南 方 水 产 科 学

第 10 卷第 5 期 2 01 4 年 1 0 月

Vol. 10, No. 5 Oct. , 2014

South China Fisheries Science

doi: 10. 3969 / j. issn. 2095 - 0780. 2014. 05. 001

养殖杂交鳢迟缓爱德华菌的分离鉴定 1

2

1

1

1

1

陈言峰 , 周爱国 , 陈冠锋 , 陈建酬 , 张继平 , 张辉华

( 1. 佛山科学技术学院生命科学学院, 广东 佛山 528231; 2. 华南农业大学动物科学学院, 广东 广州 510642)

摘要: 从患病杂交 鳢 [ 斑 鳢 ( Channa maculata) ♀ ×乌 鳢 ( C. argus) ♂] 体 内 分 离 到 2 株 致 病 菌 ( ZS201364-1 和 ZS201364-2) , 通过对其生化特性与 16S rRNA 基因序列进行分析, 确定 为迟缓爱德 华菌( Edwardsiella tarda) 。该 致病菌兼性厌氧, 为革兰氏阴性短杆菌, 能运动, 能发酵葡萄糖、麦芽糖。吲哚试验和 MR 试验均为 阳性。2 株 致病菌对杂交鳢的半致死剂量( LD50 ) 分别为 7. 1 ×105 cfu・g - 1 和 5. 6 ×105 cfu・g - 1 。ZS201364-1 最 适生长温度 为 25 ～35 ℃、pH 为 7 ～8、氯化钠( NaCl) 质量分数为 1% , 对头孢

肟、环丙沙星、诺氟沙星等抗生素高度敏感。

关键词: 杂交鳢; 迟缓爱德华菌; 分离; 鉴定 中图分类号: S 941. 42

文献标志码: A

文章编号: 2095 - 0780 - ( 2014) 05 - 0001 - 07

Isolation of Edwardsiella tarda from cultured hybrid snakehead ( Channa maculata♀ ×C. argus♂) and its identification 1

2

1

1

1

1

CHEN Yanfeng , ZHOU Aiguo , CHEN Guanfeng , CHEN Jianchou , ZHANG Jiping , ZHANG Huihua ( 1. College of Life Science, Foshan University, Foshan 528231, China; 2. College of Animal Science, South China Agricultural University, Guangzhou 510642, China)

Abstract: Two pathogenic bacteria ( ZS201364-1, ZS201364-2) isolated from diseased hybrid snakeheads ( Channa maculata♀ ×C. argus♂) were identified to be Edwardsiella tarda by analyses of biochemical features and 16S rDNA sequence. The anaerobic, gram negative, bacilliform and motile isolates utilized glucoses and maltose as energy. Both indole and M. R. tests proved positive. The LD50 s of the isolates to healthy hybrid snakeheads were 7. 1 ×105 cfu・g - 1 and 5. 6 ×105 cfu・g - 1 , respectively. The optimal growth conditions of strain ZS201364-1, which was highly susceptible to cefotaxime, ciprofloxacin and norfloxacin, were 25 ～35 ℃ pH 7 ～8 and 1% NaCl. Key words: hybrid snakehead; Edwardsiella tarda; isolation; identification

乌鳢( Channa argus) 和斑 鳢 ( C. maculata) 均属 鲈形目, 攀 鲈 亚 目, 鳢 科, 鳢 属

[ 1]

, 两 者均为淡

效益

[ 2]

。目前, 有 关 杂 交 鳢 的 研 究 主 要 涉 及 其 染

色体 组 型 [ 7]

[ 3 - 4]

、胚胎发 育 [ 8]

[ 5]

、生长 性能

[ 6]

、血液

水养 殖 的 名 优 品 种。 杂 交 鳢 [ ( C. maculata) ♀ ×

指标

( C. argus) ♂ ] , 俗 称 杂 交 生 鱼, 是 以 乌鳢 为 父 本

科鱼类抗病能力较强, 但高密度养殖条件下一旦养

和斑鳢为 母本 杂 交 的 子 一 代, 具 有 明 显的 杂 种 优

殖水体水质恶化, 鳢科鱼类患病也时有发生, 迄今

势。杂交鳢的成功培育和养殖推广克服了其父母本

已造成 了 严重 的 经 济 损 失

养殖的地域局限性, 近年来已逐渐成为鳢科鱼类的

的细菌性病 害 的报 道 鲜少, 除 刘春 等

主要养殖品种, 具有广阔的养殖前景和巨大的经济

氏 气 单胞 菌 ( Aeromonas schubertii) 引 起杂 交 鳢 的结

与 肌肉 营 养 成 分

等 方 面。自 然 条 件 下 鳢

[ 9 - 1 5]

