PEDRO PAULO DE ANDRADE SANTOS

ESTUDO IMUNO-HISTOQUÍMICO DA PRESENÇA DE MIOFIBROBLASTOS E DA EXPRESSÃO DO FATOR TRANSFORMADOR DE CRESCIMENTO-β1, INTERFERON-γ, METALOPROTEINASE DE MATRIZ 13 E INDUTOR DE METALOPROTEINASES DE MATRIZ EM LESÕES ODONTOGÊNICAS EPITELIAIS.

NATAL – RN 2012

UFRN- Universidade Federal do Rio Grande do Norte CCS- Centro de Ciências da Saúde Programa de Pós-graduação em Patologia Oral Doutorado em Patologia Oral

ESTUDO IMUNO-HISTOQUÍMICO DA PRESENÇA DE MIOFIBROBLASTOS E DA EXPRESSÃO DO FATOR TRANSFORMADOR DE CRESCIMENTO-β1, INTERFERON-γ, METALOPROTEINASE DE MATRIZ 13 E INDUTOR DE METALOPROTEINASES DE MATRIZ EM LESÕES ODONTOGÊNICAS EPITELIAIS. Tese apresentada ao Programa de PósGraduação em Patologia Oral da Universidade Federal do Rio Grande do Norte como parte dos requisitos para a obtenção do Título de Doutor em Patologia Oral.

Doutorando: Pedro Paulo de Andrade Santos Orientadora: Profa. Dra. Lélia Batista de Souza

NATAL / RN 2012

Catalogação na Fonte. UFRN/ Departamento de Odontologia Biblioteca Setorial de Odontologia “Profº Alberto Moreira Campos”. Santos, Pedro Paulo de Andrade. Estudo imuno-histoquímico da presença de miofibroblastos e da expressão do fator transformador de crescimento-beta1, interferon gama, metaloproteinase de matriz 13 e indutor de metaloproteinases de matriz em lesões odontogênicas epiteliais. Natal, RN, 2012. 143 f. : il. Orientadora: Profa. Dra. Lélia Batista de Souza. Tese (Doutorado em Patologia Oral) – Universidade Federal do Rio Grande do Norte. Centro de Ciências da Saúde. Programa de Pós-Graduação em Patologia Oral. 1.Miofibroblastos – Tese. 2. Lesões odontogênicas – Tese. 3. Metaloproteinases da matriz – Tese. 4. Indutor de metaloproteinase de matriz–Tese. 5. Imuno-histoquímica – Tese. I. Souza, Lélia Batista de. II. Título.

RN/UF/BSO

Black D65

DEDICATÓRIA

Dedico este trabalho À aquele que me deu o dom da vida, ser de luz e infinita bondade que sempre esteve e estará ao meu lado em todos os momentos, este trabalho constitui mais uma vitória em minha vida que não existiria sem a sua presença. Muito obrigado meu Deus!! Aos meus pais, Santos e Neide pelo exemplo e amor que sempre me deram, constituindo uma família com alicerces sólidos gerando frutos, resultado de toda dedicação de anos e anos. Ser um de seus filhos é motivo de muita alegria, pois me orgulho muito dos pais maravilhosos que tenho e que sempre estarão comigo onde quer que eu esteja. Ao meu irmão e amigo Paulo Roberto que sempre soube me estimular e me incentivar tanto nos momentos alegres quanto nos momentos difíceis da minha vida, sei que posso contar com você sempre e pode ter a certeza que a recíproca é verdadeira. E mais orgulhoso ainda por ser meu colega Professor Universitário.

