第 21 卷 3 期 2006 年 5 月

中 国 病 毒 学 VIROLOGICA SINICA

21（3）：238-243 May 2006

用狂犬病毒核蛋白基因小干扰 RNA 库抑制狂犬病毒 复制和感染的研究 王继麟，朱家鸿**，徐葛林 （武汉生物制品研究所基因工程室， 湖北武汉 430060）

Inhibition of Rabies Virus Replication and Infection by Rabies Virus Nucleoprotein Gene siRNA Cocktail WANG Ji-lin，ZHU Jia-hong**，XU Ge-lin (Wuhan Institute of Biological Products, Wuhan 430060, China)

Abstract：Small interference RNA mixtures (siRNA Cocktails ) of Rabies virus (RV) N gene, P gene and G gene were prepared by digesting long double-stranded RNA (dsRNA) with RNase Ⅲ. These siRNA cocktails were transfecteing into BSR or MNA cell monolayers and the direct immunofluorescence assay (FA) was used to measure the replication and infection of RV on the cell monolayers. We found that the siRNA Cocktails of N gene can obviously and stably inhibit the replication and infection of RV. A descent of mRNA of N gene was also detected by RT-PCR. Under the same situation, the siRNA Cocktails of P gene or G gene showed no or weak inhibition to the replication and infection of RV. All of these results provide a basis for selecting target gene of RV in RNA itreatment and its further application. Key words：Rabies virus (RV)；siRNA Cocktail；Replication；Inhibition 摘要：采用 RNase Ⅲ消化长片段双链 RNA 的方法， 制备了狂犬病毒 N 基因、P 基因和 G 基因小干扰 RNA 库（siRNA Cocktail）。将 siRNA 转染 BSR 和 MNA 细胞单层后，采用直接免疫荧光法观察发现，N 基因 siRNA Cocktail 能 够对 RV 的复制和感染产生明显和稳定的抑制作用，并且通过 RT-PCR 在转录水平探测到 mRNA 产量的降低；而 P 基因或 G 基因 siRNA Cocktail 对 RV 的复制和感染不产生或仅产生弱的抑制作用。这一结果为 RNA 干扰在 RV 研究中靶基因的选择及进一步的应用提供了依据。 关键词：狂犬病毒（RV）；小干扰 RNA；复制；抑制 中图分类号： R373.9

文献标识码：A

RNA 干扰(RNAi)是近年来兴起的通过小干扰 RNA 在转录后水平抑制基因表达，进而研究基因功 能和基因治疗的一种新的技术方法[1~3]。已有文献 表明，应用 RNA 干扰在抑制诸如 SARS 病毒、乙 肝病毒、艾滋病毒等病毒[4~6]的复制与感染的研究 已获得了令人鼓舞的进展。但目前尚未见有狂犬病 毒的 RNAi 文献报道。 狂犬病毒（Rabies virus, RV）是引发人兽共患烈

文章编号： 1003-5125(2006)03-0238-06

性病狂犬病的病原体，该病一旦发病则 100%死亡， 目前对狂犬病的预防主要依赖于接种疫苗，尚无治 疗狂犬病有效方法。本研究将 RNA 干扰技术应用于 抑制 RV 复制与感染。我们尝试采用 RNaseⅢ消化长 片段双链 RNA 技术制备狂犬病毒 N 基因、P 基因和 G 基因小干扰 RNA 库（siRNA Cocktail） ，观察其对 狂犬病毒复制的抑制效果及差异，初步确定 RNAi 在抑制狂犬病毒复制的研究中应用的可行性，并通

收稿日期：2005-10-26，修回日期：2006-01-25 作者简介：王继麟(1959-），男，湖北省籍，副研究员，博士生，研究方向为分子病毒学和免疫学。 ** 通讯作者.Corresponding anthor.Tel: 027-88840487,E-mail:[email protected]

