Resistencia Bacteriana en el Ecuador Simposio interdisciplinar de investigación, Postgrados y vinculación con la comunidad Iliana Alcocer Negrete, Dra. Pontificia Universidad Católica del Ecuador Escuela de Ciencias Biológicas Laboratorio de Microbiología
Laboratorio de Microbiología Escuela de Ciencias Biológicas
Año 2004
Laboratorio de Microbiología Escuela de Ciencias Biológicas
Interdisciplinaridad ESCUELA DE CIENCIAS BIOLÓGICAS
FACULTAD DE MEDICINA
Iliana Alcocer
Jeannete Zurita
Año 2009 Confianza Apoyo mutuo Grupos de trabajo Apoyo de la PUCE
Laboratorio de Microbiología Escuela de Ciencias Biológicas Biología Bioanálisis
Biología
Biología Medicina Biología
Laboratorio de Microbiología Escuela de Ciencias Biológicas Chef DRIII System Para análisis de clonalidad bacteriana por electroforesis de campo pulsado
1. PUCE 2. San Francisco 3. INH
Laboratorio de Microbiología Escuela de Ciencias Biológicas Sistema de fotodocumentación Molecular Imager Gel Doc XR+ BioRad
Laboratorio de Microbiología Escuela de Ciencias Biológicas
Laboratorio de Microbiología Escuela de Ciencias Biológicas
Laboratorio de Microbiología Escuela de Ciencias Biológicas
Laboratorio de Microbiología Escuela de Ciencias Biológicas
Antimicrobianos • Los antimicrobianos son compuestos relativamente sencillos, producidos por bacterias u hongos que atacan específicamente a las bacterias. • Tienen capacidad, en baja concentración, de inhibir el crecimiento bacteriano • Pueden ser naturales, sintéticos o semisintéticos.
Antimicrobianos
1940
Alexander Fleming, 1928 Desde el descubrimiento de la penicilina, se han descubierto una docena de nuevos tipos de antimicrobianos y optimizado o sintetizado cerca de una centena.
Resistencia bacteriana
Cepas resistentes raras Exposición a antimicrobianos
Cepas resistentes predominantes
Resistencia Introducción en la terapia Aislamiento de cepas resistentes Capacidad adaptativa de las células bacterianas Alta tasa de diseminación por transferencia horizontal de genes de resistencia
Resistencia bacteriana Patógeno Resistente Patógeno Prevención de la transmisión
Prevención de la infección
Infección
Resistencia a los antimicrobianos
Diagnóstico y tratamiento eficaces
Uso acertado Uso de antimicrobianos
Preocupación mundial • Resistencia a betalactámicos: BLEEs –AMP-C –Carbapenemes –
• Resistencia a quinolonas • Resistencia a aminoglucósidos
Diseminación de la Resistencia bacteriana Beta lactamasas de espectro extendido
BLEE Enzimas capaces de conferir a la bacteria resistencia a penicilinas, cefalosporinas de primera, segunda, tercera e inclusive cuarta generación y a los monobactámicos como el aztreonam, pero no a cefamicinas ni carbapenémicos
Diseminación de la Resistencia bacteriana Enzimas modificadoras de aminoglucósidos EMAs
1. acetiltransferasa (AAC), 2. fosfatidil transferasa (APH) y 3. adenil transferasa (ANT o AAD).
