p.ej. Coombcell-E). 7. Centrifugar 2 minutos a 150 - 200 x g ó 20 segundos a 800 - 1000 x g. 8. Verificar la aglutinación agitando suavemente. Reacción positiva: Reacción negativa:

El resultado negativo de la reacción en el test directo de antiglobulina humana es válido. Se ha constatado un error en la ejecución del test; el test debe ser repetido.

Nota: Después de añadir antiglobulina humana, se recomienda la inmediata centrifugación y lectura, dado que el recubrimiento IgG puede provocar un debilitamiento de las reacciones positivas debido a la incubación. En el test directo de antiglobulina humana con reactivos anti-complementos es necesaria una incubación de 5-10 minutos a temperatura ambiente antes de la centrifugación. B. Test indirecto de antiglobulina humana Test en tubo 1. Preparar un suspensión eritrocitarai al 3 – 5 % de la muestra de sangre con solución salina isotónica. 2. Verter en un tubo adecuadamente rotulado 1 gota de suspensión eritrocitaria o de eritrocitos de ensayo y 2 gotas del suero que se desea analizar (ó 1 gota de reactivo de ensayo). 3. Incubar durante 30-60 minutos a 37°C. 4. Lavar los eritrocitos 3 veces con solución salina isotónica. Decantar el sobrenadante completamente. 5. Añadir 2 gotas de antiglobulina humana monoespecífica al sedimento y mezclar. 6. Centrifugar 2 minutos a 150 - 200 x g ó 20 segundos a 800 - 1000 x g. 7. Verificar la aglutinación agitando suavemente. Control para el Anti-IgG en caso de resultado negativo 8. Añadir 1 gota de células recubiertas con IgG (p.ej. Coombcell-E). 9. Centrifugar 2 minutos a 150 - 200 x g ó 20 segundos a 800 - 1000 x g.

MBio-Rad Medical Diagnostics GmbH Industriestr. 1, D-63303 Dreieich, Germany Tel.: +49-6103-3130-0, Fax: +49-6103-3130-724 www.bio-rad.com, [email protected]

10. Verificar la aglutinación agitando suavemente. Reacción positiva: El resultado negativo de la reacción en el test indirecto de antiglobulina humana es válido. Reacción negativa: Se ha constatado un error en la ejecución del test; el test debe ser repetido. Interpretación de los resultados La intensidad de reacción se evaluará de acuerdo a lo dispuesto en el Technical Manual (2): Intensidad de Aglutinación reacción 4+ Un solo aglutinado. Ausencia de eritrocitos libres. 3+ Fuerte reacción. Varios aglutinados grandes. 2+ Aglutinados medianos; ausencia de eritrocitos libres. 1+ Numerosos aglutinados pequeños sobre un fondo de eritrocitos libres. +/Unos pocos aglutinados visibles macroscópicamente en el interior de la suspensión de eritrocitos. Numerosos aglutinados visibles microscópicamente. Suspensión homogénea de eritrocitos, sin aglutinados perceptibles. Características de funcionamiento y limitaciones del método Los resultados negativos en el test directo o indirecto de antiglobulina humana deben ser verificados con eritrocitos de ensayo cubiertos de anticuerpos. Un resultado negativo en este control puede ser debido a un error en la ejecución del test o a una disminución de la reactividad del reactivo. En caso de resultados pocp claros de origen desconocido pónga-se en contacto con nuestro servicio Bio-Rad de atención al cliente (Tel. +49-61033130-611). Estabilidad Una vez abierto el reactivo, el producto puede ser conservado en las condiciones adecuadas (2..8°C) hasta la fecha que se indica. La fecha de caducidad viene indicada en la etiqueta del reactivo. No utilizar el producto si el vial está deteriorado. Advertencias y precauciones El eventual enturbiamiento del producto puede ser indicio de contaminación bacterial. En este caso no se debe utilizar el reactivo, ya que la causa del enturbiamiento debe ser esclarecida por el fabricante. Todas las técnicas se han de realizar de acuerdo con las instrucciones del fabricante. El usuario es responsable de cualquier divergencia con respecto a tales instrucciones. El material de ensayo ya usado debe ser eliminado de acuerdo con las normativas nacionales relativas a la eliminación de residuos infecciosos. Las antiglobulinas humanas monoespecíficas no son de origen humano. Una eventual infección de hepatitis, HIV u otros agentes infecciosos queda pues prácticamente descartada. No obstante, todos los reactivos de ensayo de origen biológico deberán ser considerados como potenciales portadores de agentes patógenos infecciosos. Las precauciones adecuadas vienen descritas en las instrucciones de uso. Se deberán efectuar controles internos de calidad regularmente, en conformidad con las normas nacionales vigentes p.ej. (1). Referencias (1) Richtlinien zur Gewinnung von Blut und Blutbestandteilen und zur Anwendung von Blutprodukten (Hämotherapie), Gesamtnovelle 2005, Deutscher Ärzte-Verlag Köln. (2) Technical Manual, 15th ed., Sect. 1, American Assoc. of Blood Banks Clave: Subrayado = Adición o cambio significativo ◄= Texto borrado