王继麟, 等. 用狂犬病毒核蛋白基因小干扰 RNA 库抑制狂犬病毒复制和感染的研究

过 RNAi 比较确定这些狂犬病毒基因中对何种基因 及其蛋白的抑制含对 RV 的复制和感染产生更大的 和关键性的影响。

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N-3T7：5’T7-TCTTATGAGTCACTCGAATATGTC3’(1425-1402)； P+1T7：5’T7-ACCCCTCCTTTGAACCA-3’ （14881505）， 1 材料与方法 P-1T7：5’T7-TCTGAGAAGGAGTGGGT-3’(2003-1 987)； 1.1 材料 P+2T7：5’T7-AGACAACACCCACTCCT-3’(1980 狂犬病毒 PV 株引自法国巴斯德研究所。BSR -1 996)， 细胞(乳金黄地鼠肾细胞)引自法国巴斯德研究所。 P-2T7：5’T7-AGGTTCGGTTAECAAGATG-3’ （241 该细胞是从 BHK-21 细胞克隆传代而来。MNA 细 5-2397）； 胞(小鼠神经交质瘤细胞)引自美国疾病控制中心。 G+1T7：5’T7-TCAAAAGACTCAAGGAA-3’ （3299 Silencer siRNA Cocktail Kit (RNaseⅢ)、Silencer -3315）, siRNA Tansfection Kit 为美国 Ambion 公司产品。 G-1T7：5’T7-AAGACTTATATAGGCCT-3’ （4030逆转录酶为 Promega 产品，DNA Tag 酶和 PCR 4013）； Marker 为华美公司产品。12 孔和 384 孔细胞培养 G+2T7：5’T7-GTAGATGAAAGAGGCCT-3’(4002板为 Costar 产品。FITC 标记的抗 RV 核蛋白（N） 4018), 单抗由本所基因工程室制备。 G-2T7：5’T7-TTGAAAGGACGGCCAGC-3’ （4911 1.2 感染病毒的制备、检定 -4895）。 应用持续感染狂犬病毒的 BSR 细胞制备病毒 [7] T7 即 T7 聚合酶启动子序列为：5’TAATACG 。将接种 RV 发病、濒临死亡的小鼠脑组织研磨 成匀浆，离心后取上清与 BSR 细胞悬液同时接种并 ACTCACTATAGGG-3’。 连续传代。采用直接免疫荧光法观察每代 BSR 细胞 制备按 Silencer siRNA Cocktail Kit (Rnase Ⅲ) 中荧光阳性细胞所占的比例。当阳性细胞率达到 操作说明书进行。简述之，利用设计的 5’端为 T7 100%时，收获上清或将带毒细胞与正常细胞混合培 聚合酶启动子序列的 RV 不同基因内不同区段的上 养再收获上清，分装后液氮冻存作为毒种。 下游引物，用 PCR 方法，分段合成覆盖 RV-N、P、 病毒滴定时，用含 2%BS 的 DMEM 维持液将 G 全基因序列的 7 段双链 DNA。以这 7 段双链 DNA 病毒 3 倍稀释成不同稀释度，加入在 384 孔板上生 为模板，分别转录合成两条互补的 RNA 单链。两 长成片的 BSR 单层，40µL/孔吸附 lh 后去吸附液， 条互补的 RNA 单链在 75℃下温育 5Min 后，自然 加 DMEM 维持液 40µL/孔，37℃CO2 孵箱内培养 冷却至室温，形成双链 RNA（dsRNA）。7 条 dsRNA 经 RNaseⅢ酶切消化形成 7 种长度为 13-15nt 的 N、 24h。丙酮固定细胞，加入 FITC 标记的抗 RV-N 单 P、G 片段的 siRNA Coctktail（siRNA 库），经聚丙 抗稀释液 10µL/孔，37℃湿盒内温育 45min 后，PBS 烯酰胺凝胶电泳鉴定，在分光光度计上测 A260 计算 洗 3 次，于荧光显微镜下观察评估荧光阳性细胞在 全细胞中所占的比率。 siRNA 浓度，直接用于转染。 1.3 siRNA Cocktail 的制备和鉴定 1.4 siRNA 的转染及抑制 RV 复制的判定方法 制备 siRNA Cocktail 时，PCR 扩增所使用的 7 BSR 和 MNA 细胞在 384 孔板上培养 24h 成片， 对引物的设计是按照 GenBank 公布的 RV-PV 株全 去培养液，加入低（103FFU）、中（103.5FFU）、高 序列输入 Primer 5 引物设计软件，分别设计 7 对 N、 滴度（104FFU）的 RV 吸附 lh，使吸附、转染后的 P、G 基因序列引物，引物由大连宝生物公司合成。 细胞在 24h 荧光阳性率分别控制在 20%以下、 N+1T7：5’T7-CTACAATGGATGCCGAC-3’ （24-40） ， 20%~50%和 50%以上。去吸附液，细胞单层待用。 N-1T7：5’T7-ATAGTACTCCAATTAGC-3’ （669-653） ； 制 备 siRNA 转 染 液 时 按 Silencer siRNA N+2T7：5’T7-TGCTAATTGGAGTACTA-3’ （652Transfection Kit 操作说明进行并略加修改。将 29µL 668）， （或其倍数）的 DMEM 加入 EP 管，加 lµL（或其 N-2T7：5’T7-GACATTTCATGAGGAGC-3’(1086-1 倍数）的 siPORT 转染试剂，振荡器上振荡分散， 070)； 静置 15min，加入所需浓度的 siRNA 混匀。静置 N+3T7：5’T7-TGCTGCATGTGCTCCTC-3’(106015min，同时以未加 siRNA 的分散的 siPORT 脂质 1076)， 体作为对照。将 siRNA 转染液分别加入上述吸附了