AGRADECIMENTOS

Agradecimentos

À minha orientadora Profa. Dra. Lélia Batista de Souza por ter me escolhido para ser seu orientando desde o mestrado e por ter renovado a confiança em mim, continuando a me orientar no doutorado, ao final desses 6 anos, me sinto grato não só pelos conhecimentos transmitidos, mas também pelos momentos de descontração, sei que sou apenas mais um dos seus filhos patológicos, mas talvez o único que ousou chama-la de “Mãe Patológica”. Muito obrigado por tudo e por estar presente em uma fase tão importante na minha vida. Ao Prof. Dr. Leão Pereira Pinto por ser o grande idealizador do Programa de PósGraduação em Patologia Oral da UFRN, sendo possível a realização do meu sonho, além da transmissão de conhecimentos e pelas demonstrações constantes de carinho dispensadas a minha pessoa. À Profa. Dra. Roseana de Almeida Freitas pelos ensinamentos prestados, amizade e carinho, além de ser uma profissional que dignifica a nossa profissão. À Prof. Dra. Hébel Cavalcanti Galvão pela constante alegria que lhe são peculiares além da transmissão de conhecimentos durante esses anos de mestrado e doutorado. Ao Prof. Dr. Antônio de Lisboa Lopes Costa pelos conhecimentos transmitidos, momentos de descontração, além dos constantes embates políticos travados por nós nesses 6 anos, sempre muito produtivos. À Profa. Dra. Lélia Maria Guedes Queiroz pelo carinho e atenção constantes a mim dispensados, além da transmissão de conhecimentos que contribuíram para a minha formação. À Profa. Dra. Márcia Cristina da Costa Miguel pela amizade, momentos de descontração, assim como pelos ensinamentos prestados. À Profa. Dra. Éricka Janine Dantas da Silveira pelos ensinamentos transmitidos, amizade e constante disponibilidade para o trabalho. À Profa. Dra. Ana Miryan Costa de Medeiros pelos ensinamentos transmitidos na clínica de estomatologia, tão importante na minha formação, além da amizade e carinho disponibilizados a minha pessoa. Ao Prof. Dr. Jean Nunes dos Santos pela amizade e por ter cedido alguns casos tão importantes para a realização desse trabalho e finalmente a realização de um sonho. Ao Prof. Dr. Emanuel Sávio de Souza Andrade pelas contribuições pertinentes em minha Defesa da Dissertação de Mestrado além de ceder casos tão importantes para a execução desta Tese de Doutorado. Ao Prof. Dr. Edir Carneiro Leão meu professor de endodontia na graduação da UFPE, foi quem primeiro identificou em mim um futuro professor, me dando estímulo para que eu fizesse um mestrado assim como um doutorado e dessa forma entrasse na carreira docente.

Ao Prof. Dr. Ryan Paulo da Costa Campos (in memoriam) meu professor de oclusão e prótese na graduação na UFPE que primeiro me orientou na realização de trabalhos, me estimulando e desta forma sendo também importante nessa vitória. À Valéria de Souza Freitas, a qual posso chamá-la de simplesmente “Val”, uma amiga verdadeira que está sempre pronta a ajudar, pode ter certeza que aprendi muito com você e quero poder desfrutar dessa amizade sempre. À Pollianna Alves Muniz ou como costumo chamar de “Polli”, uma pessoa muito especial que tive o prazer de conviver na patologia que estará sempre guardada no meu coração. À Marta Rabello Piva ou simplesmente “Martoca”, pessoa que me orientou nos primeiros passos na observação de lâminas na patologia além de sua amizade. Ao Cassiano Francisco Weege Nonaka, o “Grande Nonaka” como costumo chamar, agradeço bastante pelos ensinamentos durante todo esse meu período de pós-graduação, aprendi muito com você e fico feliz por ter a sua amizade. À Karuza Maria Alves Pereira ou simplesmente “Karuzita”, que tive a grata satisfação de conviver na patologia, sempre me transmitindo seus conhecimentos além da sua amizade tão importante para mim. À Cristina Ruan Ferreira de Araújo a quem costumo chamar de “Ruanita”, que atualmente anda meio sumida, pela amizade e pelo carinho, disponibilizados a minha pessoa. À Águida Henriques, Marianne Carvalho “Marota”, Keila Martha “Keiloca” e Joabe Pereira “Joteibes” pessoas mais que especiais responsáveis por momentos de muita alegria, descontração e o mais importante de tudo, amizade sincera e verdadeira, sempre dispostos a ajudar em qualquer momento, levarei vocês em meu coração. À Cyntia Helena, pela amizade e pelo companheirismo, não só na pós-graduação da UFRN como também pela satisfação de ser seu colega de disciplina na UFCG. À Bruna Rafaela ou “Brunica”, pela amizade além dos momentos de descontração, responsáveis por muitas gargalhadas nesse período de pós-graduação. Aos colegas da minha turma de mestrado responsáveis por momentos de descontração, estudo, amizade e acima de tudo respeito mútuo, turma simplesmente inesquecível composta por Betânia, Déborah, Ruth e Domingos. Aos demais colegas de pós-graduação que durante esses 6 anos tive a felicidade de conviver, João, Danielle, George, Igor, Janaína, Claudine, Manuel, Adriana Amorim, Bruna Amaral, Ana Rafaela, Alessandra, Alexandre, Ana Cristina, Emeline, Felipe, Maiara, Thaís, Dmitry, Bárbara, Natália, Clarissa, Denise, Ana Luiza, Lucileide, Pedro Carlos, Edilmar, Stefânia, Aparecida, Emília, Fernando, Nazareno e Adriana Costa. Aos técnicos de laboratório Canindé, Hévio, Sandrinha e Ricardo pela amizade e disponibilidade frente a execução de parte fundamental das nossas pesquisas e de nosso aprendizado.