。然 而 有 关杂 交 鳢

收 稿 日 期: 2014 -01-24; 修回日 期 : 2014-03 -19 资 助 项 目: 佛 山 科 学 技术 学院校 级科 研项目 ; 广 东省教 育部 产学研 项目 ( 2010b090400255) 作 者 简 介: 陈 言 峰 ( 1981 - ) , 男 , 博士 , 助教 , 从 事淡水 养殖 鱼类病 害研 究。 E-mail: chyfwf@ 126. com 通 信 作 者: 张 辉 华 ( 1971 - ) , 教 授, 从 事淡水 鱼类 生态养 殖技 术研究 。 E-mail: hhzhang2@ 163. com

All Rights Reserved. South China Fisheries Science http://www.schinafish.cn

[ 16 ]

报 道 过舒

南 方 水 产 科 学

2

第 10 卷

节病之外, 国内外尚未见其他报道。笔者从广东省

94 ℃预变 性 5 min 1 次; 94 ℃ 30 s, 58 ℃ 45 s,

中山市某鱼场的患病 杂交 鳢分 离得 到 2 株 致病 菌,

72 ℃ 1 min 30 s, 30 个 循 环; PCR 产 物 送 上海 美

通过对 其 鉴 定 确 定 为 迟 缓 爱 德 华 菌 ( Edwardsiella

吉生物医药科技有限公司纯化并测序。测序结果通

tarda) , 研究了该致病菌 的致病 力、生 长特 性及对

过 NCBI 的 BLAST 检索系统进行同源序列比对, 从

抗生素的敏感性, 旨在为杂交鳢养殖过程中的病害

中选取相似 序列, 并使用 MEGA 4. 1 与从 GenBank

防治提供参考。

数据库中获得的序列相似性较高的菌株的序列进行 多序列匹配排列( multiple alignments) , 采用 邻接法

材料 与方法

1

( neighbor joining method) 构建系 统发 育树, 并 通过

试验材料

1. 1

Bootstrap 法( 1 000 次重复) 检验。

患病杂 交鳢 取自 广 东 省 中 山 市 某 杂 交 鳢 养 殖

1. 5 人工感染试验

场, 健 康的 杂交 鳢购 于 广 州 市 黄 沙 水 产 市 场, 体

70 尾健康 的 杂 交鳢 分 为 7 组, 每 组 10 尾, 6

质量为 ( 271 ±26) g, 放 于 池 中暂 养 , 充 气, 水 温

组为 试 验 组, 1 组 为 对 照 组。 取 菌 株 ZS201364-1

维持在 ( 25 ±2) ℃, 每 天 投 喂 饲 料, 适 应 1 周 后

的新 鲜 菌 落 制 成 浓 度 为 1. 12 ×10 cfu・mL

9

8

- 1

菌悬

- 1

开始试 验。 革兰 氏 染 色 液、 芽 孢 染 色 液、 细 菌 微

液, 然后分别 稀释至 1. 12 ×10 cfu・mL 、1. 12 ×

量生化 鉴 定 管 均 购 于 广 东 环 凯 微 生 物 有 限 公 司;

10 cfu・mL 、1. 12 ×10 cfu・mL 、1. 12 ×10

抗生素 纸 片 购 于 杭 州 天 和 微 生 物 试 剂 有 限 公 司;

cfu・mL 和 1. 12 ×10 cfu・mL 。分别将以 上几个

细菌基 因 组 DNA 提 取 试 剂 盒 购 于 广 州 维 宁 生 物

浓度的菌液按照 每尾 0. 5 mL 的剂 量, 对 健康 杂交

科技有 限公 司。

鳢腹腔注射进行感染。对照组的杂交鳢, 则按照每

细菌的分离、纯化

1. 2

7

- 1

- 1

6

4

- 1

5

- 1

尾 0. 5 mL 的剂量在相同部位 注射 0. 85% 无菌 生理

无菌操作从患病濒死的杂交鳢的肝、脾、肾划

盐水。该人工感染试验持续 15 d, 每日观察受试鱼

线接种于营养琼脂平 板上, 37 ℃培 养 48 h 后挑取

的发病症状并记录死亡的尾数, 并从濒死的鱼重新

单菌落在营养琼脂平板上划线, 进行纯培养。对已

分离细菌, 根 据 改进 的 寇氏 法

分离纯化的细菌按染色液说明书进行格兰染色、芽

( LD5 0 ) 。lg LD50 = X k - d( ΣP i - 0. 5) , 其 中 Xk 为

孢染色, 参照 文献 [ 18] 的 方 法 进 行荚 膜 染 色, 光

最大对数剂量, d 为相 邻两组 对数 剂量 之差数, P i

学显微镜下观察。

为 死 亡 率, i 为 组 号。 同 样 的 方 法 用 于 菌 株

细菌的生理生化鉴定

1. 3

[ 17 ]