240

第 21 卷

中 国 病 毒 学

RV 的 BSR 和 MNA 细胞单层，转染 4h 后补加含 2%BS 的 DMEM 维持液至 40µL/孔，37℃、CO2 孵 箱内培养至 24h。用直接免疫荧光法在荧光显微镜 下观察。将每孔细胞分为上下或左右两个视野，评 估荧光阳性细胞所占的比例，取平均值。并计算 siRNA 对 RV 的抑制率。 1.5 转染细胞 RV-N、P、G mRNA 含量变化的检测 MNA 细胞在 12 孔板上生长成片，以适当 RV 稀释液吸附感染 lh，去吸附液，各孔分别加入浓度 为 200nmol/L 的 N、P、G siRNA-siPORT 转染液 150µL 转染 4h。补加含 2%BS 的 DMEM 维持液至 2mL/孔，37℃ CO2 孵箱培养 24h。 采用 Trizol 法提取各孔细胞的总 RNA，并以其 为模板、OligodT 为引物，42℃下逆转录为 cDNA。 PCR 扩增时反应条件为，94℃预变性 10min，按 94 ℃60s、58℃50s、72℃90s 设 30 循环，72℃终延伸 10min。各管加入 GAPDH 和相应基因的引物对。 RT-PCR 检测 mRNA 时所用的 4 对引物如下： N+2T7：5’T7-TGCTAATTGGAGTACTA-3’(652668)， N-3T7：5’T7-TCTTATGAGTCACTCGAATA TGTC -3’(1425- 1402)； P1：5’-ACCCCTCCTTTGAACCA-3’ （1488- 1505）， P2：5’-AGGTTCGGTTAECAAGATG-3’ （2415- 239 7）； G3+：5’-gATgAAgAggCCTATAT-3’(4005- 4023)， G4-：5’-TCTTCAggACTTggATCg-3’(4912- 4920)； GAPDH+：5’T7-ATCAACgACCCCTTCAT-3’(27143)， GAPDH-：5’T7-TACCTTgCCCACAgCCTT3’(689673)。 引物 N+2T7 和 N-3T7 用于检测 N 基因 mRNA， 引物 P1 和 P2 用于检测 P 基因 mRNA，引物 G3+ 和 G4-用于检测 G 基因 mRNA, 引物 GAPDH+和