[IT]

Antiglobuline umane monospecifiche Anti-IgG, Anti-IgM, Anti-C3, Anti-C3d, Anti-C4 (coniglio, policlonali) Anti-IgA (coniglio, policlonali) Per la determinazione delle relative classi immunoglobuliniche con il test diretto o indiretto all'antiglobulina umana Test in provetta [REF]

804 501

5 ml

Anti-IgG

[REF]

804 521

2 ml

Anti-IgM

[REF]

804 541

2 ml

Anti-IgA

[REF]

804 561

2 ml

Anti-C3

[REF]

804 581

2 ml

Anti-C4

[REF]

804 601

5 ml

Anti-C3d

[PRES] Conservato con : < 0,1 % de NaN3 [ACT]

Attivitá / titolo minimo

[IVD] Reagente per uso diagnostico in vitro Da utilizzare solo da parte di personale di laboratorio esperto ed addestrato. Il [ACT] è riportato sull'etichetta del flacone. I simboli vengono utilizzati secondo la normativa EN 980. I simboli non riportati nella normativa EN 980 sono descritti nel testo.

|0197 186153/20 – 08/2012

Finalità d'uso Le antiglobuline umane monospecifiche (Anti-IgG, Anti-IgM, Anti-C3, Anti-C3d, Anti-C4, Anti-IgA) vengono impiegate per individuare gli anticorpi delle corrispondenti classi immunoglobuliniche legati in vivo agli eritrociti nel test all'antiglobulina umana. Si impiegano per la diagnosi di anemie emolitiche autoimmuni, della malattia emolitica del neonato (eritroblastosi fetale) e di reazioni trasfusionali emolitiche. Con il test indiretto all'antiglobulina umana vengono individuati anticorpi che sono legati in vitro agli eritrociti. Tale test serve per individuare e identificare gli anticorpi e per determinare la compatibilità (prova crociata di compatibilità). Principio del test Il test si basa sul principio di emoagglutinazione. Le antiglobuline umane monospecifiche fungono da anello di legame tra gli anticorpi delle relative classi o dei fattori del complemento che rivestono gli eritrociti e ne provocano l'agglutinazione. Gli eritrociti che non sono sensibilizzati non si agglutinano. Reagente Le antiglobuline umane monospecifiche non sono di origine umana. Sono anticorpi contro le relative classi immunoglobuliniche o componenti del complemento. Si agglutinano in un mezzo salino, sono reattive a temperatura ambiente e sono indicate per i test in provetta. Reagenti supplementari e materiali necessari • Pipette (volume di dispensazione: 40-50 μl) • Eritrociti IgG-sensibilizzati (ad es. Coombscell-E [REF] 816 030) • Soluzione salina isotonica • Provette in vetro • Centrifuga da laboratorio Materiale in esame I campioni di sangue vanno prelevati secondo le procedure generalmente valide. Per il test dell'antiglobulina umana diretto va impiegato sangue fresco con EDTA. L'EDTA blocca la fissazione in vitro dei componenti del complemento che potrebbe portare a risultati falsamente positivi. Esecuzione del test Portare tutti i reagenti a temperatura ambiente prima dell'uso. A. Test diretto all'antiglobulina umana Test in provetta 1. Preparare una sospensione eritrocitaria al 3 – 5 % dal campione di sangue in soluzione salina isotonica. 2. Lavare 1 goccia di sospensione per 3 volte ed i campioni di sangue dal cordone ombelicale per 6 volte in soluzione salina isotona; nell’ultimo passaggio rimuovere quanta più soluzione di lavaggio possibile. 3. Aggiungere 2 gocce di antiglobuline umane monospecifiche e miscelare. 4. Centrifugare per 2 minuti a 150 - 200 x g o per 20 secondi a 800 - 1000 x g. 5. Verificare l'agglutinazione scuotendo leggermente. Controllo per Anti-IgG in caso di risultato negativo 6. Aggiungere 1 goccia di emazie rivestite con IgG (ad es. Coombcell-E). 7. Centrifugare per 2 minuti a 150 - 200 x g o per 20 secondi a 800 - 1000 x g. 8. Verificare l'agglutinazione scuotendo leggermente. Reazione positiva: Il risultato negativo della reazione nel test all'antiglobulina umana diretto è valido. Reazione negativa: Si è verificato un errore nell'esecuzione del test; il test va ripetuto.