Resistencia Adquirida Klebsiella pneumoniae Serratia marcenses
Pseudomonas aeruginosa
Pseudomonas aeruginosa
Pseudomonas Klebsiella aeruginosa pneumoniae
AMIKACINA GENTAMICINA ESTREPTOMICINA TOBRAMICINA
IMIPENEM MEROPENEM IMIPENEM MEROPENEM
Carbapenemasas Metalo-b-lactamasas
Tipo Serin-β-lactamasas (Residuo de Serina en el sitio activo)
Clase A
Clase A
SME NMC SFC
KPC GES IMI
E. cloacae S. marcenscens
K. pneumoniae P. aeruginosa
(Cationes divalentes tipo Zinc)
Clase D OXA Acinetobacter baumannii
Clase B IMP VIM SPM GIM SIM NDH
Acinetobacter baumannii S. marcescens P. aeruginosa
Especies patógenas:
Klebsiella pneumoniae - Infecciones de tracto respiratiorio - Infección de vías urinarias - Sistema nevioso osteoraticular - Sepsis
Especies patógenas:
Escherichia coli
- Infección de vías urinarias - Sepsis - Meningitis - Enfermedad diarreica
Especies patógenas:
Serratia marcescens - Infecciones de tejidos - Sepsis
Especies patógenas:
Pseudomonas aeruginosa - patógeno oportunista principalmente en ambientes hospitalarios
Materiales y métodos
Hospitales participantes de la REDNARBEC y laboratorios interesados 12. Vicente de Paúl 13. IESS Ibarra 14. Centro Médico Ibarra
15. Rodríguez Zambrano 16. Icaza Bustamente 17. Guayaquil 18. Roberto Gilbert 19. Luis Vernaza 20. De infectología 21. Alcívar
1. Carlos Andrade Marín 2. De las Fuerzas Armadas 3. De la Policía 4. Baca Ortiz 5. Enrique Garcés 6. Solca Quito 7. Vozandes Quito 22. Patronato San José 23. Clínica la Merced 24. Clínica Guadalupe
8. Vozandes Shell
9. Homero Castañer
10. Solca Cuenca 11. Clínica Santa Ana 25. Clínica del Río Cuenca
Población bacteriana
•2792 bacterias de origen clínico – – – – – – – – – –
Escherichia coli Klebsiella pneumoniae Serratia marcescens Enterobacter cloacae Enterobacter aerogenes Proteus mirabilis Citrobacter freundii Staphylococcus aureus Pseudomonas aeruginosa Shigella spp.
IIdentificación genotípica Identificación de genes de resistencia y determinantes genéticos relacionados en aislados entéricos de la Colección Bacteriana Quito Católica CB-QCA Identificación de genes por PCR
Secuenciamiento
DETECCIÓN DE GENES POR PCR Y SECUENCIAMIENTO BLEE: blaSHV, blaTEM, blaPER, blaCTX-M y AmpC CARBAPENEMASAS: blaKPC, blaGES, blaVIM, blaIMP
blaSPM
EMAs: aac(3)-IIa, aac(6’)-Ib, ant(2”)-Ia,, Resistencia a quinolonas: qnr IntI y RV de integrones clase I
Diseño de primer y padronización para detección de genes
María Fernanda Yauri
David Ortega
Pedro Barba
Genotipaje de la resistencia a antibióticos en aislados clínicos de Klebsiella pneumoniae productores de βlactamasas de espectro extendido (BLEE) David Ortega Paredes
Confirmación fenotípica de producción de β-lactamasas de espectro extendido (BLEE)
•
Prueba confirmatoria de producción de BLEE: Positivo aumento < 5 mm en el halo de inhibición de cefalosporina de tercera generación / clavulanato
Detección de genes en
Klebsiella pneumoniae
100.0
•blaSHV cromosómico
•Componente de ADN cromosómico en ADN plasmidial
0.0
Detección de genes en
Klebsiella pneumoniae
Primer lugar en la categoría pregrado universidades el área Ciencias de la Salud y el Segundo lugar dentro de todas las áreas en la categoría Pregrado Universidades en la IX Feria Nacional de Ciencia, Tecnología e Innovación (FENACYT 2008)
Búsqueda de BLEE y carbapenemasas en enterobacterias
Diana Muñoz
Gabriela Yépez