计 算半 致 死 剂量

ZS201364-2 对杂交鳢的 LD50 的测定。

将分离菌的新鲜菌落接 种于 LB( Luria-Bertani)

1. 6 生长特性

肉汤培养基中, 培 养 18 h 后 取 80 μL 菌液 加 入每

1. 6. 1

种微量生化鉴定 管, 37 ℃培 养 12 ～48 h 后 判定结

ZS201364-1 的 单 菌 落 接 种 到 无 菌 LB 肉 汤 中 振 荡

果。

( 80 r・min ) 培养 18 h, 取 25 μL 菌液分别 接种到

将菌株

- 1

细菌 16SrRNA 基因序列的分析

1. 4

24 支盛有 5 mL 无菌 营养 肉 汤的 试 管 中, 于 5 ℃、

用上海英 骏 生 物 技 术 有 限 公 司 合 成的 通 用 引 物

温度对致病菌生长的影响

[ 13]

进 行 PCR 扩 增,

正 向 引 物 为 27F: 5′ -

10 ℃、15 ℃、25 ℃、30 ℃、35 ℃、40 ℃ 和 45 ℃ 下培养, 每个温度设 3 个重复。18 h 后取样分别

AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3′ [ 对 应于大 肠杆菌

测定不 同培 养 温度 下 菌 液的 光 密度 ( OD46 0 nm ) 。以

( E. coli) 16S rRNA 基因 序 列 的 第 8 ～第 27 个 碱基

培养温度为横坐标、OD460 nm 为纵坐标绘制曲线。

位置 ] ; 反 向 引 物 1492R: 5′ -TACGGCTACCTTGT-

1. 6. 2

TACGACTT-3′ ( 对应于 E. coli 16S rRNA 基因序列的

ZS201364-1 的 单 菌 落 接 种 到 无 菌 LB 肉 汤 中 振 荡

第 1 492 ～1 510 个碱基 位置) 。按 试剂 盒说 明书提

( 80 r・min ) 培养 18 h, 取 25 μL 菌液分别 接种到

取细菌基因组 DNA。 反应 体系为 50 μL, 0. 2 μg・

21 支盛有 pH 为 4、5、6、7、8、9 和 10 的 5 mL

- 1

μL 细菌 DNA 模板 2 μL, 10 mmol・L

- 1

pH 对 致 病 菌 生 长 的 影 响

将菌 株

- 1

的 正 反向

无菌营养肉汤的试管 中, 每个 pH 设 3 个 重复, 30

引物各 1 μL, 含 Mg 的 10 ×PCR 缓冲液 5 μL, 10

℃下培 养 18 h 后 取样 分 别测 定 不 同 pH 时 菌液 的

2 +

mmol・L

- 1

4 ×dNTP 2 μL, 1 U・μL

- 1

的 TaqDNA 聚

合酶 2 μL, 双 蒸水 37 μL。PCR 采 用 反应 条 件 为

OD460 。以 pH 为横坐标、OD460 为纵坐标绘制曲线。 1. 6. 3

NaCl 质量分数对致病 菌生长 的影 响

All Rights Reserved. South China Fisheries Science http://www.schinafish.cn

将

陈言峰等: 养殖杂交鳢迟缓爱德华菌的分离鉴定

第5期

菌株 ZS201364-1 的单菌落接种到无菌 LB 肉汤中振

3

脂培养基平板, 用无菌镊子将抗生素纸片轻轻贴在

- 1

荡( 80 r・min ) 培养 18 h, 取 25 μL 菌液 分别接种

琼脂表面, 37 ℃恒温培 养 48 h 后 测量 抑菌圈 直径

到 33 支 含 NaCl 质 量 分 数 分 别 为 0% 、 0. 5% 、

的大小。

1. 0% 、 1. 5% 、 2. 0% 、 2. 5% 、 3. 0% 、 3. 5% 、

2

4. 0% 、4. 5% 和 5. 0% 的 5 mL 无 菌 营 养肉 汤 的 试 管中, 每个 NaCl 质量分数设 3 个 重复, 30 ℃条件

结果

2. 1 形态特征

下培养 18 h 后取样分 别测定不同 NaCl 质量分数时

该致病菌为革兰氏阴性短杆菌, 能运动, 无芽

菌液的 OD460 。以 NaCl 质 量 分 数 为 横 坐 标、 OD46 0

孢, 无荚膜。在普通营 养琼 脂培 养 基上 37 ℃ 培养

为纵坐标绘制曲线。

24 h, 形成 正 圆 形、 凸 起、 灰 白 色、 有 光 泽 的 菌

1. 7

药敏试验

落, 直径 0. 5 ～1. 0 mm。

采用纸片扩 散法, 无 菌操 作 将菌 株 ZS2013641 的 24 h 培养物以无菌生理盐水洗下制成 1. 5 ×10