Fig. 2

GAPDH-用于检测小鼠细胞 GAPDH 基因 mRNA。 1.6 从感染鼠脑制备 DNA 转录模板 采用 Trizol 法提取感染 RV、濒临死亡小鼠脑 总 RNA。逆转录时分别使用 N+1T7 和 G+1T7 为引 物，42℃逆转录 90min。 进行 N 基因段和 P 基因段 PCR 扩增时，以 N+1T7-cDNA 为模板，进行 G 基因段 PCR 扩增时， 以 G+1T7-cDNA 为模板，PCR 扩增反应条件为： 94℃预变性 10 min，按 94℃60s，58℃50s，72℃ 90s, 设 40 循环，最后 72℃终延伸 10min。

2 结果 2.1

不同基因片断 siRNA Cocktail 的制备和鉴定 使用上述特定引物对进行 PCR 扩增，获得 了覆盖 RV-N、P、G 基因全序列的 7 条两端带 T7 聚合酶启动子的 PCR 产物。图 1A 为获得的 全长 N 和 P 基因及分段 PCR 获得的 5 条双链 DNA 电泳图，图 1B 为全长 G 基因及分段 PCR 获得的 2 条双链 DNA 电泳图。各片段长度与预 期相符。

Fig. 1

图 1 RV-N、P、G 基因分段 PCR 产物电泳图 Dividing PCR products of N ,P and G gene of RV

A: M, DNA Marker; 1, N24-1425; 2, N24-669; 3, N652-1086; 4,N1060-1425; 5, P1488-2003; 6, P1488-2003; 7, P1980-2415. B:M, DNA Marker; 1, G3299-4911; 2, G3299-4030; 3, G4002-4911.

图 2 为以上述 N、P、G 基因 7 条双链 DNA 为 模 板 转 录 后 获 得 的 dsRNA 初 产 物 及 纯 化 后 的 dsRNA 电 泳 图 ， 图 2A 为 N24-669 、 N652-1086 、 N1060-1425dsRNA 纯化前后的电泳图谱。图 2B 为 P1488-2003 和 P1980-2415 dsRNA 纯化前后的电泳图，图 2C 为 G3299-4030 和 G4002-4911dsRNA 纯化前后电泳图。

图 2 N、P、G 基因转录后 dsRNA 产物的电泳图 Seven dsRNA products transcripted from PCR products of N,P and G gene .

A:M, PCR Marer; 1/2, N24-669; 3/4, N652-1086; 5/6, N1060-1425. B: M, PCR Marker; 1/2, P1488-2003; 3/4, P1980-2415. C: M, PCR Markerl; 1/2, G3299-4030; 3/4, G4002-4911.

王继麟, 等. 用狂犬病毒核蛋白基因小干扰 RNA 库抑制狂犬病毒复制和感染的研究

N、P、G 基因 7 条纯化后的 dsRNA 经 RNAse Ⅲ酶切并纯化后获得的 NCocktail1、Ncocktail2、NCocktail3、 PCocktail1、PCocktail2、GCocktail1 和 GCocktail2 13- 15nt 的 siRNA Cocktail 电 泳 结 果 见 图 3 ， 左 一 为 21nt GAPDH siRNA 对照。

表1

241

N、P、G 基因不同区段 siRNA Cocktail 对 RV 复制的 抑制作用

Table.1

Inhibition of RV replication by different siRNA Cocktail of N，P and G gene

SiRNA

RV1

RV3

RV2

cacktail Positive Inhibition Positive Inhibition Positive Inhibition

图 3 dsRNA 经 RNase III 酶切获得的 siRNA Cocktail 电泳图 Fig.3 Seven purificated 13-15nt siRNA Cocktails from dsRNAs digested by RNase III. M, 21ntGAPDH Marer；1, NCocktail1；2, Ncocktail2；3, NCocktail3；4, PCocktail1； 5, PCocktail2；6 ,GCocktail1；7, GCocktail2.

