SAT: Sperm Aneuploidy Test (5 cromosomas: 13, 18, 21, X e Y)   1. Presentación. ¿Qué es?    El  Sperm  Aneuploidy  Test  (SAT)  permite  evaluar  la  presencia  de  alteraciones  en  el  número  de  cromosomas  –  aneuploidías y diploidía ‐ en los espermatozoides, previo al tratamiento de reproducción asistida. En este test se analizan  los  cromosomas  cuyas  anomalías  pueden  dar  lugar  a  abortos  o  a  niños  nacidos  vivos  con  cromosomopatías  (cromosomas 13, 18, 21, X e Y).    2. Objetivo. ¿Para qué sirve?    A nivel clínico, la presencia de alteraciones en el número de cromosomas en los espermatozoides se ha relacionado con  una menor tasa de embarazo tras ICSI, así como una mayor tasa de aborto en parejas que presentan problemas de  infertilidad (Rubio et al., 2001; Burrello et al., 2003; Petit et al., 2005; Nicopoullos et al., 2008; Rodrigo et al., 2011;  Rodrigo et al., 2013). 

  A nivel embrionario, se han observado diferentes consecuencias según el tipo de anomalía cromosómica observada en  los  espermatozoides,  de  manera  que  un  incremento  de  espermatozoides  con  aneuploidía  de  cromosomas  sexuales  genera  principalmente  embriones  aneuploides  que,  o  no  implantan,  o  si  lo  hacen  pueden  dar  lugar  a  gestaciones   evolutivas anormales (Síndromes de Patau, Edwards, Down, Klinefelter, Turner, XXX y XYY). Sin embargo, un incremento  de  espermatozoides  diploides  genera  además  embriones  triploides,  capaces  de  implantar,  pero  que  terminan  mayoritariamente en aborto (Rodrigo et al., 2010).    A nivel de descendencia, en diversos estudios realizados en padres de niños con Síndrome de Turner, Síndrome de  Klinefelter o Síndrome de Down, se ha relacionado el origen de la anomalía cromosómica del niño con un incremento  de espermatozoides con alteraciones en el número de cromosomas sexuales o del cromosoma 21 en el padre (Eskenazi  et al., 2002; Tang et al., 2004; Blanco et al., 1998).    El Sperm Aneuploidy Testes una prueba diagnóstica para el estudio de la infertilidad del varón, que puede ayudar al  asesoramiento de la pareja previo a la realización de un tratamiento de reproducción asistida.      

   

 

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3. Indicaciones. ¿Para quién?    El Sperm Aneuploidy Test estaría indicado en varones infértiles en los que se sospecha de errores meióticos durante la  espermatogénesis que pueden resultar en espermatozoides aneuploides y diploides. Se trata habitualmente de varones  con cariotipo normal: con parámetros espermáticos alterados ‐ principalmente oligozoospermia, azoospermia secretora  y casos extremos de teratozoospermia.  

    Otras indicaciones con o sin factor seminal asociado serian: parejas con historia clínica de aborto de repetición de causa  desconocida;  con  historia  clínica  de  fallos  repetidos  de  implantación  tras  técnicas  de  reproducción  asistida;  o  con  gestación previa con cromosomopatía.   

 

   

   

 

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4. Ventajas. ¿Qué ventajas sobre otros test?    La ventaja de esta técnica frente a los estudios de meiosis es que analizamos el producto final, el espermatozoide,que  va a participar directamente en la fecundación del óvulo. Para obtener un resultado con relevancia clínica, analizamos  2.000 espermatozoides para cada cromosoma, y el análisis es realizado por dos evaluadores independientes. Los  resultados se comparan con controles internos del laboratorio.    5. Muestra. ¿Cómo?    El SAT puede realizarse sobre muestras procedentes de eyaculado, epidídimo o testículo.     La muestra obtenida mediante eyaculación, se recoge en un tubo cónico y es sometida a un primer lavado con medio  de cultivo para espermatozoides. A partir de este momento la muestra se puede conservar en el laboratorio a 4oC un  máximo de 3 días hasta su envío.    La  muestra  obtenida  del  epidídimo  o  del  testículo  se  deposita  en  una  placa  Petri  con  medio  de  cultivo  para  espermatozoides, se dilacera el tejido con dos bisturís y se congela según el protocolo habitual del laboratorio de FIV.   Las alícuotas se envían congeladas para su procesamiento.    6. Envío. ¿Cómo, cuándo, dónde y quién?    La  muestra  de  epidídimo  o  de  testículo  se  transporta  en  un  contenedor  especial  frío.  La  muestra  de  eyaculado  se  transporta a temperatura ambiente en un tubo cónico sellado y bien protegido para evitar golpes.  La dirección de entrega es:     España: IGENOMIX, Laboratorio DGP cromosómico, Parc Cientific Universitat de Valencia, C/ Catedrático Agustín  Escardino, n99, 46980 Paterna (Valencia).  Latam: IGENOMIX Latam 7955 NW 12th St.Suite 415 Miami, Florida 33126 USA    7. Procesamiento de muestras y entrega de resultados. ¿Cuándo?     El protocolo en el laboratorio requiere 2 semanas para realizar el estudio y para la entrega del informe de resultados.    8. Metodología    Las principales etapas del ensayo:  1) Fijación de la muestra de espermatozoides.  2) Descondensación del núcleo de los espermatozoides.  3) Hibridación con sondas de DNA fluorescente cromosoma‐específicas.  4) Detección de las señales de hibridación y análisis manual de la muestra con microscopio de fluorescencia  equipado con filtros adecuados para los haptenos fluorescentes utilizados.   