2. 2 生理生化鉴定

8

根据分 离菌 株 的生 理 生化 特 性 结 果

- 1

cfu・mL 的菌悬液, 取 80 μL 菌悬液涂布于营养琼

[ 18]

, 鉴定

2 株致病菌均为迟缓爱德华菌( 表 1) 。

表 1 分离菌的生理生化特征 Tab. 1

Physiological and biochemical characteristics of isolates

检测项目 test item

ZS201364-1

ZS201364-2

迟缓爱德华菌 E. tarda

动力 mobility

+

+

+

吲哚 indole

+

+

+

七叶苷 aesculin

+

-

-

硫化氢 H2 S

+

+

+

尿素酶 urease

-

-

-

西蒙氏柠檬酸盐 citrate

-

-

-

M. R. methyl red

+

+

+

V-P V-P reaction

-

-

-

苯丙氨酸脱氨酶 phenylalanine deaminase

-

-

-

葡萄糖酸盐 glyconate

-

-

-

三糖铁琼脂 triple sugar iron agar

+

+

+

鸟氨酸脱羧酶 ornithine decarboxylase

+

+

+

赖氨酸脱羧酶 lysine decarboxylase

+

+

+

精氨酸脱羧酶 arginine decarboxylase

-

-

-

精氨酸双水解酶 arginine hydrolase

-

-

-

葡萄糖 glucose

+

+

+

麦芽糖 D-maltose

+

+

+

乳糖 lactose

-

-

-

木糖 D-xylose

-

-

-

甘露醇 D-mannitol

-

-

-

棉子糖 raffinose

-

-

-

山梨醇 D-glucitol

-

-

-

侧金盏花醇 adonite

-

-

-

淀粉水解 amylolysis

-

-

-

马尿酸盐 hippurate

+

+

+

All Rights Reserved. South China Fisheries Science http://www.schinafish.cn

南 方 水 产 科 学

4

图1 Fig. 1

第 10 卷

基于 16S rRNA 基因序列所构建的系统发育树

Phylogenetic tree based on 16S rRNA sequences using neighbour-joining method

2. 3 16SrRNA 基因序列的分析 菌株 ZS201364-1 和 ZS201364-2 所 扩增 的 16Sr RNA 基因序列长度分别为 1 428 bp 和 1 429 bp, 将 此 2 条 序 列 ( Accession No. KJ183027 和 KJ183028) 分别与 GenBank 中 的 序 列 进 行 比 较, 结果 与 迟 缓 爱德华菌同源 性 均 为 99% , 从而 鉴 定 此 2 株 菌为 迟缓爱德华菌。 根 据 菌 株 ZS201364-1 和 ZS201364-2 的 16S 图2

rRNA 基 因 序 列 测 定 结 果, 选 取 相 似 序 列 使 用

不 同字母 标记 的表示 差异 显著 ( P < 0. 05) ,

MEGA 4. 1 采 用 邻 接 法 构 建 系 统 发 育 树 , 并 通 过

误差 线代表 平均值 的标 准误差 , 后 图同此

Bootstrap 法 ( 1 000 次 重 复 ) 检 验 。 所 构 建 的 系 统 发育 树见图 1。菌株 ZS201364-1 和 ZS201364-2 的

温度对菌株 ZS201364-1 生长的影响

Fig. 2

Effect of temperature on growth of strain ZS201364-1

Different letters indicate significant difference among different

16S rRNA 基 因 序 列 与 迟 缓 爱 德 华 菌 的 16S rRNA

treatments ( P < 0. 05) , and bars represent standard errors

基因序 列自然 聚类 。从 而鉴定 菌株 ZS201364-1 和

of the means. The same as in the following figures.

