PLATELIA™ Parvovirus B19 IgM 96

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Detección cualitativa de anticuerpos del Parvovirus B19 IgM en suero y plasma humano mediante un inmunoensayo enzimático.

TABLA DE CONTENIDOS 1-

CAMPO DE APLICACIÓN..................................................................

2-

RESUMEN Y EXPLICACIÓN DE LA PRUEBA...................................

3-

PRINCIPIOS DEL PROCEDIMIENTO.................................................

4- REACTIVOS........................................................................................ 5-

PRECAUCIONES DE USO.................................................................

6- MUESTRAS........................................................................................ 7-

MATERIALES NECESARIOS..............................................................

8-

INSTRUCCIONES DE USO................................................................

9-

CONTROL DE CALIDAD ...................................................................

10- INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS...................................... 11- LIMITACIONES DE LA PRUEBA........................................................ 12- CARACTERÍSTICAS DEL RENDIMIENTO ........................................ 13- REFERENCIAS...................................................................................

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1- CAMPO DE APLICACIÓN Platelia™ Parvovirus B19 IgM es una prueba inmunoenzimática de tipo ELISA que utiliza la inmunocaptura para la detección cualitativa de anticuerpos IgM producidos contra Parvovirus B19 (PVB19) en suero o plasma humano. La prueba debe utilizarse como una ayuda para el diagnóstico de infección de Parvovirus B19 y conjuntamente con el historial clínico del paciente.

2- RESUMEN Y EXPLICACIÓN DE LA PRUEBA Parvovirus B19 (PVB19) es el único virus de la familia parvoviridae que infecta a los humanos. Es un virus pequeño, icosaédrico y con ADN monocatenario, envuelto en una cápside sin cubierta vírica. El genoma B19 es especialmente codificador para dos proteínas estructurales de cápside VP1 (83kDA) y VP2 (53kDA), y una proteína no estructural, NS-1, necesaria para la réplica y propagación del virus en la célula.Parvovirus B19 es ubicuo y se contagia endémicamente en todo el mundo. La seroprevalencia varía del 2-10% en niños menores de 5 años hasta el 50-70% en la edad adulta. Se propaga principalmente por medio de las gotitas respiratorias, pero también puede transmitirse a través de transfusiones y de madre a hijo cuando las mujeres embarazadas se infectan durante el embarazo. El virus tiene un tropismo para los precursores eritropoyéticos en la médula ósea y en la sangre que causan lisis celular. Según la competencia inmunológica, puede provocar anemias más o menos graves. La infección por Parvovirus B19 es común y suele generar síntomas leves. Se sabe que es el agente causante de erupciones eritematosas (eritema infeccioso) en los niños, o síntomas más complicados como artropatía aguda o varias formas de artritis en adultos. Asimismo, en poblaciones más específicas, la infección por Parvovirus B19 puede provocar anemias graves, como anemia aplástica transitoria (TAC) en pacientes con trastornos hemolíticos preexistentes, insuficiencia crónica de médula ósea, y anemia en pacientes inmunodeprimidos o hidropesía fetal cuando se transmite al feto a través de la placenta. La infección durante el embarazo puede incluso provocar un aborto espontáneo. La detección de Parvovirus B19 IgG e IgM es especialmente adecuada para determinar el estado inmunológico de los pacientes de riesgo con cuadros clínicos inusitados y que podrían padecen una infección aguda o reciente, y más especialmente en mujeres embarazadas que evitan complicaciones graves para el feto en caso de sospecharse una infección de Parvovirus B19.

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3- PRINCIPIOS DEL PROCEDIMIENTO Platelia™ Parvovirus B19 IgM es una prueba de tipo ELISA de µ-inmunocaptura para la detección de anticuerpos IgM producidos contra Parvovirus B19 (PVB19) en suero o plasma humano. El ensayo utiliza anticuerpos monoclonales IgM antihumanos de ratón fijados sobre una microplaca. Una vez añadida la muestra, todos los IgM de la muestra se unirán al IgM antihumano en los pocillos del ensayo. Después de una fase de lavado, se añade el antígeno recombinante viral producido por baculovirus y éste se une a los anticuerpos IgM específicos contra PVB19 solo cuando están presentes. El exceso se elimina después de la segunda fase de lavado, y los anticuerpos anti-PVB19 monoclonales de ratón marcados con peroxidasa se distribuyen y forman un complejo con el antígeno PVB19 capturado. Tras una fase de lavado final, el complejo se detecta añadiendo sustrato de tetrametilbencidina (TMB) que se vuelve de color azul en presencia de peroxidasa. La adición del reactivo que detiene la reacción genera un producto final amarillo estable.

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M .

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n e

4- REACTIVOS Los reactivos son suministrados en cantidad suficiente para realizar 96 determinaciones en un máximo de 6 series. Todos los reactivos están destinados a utilizarse únicamente en el diagnóstico in vitro.

1. Descripción Identificación de la etiqueta R1

R2

e

Microplate

Descripción Microplaca 12 x 8 pocillos fijados con anticuerpo monoclonal IgM antihumano de ratón

Concentrated Solución de lavado concentrada (10x) Washing Tampón de fosfato con Tween® 20 Solution (10x)

Presentación /preparación 1 Lista para usar 1 x 100 ml Para diluir

R3

Negative Control

Control negativo Plasma humano negativo para IgM contra Parvovirus B19, Albúmina de suero bovino. Conservante: azida de sodio (0,08 w/v%)

1 x 2 ml Listo para usar

R4

Calibrator

Calibrador del punto de corte Plasma humano positivo para IgM contra Parvovirus B19, Albúmina de suero bovino. Conservante: azida de sodio (0,08 w/v%)

1 x 2 ml Listo para usar

R5

Positive control

Control positivo Plasma humano positivo para IgM contra Parvovirus B19, Albúmina de suero bovino. Conservante: azida de sodio (0,08 w/v%)

1 x 2 ml Listo para usar

R6a

Antigen

Antígeno viral (liofilizado) Antígeno recombinante B19 de parvovirus humano purificado

6 x 1 qs. 2 ml Para reconstituir

R6b

Conjugate

R7

Diluent

R9

R10

Conjugado 1 x 16 ml Anticuerpo monoclonal contra el parvovirus B19 Listo para usar antihumano de ratón marcado con peroxidasa, Albúmina de suero bovino. Diluyente para muestras Tampón de fosfato, Albúmina de suero bovino.

Chromogen Cromógeno TMB 3.3’.5.5’ tetrametilbencidina (< 0,02%), H2O2 ( 1,500 DO (R4 máx) / DO (R4 mín) < 2 Si estos criterios de validación no se cumplen, volver a empezar la manipulación.

3. Interpretación de los resultados La presencia o ausencia del anticuerpo IgM contra Parvovirus B19 en la muestra sometida a ensayo se determina comparando la densidad óptica de la muestra con el valor umbral. Ratio de muestra

Resultado

Ratio M. < 0,80

Negativo

0,80 ≤ Ratio M. < 1,00

Dudoso

Ratio M. ≥ 1,00

Positivo

Deberá prestarse una especial atención a los demás elementos de diagnóstico para los resultados que estén cerca de la zona gris. En caso de resultado dudoso, se recomienda poner a prueba una nueva muestra transcurridas 1-2 semanas. Pueden considerarse otros métodos y síntomas clínicos. Atención: muestras con DO