   

 

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  9. Limitaciones de la técnica    Esta técnica no permite detectar aneuploidías para cromosomas no incluidos en el análisis. En casos de azoospermias  secretoras y criptozoospermia puede ocurrir que el número de espermatozoides no sea suficiente para realizar una  estimación adecuada de la incidencia de aneuploidías en la muestra.    10. ¿Cómo comenzar?  España: contacte con [email protected]   Latam: info‐[email protected]    11. FAQ's    ¿Se pueden estudiar otros cromosomas?  Sí,  cuando  se  solicita  el  test  SAT  por  gestación  previa  con  cromosomopatía,  se  puede  analizar  adicionalmente  el  cromosoma implicado en la cromosomopatía previa.    ¿Debe existir un periodo de abstinencia sexual previo a la extracción de la muestra?  Sí, es conveniente una abstinencia sexual de 2‐3 días previo a la extracción de la muestra.    ¿Hay una concentración espermática mínima para poder solicitar el test SAT?  No. En principio, se podrá solicitar el test siempre que se observen espermatozoides tanto en las muestras de eyaculado  como en las de epidídimo o testículo. Sin embargo, en raras ocasiones puede ocurrirque el número de espermatozoides  no sea suficiente para realizar una estimación adecuada de la incidencia de aneuploidías en la muestra.    ¿Se puede realizar el test SAT en varones portadores de alteraciones cromosómicas estructurales?  Sí, se puede diseñar un protocolo personalizado diseñando una estrategia de sondas de ADN fluorescentes dirigida al  análisis de la alteración específica motivo de estudio.      REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS     Blanco J, Gabau E, Gómez D, Baena N, Guitart M, Egozcue J, Vidal F. Chromosome 21 disomy in the spermatozoa  of the fathers of children with trisomy 21, in a population with a high prevalence of Down syndrome: increased  incidence in cases of paternal origin. Am J Hum Genet. 1998 Oct; 63(4):1067‐72.   Burrello N, Vicari E, Shin P, Agarwal A, De Palma A, Grazioso C, D’Agata R, Calogero AE. Lower sperm aneuploidy  frequency is associated with high pregnancy rates in ICSI programmes. Hum Reprod. 2003 Jul; 18(7):1371‐6.   Eskenazi B, Wyrobek AJ, Kidd SA, Lowe X, Moore D 2nd, Weisiger K, Aylstock M. Sperm aneuploidy in fathers  of children with paternally and maternally inherited Klinefelter syndrome. Hum Reprod. 2002 Mar; 17(3):576‐ 83.   Nicopoullos  JD,  Gilling‐Smith  C,  Almeida  PA,  Homa  S,  Nice  L,  Tempest  H,  Ramsay  JW.  The  role  of  sperm  aneuploidy  as  a  predictor  of  the  success  of  intracytoplasmic  sperm  injection?.  Hum  Reprod.  2008  Feb;  23(2):240‐50.   Petit  FM,  Frydman  N,  Benkhalifa  M,  Le  Du  A,  Aboura  A,  Fanchin  R,  Frydman  R,  Tachdjian  G.  Could  sperm  aneuploidy rate determination be used as a predictive test before intracytoplasmic sperm injection?. J Androl.  2005 Mar‐Apr; 26(2):235‐41.   Rodrigo L, Peinado V, Mateu E, Remohí J, Pellicer A, Simón C, Gil‐Salom M, Rubio C. Impact of different patterns  of  sperm  chromosomal  abnormalities  on  the  chromosomal  constitution  of  preimplantation  embryos.  FertilSteril. 2010 Sep; 94(4):1380‐6.   Rodrigo L, Rubio C, Mateu E, Peinado V, Milán M, Viloria T, Al‐Asmar N, Mercader A, Buendía P, Delgado A,  Escrich  L,  Martínez‐Jabaloyas  JM,  Simón  c,  Gil‐Salom  M.  FISH  onsperm  to  identifyinfertilemalepatientswithhigheraneuploidyrisk. HumReprod. 2013 June; 28(S1). Abstract:P‐458.   Rodrigo L, Rubio C, Peinado V, Villamón R, Al‐Asmar N, Remohí J, Pellicer A, Simón C, Gil‐Salom M. Testicular  sperm  from  patients  with  obstructive  and  nonobstructiveazoospermia:  aneuploidy  risk  and  reproductive 

   

 

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prognosis using testicular sperm from fertile donors as control samples. FertilSteril. 2001 Mar 1; 95(3):1005‐ 12.  Rubio  C,  Gil‐Salom  M,  Simón  C,  Vidal  F,  Rodrigo  L,  Mínguez  Y,  Remohí  J,  Pellicer  A.  Incidence  of  sperm  chromosomal  abnormalities  in  a  risk  population:  relationship  with  sperm  quality  and  ICSI  outcome.  Hum  Reprod. 2001 Oct; 16(10):2084‐92.  Tang SS, Gao H, Robinson WP, Ho Yuen B, Ma S. An association between sex chromosomal aneuploidy in sperm  and an abortus with 45,X of paternal origin: possible transmission of chromosomal abnormalities through ICSI.  Hum Reprod. 2004 Jan; 19(1):147‐51. 

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