Ana María Gómez
Castañier en Azogues
Enrique Garcés
232
Pablo Arturo Suárez
124
De La Policía Nacional
233
Gineco-Obstétrico Isidro Ayora
Vozandes
De Niños Baca Ortiz
Solón Espinosa, Solca Quito
General De Las Fuerzas Armadas No.1
400
Carlos Andrade Marín
Número de aislados
Bacterias entéricas de origen clínico 1200 1075
1000
800
600
382 301
200 212
107 69
0 5
Comunitarias
60
Hospitalarias 49
50
49
40 33
34 34
30
20
19
17
16 11
10
7
15
13 9
8 5 2
4 1
0
12,1 / 2693/325
Enrique Garcés
Pablo Arturo Suárez
De La Policía Nacional
Gineco-Obstétrico Isidro Ayora
Vozandes
19,4
De Niños Baca Ortiz
18,9
Solón Espinosa, Solca Quito
20,0
General De Las Fuerzas Armadas No.1
Carlos Andrade Marín
Porcentaje
Porcentaje de BLEE en bacterias entéricas 25,0 23,2
18,9
17,3
15,0 15,1
13,1
10,0 6,3
5,0 3,0
0,0
738 pb Control negativo
Tercer caso Cuenca
Segundo caso Guayaquil
Primer caso Azogues
Control positivo
Identificación molecular de KPC
Pseudomonas aeruginosa RESISTENCIA A CARBAPENEMES
37%
48/12 9
Aislados Resistentes a Carbapenemes
RESISTENCIA A AMINOGLUCÓSIDOS
61% 78/129
Aislados Resistentes a Aminoglucósidos
Identificación de blaGES en aislados de Pseudomonas
aeruginosa
31% (44/129)
Identificación de blaKPC en aislados de Pseudomonas
aeruginosa
5,4% (7/129)
Identificación de blaVIM y blaIMP en aislados de Pseudomonas aeruginosa
INTEGRONES
3,1%
22,5% (29/129)
blaVIM
7,8%(10/129)
blaIMP
Amplificación de genes EMAs en
Pseudomonas aeruginosa
27/129 (20,9%)
21/129 (16,3%)
13/129 (10,1%)
6/129 (4,7%)
Integrones Clase I Total Aislados
Presentan Integrón Clase I
Porcentaje
129
79
61,2%
% genes productores de carbapenemasas presentes Integrones Clase I
21,7%
Búsqueda de carbapenemasas en enterobacterias
Camila Cilveti
Andrea León
Nathaly Espinel
Identificación molecular de BLEE TEM
862pb 858pb 585pb
SHV
CTX-M
Identificación molecular de carbapenemasas: serin-beta-lactamasas
blaKPC blaGES
864 pb 738 pb
A
Identificación molecular de carbapenemasas: metalo-beta-lactamasas blaVIM
A
blaIMP
Número de aislamientos entéricos positivos para los genes de análisis Número de aislamientos
300
281
Total Hospitalarios
250
Total Comunitarios
200 162 150 125 100
101
98
51
50
9
0
0 Total
blaCTX
blaTEM
27
16 blaSHV
0
blaPER
0 bla KPC
5
0
bla GES
1
0
bla IMP
4
0
bla VIM
Total blaCTX blaTEM blaSHV blaPER blaKPC blaGES blaIMP blaVIM
Casos con blaKPCn
Quito 6
7
8
10
14-22
11
Guayaquil 2
9
12
Azogues 1 3 13
4
5
Cuenca
Klebsiella pneumoniae Serratia marcescens Klebsiella oxytoca Enterobacter aerogens Enterobacter cloacae
Genotipificación de KPC por campo pulsado
Casos con blaGESn
8
Quito 11
14 15
Cuenca
Klebsiella pneumoniae Klebsiella oxytoca
Casos con blaIMPn
Quito
Cuenca
Serratia marcescens
Casos con blaVIMn
Quito 16 19 17
Cuenca
Klebsiella pneumoniae Morganella morganii Serratia marcescens
Conclusiones
CONCLUSIONES • Dentro de la población de estudio se encontró alta resistencia a betalactámicos, aminoglucósidos y carbapenemes y no registraron resistencia a polimixina B, colistina, tigeciclina ni fosfomicina. • Los resultados confirman que en nuestro medio hay una evidente asociación entre producción de BLEE y resistencia a otras familias de antibióticos, en especial quinolonas, aminoglicósidos y carbapenemes. • Existe una relación entre la presencia de plásmidos y de integrones con la alta resistencia antimicrobiana.