2.2

不同 siRNA Cocktail 对 RV 复制的抑制作用 表 1 为制备的上述 7 种 siRNA Cocktail 以相同 浓度转染 BSR 和 MNA 细胞后对 RV 复制的抑制作 用。结果表明，来源于 N 基因不同区段的 siRNA 对 RV 产生了明显的抑制作用，而来源于 P 基因和 G 基因不同区段的 siRNA 对 RV 仅产生较弱的或不 产生抑制作用。 2.3 不同全基因 siRNA Cocktail 对 RV 复制的抑制 作用 分别将 N 基因不同区断的三种 siRNA，P 和 G 基因不同区断的二种 siRNA 混合，组成了 N，P， G 全基因 siRNA Cocktail。通过转染感染了 RV 的

Fig.4

cells(%)

(%)

cells(%)

(%)

cells(%)

(%)

NCocktail1

0

100

0.19

99.41

26.5

56.56

Ncocktail2

0.12

45.45

7.5

76.56

37.5

38.52

NCocktail3

0.02

90.91

0.11

99.66

34.5

43.44

PCocktail1

0.17

31.82

25.5

20.31

52.0

14.75

PCocktail2

0.14

36.36

27.0

15.63

53.5

12.30

GCocktail1

0.2

9.09

29.5

7.81

54.0

11.8

GCocktail2

0.21

4.55

34.5

0

62

0

Positive cells were tested by FA

BSR 和 MNA 细胞单层，结果 N 全基因 siRNA 对 RV 复制产生了更为明显和稳定的抑制作用，而 P 和 G 全基因 siRNA 不产生或仅产生弱的抑制作用。 2.4 N、P、G 全基因 siRNA Cocktail 抑制狂犬病毒 复制增殖的动态观察。 不同滴度的 RV 感染 BSR 单层后分别再转染相 同浓度的 N、P、G 全基因 siRNA 后，对细胞单层 的特异免疫荧光先进行的动态观察，图 4 结果表明 N 全基因 siRNA Cocktail 对 RV 的复制、感染起到 明显的抑制作用，尤其在低病毒滴度感染下的效果 更明显，而 P 和 G 全基因 siRNA 仅产生极弱的抑 制作用。

图 4 不同基因 siRNA Cocktail 抑制狂犬病毒复制、感染的动态观察 Inhibition of replication and infection of RV by different gene siRNA Cocktails

A:Cell monolayers infected with Low titer of RV. B:Cell monolayers infected with middle titer of RV. C:Cell monolayers infected with high titer of RV.

2.5

不同浓度 N 基因 siRNA Cocktail 对 RV 复制的 抑制作用 图 5 表明，转染的 siRNA 浓度为 800~25 nmol/L 时随 siRNA 转染浓度的降低，细胞的特异免疫细胞

阳性率升高，而抑制率降低。当 siRNA 浓度为 25nmol/L 时，N 基因 siRNA 对低滴度的 RV 复制仍 有弱的抑制作用。 2.6 N 基因 siRNA Cocktail 在 mRNA 水平抑制 RV

242

中 国 病 毒 学

图5

N 基因 siRNA Cocktails 浓度对抑制狂犬病毒的复制 的影响 Fig.5 Inhibtion of RV by N gene siRNA Cocktail under different concentration

图 6 表明，RT- PCR 扩增的 N 基因 mRNA- PCR 产物水平和对照 N-RV-siPORT 比较，产量明显下 降，而 P 基因和 G 基因 siRNA 转染后对 RV-P 基因 mRNA-PCR 产物水平变化无明显影响。经与凝胶成 像系统连接的电脑软件测定不同 RV 泳带灰度值， 并经 GAPDH 对照带灰度值校正计算，N-siRNA Cocktail 转染的细胞，PCR 产物较对照明显降低， 下降 39.59%，而 P-siRNA Cocktail 和 G-siRNA Cockt-ail 转染的细胞 PCR 产物和对照差异在 5% 内。