As funcionárias, Gracinha, Idel e Lourdinha pelo carinho, atenção e momentos de muita descontração. Aos colegas professores do Departamento de Morfologia da UFRN, Christina Camillo, Raimundo Fernandes, Naisandra Bezerra, Simone Almeida, Nazaré Arruda, Carlos Augusto, Renata Swany, Gustavo da Cunha, Ranke dos Santos, Expedito Silva, Bento João, Celcimar Alves e as técnicas de laboratório Melyna Souto e Socorro Medeiros no período em que tive a felicidade de trabalhar, conviver e aprender como professor substituto de histologia. À Universidade Federal do Rio Grande do Norte (UFRN). À Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) e ao Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq).

RESUMO

RESUMO Os miofibroblastos são células que apresentam um fenótipo híbrido exibindo características morfológicas de fibroblastos e de células musculares lisas, sendo a aquisição de tal fenótipo denominada diferenciação, passando então a expressar a α-SMA, a qual é importante na identificação dessas células. Estudos têm sugerido que os miofibroblastos apresentam relação com a agressividade de diversas lesões e que o seu processo de diferenciação estaria relacionado à expressão do TGF-β1 e do IFN-γ atuando, respectivamente, no estímulo e na inibição dessa diferenciação. O objetivo deste trabalho foi investigar o papel dos miofibroblastos em lesões odontogênicas epiteliais, relacionando-os à agressividade das lesões e analisar por meio da imuno-histoquímica, a expressão do TGF-β1 e IFN-γ no processo de diferenciação, além da análise da MMP-13 que é ativada por miofibroblastos e do indutor de metaloproteinases de matriz (EMMPRIN) como precursor desta MMP. A amostra foi constituída por 20 ameloblastomas sólidos, 10 ameloblastomas unicísticos, 20 ceratocistos odontogênicos e 20 tumores odontogênicos adenomatóides. Para a avaliação dos miofibroblastos, foram quantificadas as células imunorreativas ao anticorpo αSMA presentes no tecido conjuntivo, próximo ao tecido epitelial. As expressões de TGF-β1, IFN-γ, MMP-13 e EMMPRIN, foram avaliadas no componente epitelial e no conjuntivo, estabelecendo-se o percentual de imunorreatividade e atribuindo-se escores de 0 a 4. A análise dos miofibroblastos evidenciou maior concentração nos ameloblastomas sólidos (média de 30,55), seguido pelos ceratocistos odontogênicos (22,50), ameloblastomas unicísticos (20,80) e tumores odontogênicos adenomatóides (19,15) com valor de p= 0,001. Não foi encontrada correlação significativa entre TGF-β1 e IFN-γ no processo de diferenciação dos miofibroblastos, bem como na relação entre a quantidade de miofibroblastos e a expressão da MMP-13. Constatou-se, correlação estatística entre MMP-13 e TGF-β1 (r= 0,087; p= 0,011) além de significante correlação entre MMP-13 e IFN-γ (r=0,348; p=0,003). Entre EMMPRIN e MMP-13 verificou-se significância (r= 0,474; p