Reazione positiva: Il risultato negativo della reazione nel test indiretto all'antiglobulina umana è valido. Reazione negativa: Si è verificato un errore nell'esecuzione del test; il test va ripetuto. Interpretazione dei risultati La valutazione della forza di reazione viene eseguita secondo le istruzioni riportate nel Technical Manual (2): Forza di Agglutinazione reazione 4+ Un unico agglutinato. Nessun eritrocita libero. 3+ Reazione forte. Alcuni agglutinati di grandi dimensioni. 2+ Agglutinati di intermedie dimensioni; nessun eritrocita libero. 1+ Numerosi agglutinati di piccole dimensioni su uno sfondo di eritrociti liberi. +/Pochi agglutinati rilevabili macroscopicamente all'interno della sospensione di eritrociti. Numerosi agglutinati riconoscibili al microscopio. Sospensione eritrocitaria omogenea, senza agglutinati riconoscibili. Caratteristiche delle prestazioni e limiti del metodo I risultati negativi nel test dell'antiglobulina umana diretto o indiretto vanno verificati con emazie test rivestite di anticorpi. Un risultato negativo in questo controllo può essere dovuto ad un errore nell'esecuzione del test o ad una diminuzione di reattività del reagente. In caso di risultati dubbi con causa ignota è possibile contattare l'assistenza Bio-Rad (Tel. +49-6103-3130-611) per chiarimenti. Stabilità Una volta aperto il flacone, il reagente può essere conservato in condizioni appropriate (2..8°C) fino alla data di scadenza indicata. La data di scadenza è riportata sull'etichetta del reagente. Se i flaconi dovessero risultare danneggiati, il prodotto non va più utilizzato. Avvertenze e precauzioni L’eventuale presenza di torbidità nel prodotto può essere indice di contaminazione batterica. In tal caso il prodotto non va utilizzato in quanto spetta al produttore chiarire la causa della torbidità. Tutte le tecniche vanno impiegate secondo le istruzioni del produttore. L'utente è responsabile di qualsiasi deviazione da tali istruzioni. I materiali dei test utilizzati vanno smaltiti conformemente alle rispettive normative nazionali vigenti. Le antiglobuline umane monospecifiche non sono di origine umana. Un'eventuale infezione da epatite, HIV o altri agenti infettivi può essere quindi di fatto esclusa. Tuttavia, tutti i reagenti di origine biologica devono essere considerati come potenziali portatori di agenti patogeni infettivi. Le misure precauzionali adeguate sono descritte nelle istruzioni d'uso. Controlli di qualità interni vanno condotti regolarmente in conformità alle normative vigenti ad es., (1). Bibliografia (1) Richtlinien zur Gewinnung von Blut und Blutbestandteilen und zur Anwendung von Blutprodukten (Hämotherapie), Gesamtnovelle 2005, Deutscher Ärzte-Verlag Köln. (2) Technical Manual, 15th ed., Sect. 1, American Association of Blood Banks Chiave: Sottolineatura = Aggiunta o cambiamento significativo ◄= Cancellazione di testo

Nota: Dopo l'aggiunta di antiglobuline umane, si raccomanda l'immediata centrifugazione e lettura, poiché il rivestimento IgG può provocare l'indebolimento delle reazioni positive a causa dell'incubazione. Nei test diretti all'antiglobulina umana con reagenti anti-complemento è necessaria un'incubazione di 5-10 minuti a temperatura ambiente prima della centrifugazione. B. Test indiretto all'antiglobulina umana Test in provetta 1. Sospendere gli eritrociti da analizzare al 3 – 5 % in soluzione salina isotonica. 2. Versare in una provetta opportunamente contrassegnata 1 goccia di sospensione eritrocitaria o di emazie test e 2 goccie del siero in esame (o 1 goccia di reagente test). 3. Incubare per 30-60 minuti ad una temperatura di 37°C. 4. Lavare gli eritrociti 3 volte con soluzione salina isotonica. Decantare completamente il surnatante. 5. Aggiungere 2 gocce di antiglobuline umane monospecifiche al sedi-mento e miscelare. 6. Centrifugare per 2 minuti a 150 - 200 x g o per 20 secondi a 800 - 1000 x g. 7. Verificare l'agglutinazione scuotendo leggermente. Controllo per Anti-IgG in caso di risultato negativo 8. Aggiungere 1 goccia di emazie rivestite con IgG (ad es. Coombcell-E). 9. Centrifugare per 2 minuti a 150 - 200 x g o per 20 secondi a 800 - 1000 x g. 10. Verificare l'agglutinazione scuotendo leggermente.

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