图6

N、P、G 基因及细胞 GAPDH 基因 mRNA 的 RT-PCR 的产物 Fig.6 RT-PCR products of N(1-3), P(4-6), G(7-9) gene of RV and GAPDH (1-10 up line) gene mRNA

M, PCR Marker; 1,RV+NsiRNA; 2, RV+si-PORT; 3,RV; 4, RV+PsiRNA; 5, RV+si-PORT; 6, RV; 7:RV+GsiRNA; 8:RV+si-PORT; 9:RV; 10: GAPDH

3 讨论 siRNA 的制备方法有多种，其中包括化学合 成，体外转录，使用 siRNA 表达载体及用 RNase Ⅲ消化长片段双链 RNA 制备 siRNA 库[8~10]。使用 上述前三种方法制备 siRNA，一般必须对目标序列 进行选取，设计 21nt siRNA。一般病毒基因组由数 个甚至上十个基因组成，目标序列太大，而且即使 设计的 siRNA 有效，能抑制靶基因的表达，也不一 定能在病毒粒子个体水平上显示出来。采用 RNase Ⅲ消化长片段双链 RNA 制备的 siRNA Cocktail ， 它含有针对靶基因不同序列的 siRNA，其中部分 siRNA 具有 RNAi 的作用，因此通常能够保证基因

第 21 卷

被有效地抑制。 狂犬病毒 PV 株基因组序列到全长 119326p,由 N、P、M、G 和 L 5 个基因组成，转录并翻译成相 应的五种结构蛋白。我们选取 N、P、G 3 个结构基 因序列作为靶目标，制备含全基因序列的 siRNA Cocktail，通过转染细胞后的结果证实，在这三个结 构基因中，N 基因及所产生的 N 蛋白在 RV 病毒粒 子组建过程中起关键作用，通过 RNAi 抑制 N 基因 mRNA 翻译为 N 蛋白，进而达到抑制 RV 的复制与 感染；而 P 和 G 基因 Cocktail siRNA 对 RV 的复制 和感染仅产生弱的或不产生抑制作用，表明 P 蛋白 和 G 蛋白在 RV 粒子的组建过程中起相对次要的作 用。其翻译量的相对减少不会对 RV 粒子的构成产 生明显的影响。 来源于 N 基因上、中、下段 siRNA Cocktail 同 样能有效抑制 RV 的复制表明，有效的 siRNA 序列 分布于基因组上、中、下游各区段内。 实验表明 RV 感染细胞单层时有大量病毒粒子 丧失了吸附和穿透细胞的能力。当使用脂质体转染 siRNA 时，借助脂质体，RV 对细胞的吸附和穿透 能力也大大增强。因而未使用脂质体的 RV 和使用 脂质体作对照的 RV 滴度相差数倍甚至数百倍。两 种脂质体中，siPORT Amine 促进 RV 吸附和穿透细 胞的作用最强，siPORT Lipid 较弱，两种脂质体的 混合体居中。 以 RV mRNA 为模板进行 RT-PCR 扩增，mRNA 模板量的大小能够通过反应产物显示出来。我们进 行 RT-PCR 时所用的四种引物对，是从十几对不同 引物中优化筛选出来的，因而检测灵敏度特别高。 为了使转染和非转染 siRNA 细胞中的 RV mRNA 的 量的差异能够通过 RT-PCR 显示出来，我们采用低 滴度 RV 感染 MNA 细胞，使转染 siRNA、RV 复制 受抑制后的免疫荧光阳性细胞率控制在低水平（2% 左右），通过检测发现 RV-N 全基因 siRNA Cocktail 转染细胞后 RT-PCR 产物降低，而 P 和 G siRNA Cocktail 转染细胞后作用于同源基因，PT-PCR 产物 量没有明显变化。这也表明受 RNAi 作用，mRNA 量的变化与 RV 个体变化具有相关性，RV mRNA 量的变化导致 RV 复制、感染受到抑制。 本研究结果也为在 RV 序列中设计 21nt siRNA 靶基因的确定提供了依据。通过本研究推测，在 RV-N 基因上设计 21nt siRNA,只要设计序列能有效 地使 RV-N 基因沉默，便可能会对 RV 粒子的构建 产生有效的连锁反应，进而达到抑制 RV 复制与感 染的目的。

王继麟, 等. 用狂犬病毒核蛋白基因小干扰 RNA 库抑制狂犬病毒复制和感染的研究

References [1]

[2]

inhibition of HIV-1 infection [J]. Nature Med, 2002 8 (7) : 681-686.

Colbere-Garapin F,Blondel B, Saulnier A, et al. Silencing viruses

[5]

[6]

Wang J L , Zhu J H (王继麟, 朱家鸿). Study on the characterirtics of persistent infections of rabies virus in different cell culture [J].

Julian Downward RNA interference [J]. BMJ, 2004; 328 :

Chin J Zoonoses (中国人兽共患病杂志), 1999, 9 (3) : 30-33. [8]

Elbashir S M, Harborth J, Lendeckel W, et al. Duplexes of 21-nucleotide RNAs mediate RNA interference in cultured

[4]

[7]

by RNA interference [J]. Microbes Infect, 2005 , 7 (4) : 767-775.

1245-1248. [3]

243

Elbashir S M, Lendeckel W, Tusch T. RNA interference is mediated by 21-and 2-nucleotide RNAs [J]. Gene Dev, 2001, 15 : 188-200.

[9]

Yang D, Buchholz F, Huang Z, et al. Short RNA duplexes produced

mammalian cells [J]. Nature, 2001 411 : 494-498.

by hydrolysis with Escherichia coli RNase III mediate effective RNA

Arias C F, Dector M A, Segovia L, et al. RNA silencing of rotavirus

interference in mammalian cells [J]. Proc Natl Acad Sci USA, 2002,

gene expression [J]. Virus Res, 2004, 102 : 43-51.

99 (15) : 9942-9947.

McCaffrey A P, Nakai H, Pandey K, et al. Inhibition of hepatitis B

[10]

Amarzguioui M, Rossi J J, Kim D. Approaches for chemically

virus in mice by RNA interference [J]. Nat Biotechnol , 2003, 21 (6) :

synthesized siRNA and vector-mediated RNAi [J]. FEBS Lett, 2005,

639-644.

20 : 262-265.

Novina C D, Murray M F, Dykxhoorn D, et al. siRNA-directed

＜书讯＞

《病毒与人类疾病》 由 James H. Strauss 和 Ellen G. Strauss 原著、Elsevier 出版的《病毒与人类疾病》 （Viruses and Human Disease）一书的原文导读版（导读专家：中国科学院上海生物化学与细胞研究所祁国荣 教授）已于 2006 年 2 月由科学出版社科爱翻译中心出版。 本书是第一部将病毒学和人类疾病结合起来进行论述的适合作为入门教材的著作。它也是第 一本将基础的病毒学知识和病理生理学条件进行整合的入门读物。相比之下，大部分病毒学教材 更多地专注于分子生物学而忽略了生理学。 本书全面概览了动物病毒知识，整合了分子生物学、流行病学和人类病毒研究历史，提供了 目前引起社会关注的重大疾病的病毒的处理知识、基因治疗、疫苗开发等，介绍了现有的和新出 现的病毒的全球分布。文中附有少量彩图。文后还特别附了一篇有关禽流感病毒的综述。 所谓导读版，简言之就是：英文原版+中文导读。本书保留了全部英文原文，并由国内专家 在研读全书的基础上，给书中的每一章加了一个中文的摘要和评述，同时将其目录、索引等功能 性辅文译成了中文，以便读者快速查阅。 本书大 16 开精装，共 434 页，定价 75 元。 出版社可办理邮购业务、电话订购业务。欲购者请与科学出版社周文宇联系，电话：(010)64017591； 地址：北京东黄城根北街 16 号，科学出版社，邮编：100717，还办理网上订购，详情请登陆： www.keaicenter.com 或者 www.sciencep.com。