ZS201364-2 均为 迟缓 爱德华 菌。 64-1 在温度 10 ～45 ℃均 能生 长, 最适 生 长温 度为

人工感染试验

2. 4

人工感染后的杂交鳢第 3 天开始死亡, 从死亡

25 ～35 ℃( 图 2) 。 pH 对 致 病 菌 生 长 的 影 响

菌株

鱼的肝、肾均可再次分离到原感染细菌。试验过程

2. 5. 2

中, 注射了 0. 85% 无 菌 生 理 盐 水的 对 照 组 鱼 摄食

ZS201364-1 在 pH 4 ～10 均 能 够生 长, 其 中最 适生

正常, 外观特征 没 有 明 显 的 变 化。 计 算 得 到 菌 株

长 pH 为 7 ～8( 图 3) 。

ZS201364-1 和 ZS201364-2 对 杂 交 鳢 LD50 分 别 为

2. 5. 3

5

7. 1 ×10 cfu・g 2. 5 2. 5. 1

- 1

5

NaCl 质 量 分 数 对 致 病 菌 生 长 的 影 响

菌 株 ZS201364-1 在 NaCl 质 量分 数 为 0 ～4% 均 能

- 1

和 5. 6 ×10 cfu・g 。

生 长, 其中最 适 生 长 的 NaCl 质 量 分 数 为 1% ( 图

生长特性 温度对致病菌生长的影响

菌株 ZS2013

4) 。

All Rights Reserved. South China Fisheries Science http://www.schinafish.cn

第5期

陈言峰等: 养殖杂交鳢迟缓爱德华菌的分离鉴定

5

表 2 人工感染试验结果 Tab. 2 菌液浓度 / cfu・mL concentration of bacteria solution

菌株 strain

1. 12 ×10

ZS201364-1

Result of artificial infection experiment

- 1

试验鱼数 / 尾 number of samples

死亡个数 / 尾 number of death samples

死亡率 /% mortality

10

2

20

10

4

40

10

5

50

10

6

60

10

10

100

10

10

100

10

2

20

10

3

30

10

6

60

10

7

70

10

10

100

10

10

100

4

1. 12 ×105

ZS201364-2

图3 Fig. 3

1. 12 ×10

6

1. 12 ×10

7

1. 12 ×10

8

1. 12 ×10

9

1. 12 ×10

4

1. 12 ×10

5

1. 12 ×10

6

1. 12 ×10

7

1. 12 ×10

8

1. 12 ×10

9

图4

pH 对菌株 ZS201364-1 生长的影响

Effect of pH on growth of strain ZS201364-1

半致死剂量 / cfu・g LD50

-1

7. 1 ×10

5

5. 6 ×10

5

氯化钠质量分数对菌株 ZS201364-1 生长的影响 Fig. 4

Effect of NaCl content on growth of strain ZS201364-1

2. 6

药敏试验

前 该 菌 已 引 起 了 多 种 鱼 类 如 斑点 叉 尾

药敏试验 结 果显 示, 菌 株 ZS201364-1 对 头 孢 肟、环丙沙星和诺氟沙星等抗生素高度敏感; 对

( Ictnlurus

punctatus) 、大 菱 鲆 ( Scophthalmus maximus) 、 尼 罗 罗非 鱼 ( Oreochromis nilotica) 、 高 体 革

( Scortum

链霉素、复方新诺明、林可霉素、强力霉素和利福

barcoo) 、 黑 鲷 ( Sparus macrocephlus) 和 漠 斑 牙 鲆

平等低度敏感。

( Paralichthys lethostigmo) 等 的 病 害

3

[ 20 - 25 ]

。该 菌还

可感染两栖类 动物 如牛蛙 ( Rana catesbiana) 和 大鲵

讨论

( Andrias davidianus)

[ 26 - 27]

。 除 此 之 外, 还 有 该 菌

迟缓爱德华菌在分类上属于肠杆菌科、爱德华

感染爬行 类、鸟 类、 哺 乳 动 物 甚 至 人 类 的 一 些 报

氏菌属, 是水产养殖中常见的一种致病菌。迟缓爱

道。笔者从患病杂交鳢分离到迟缓爱德华菌在国内

德华菌感染的宿 主广 泛, 自 1962 年首 次报 道 了其

外尚属首次, 表明对于迟缓爱德华菌, 杂交鳢是一

对日本鳗 鲡 ( Anguilla japonica) 的 感 染 以 来

[ 19]

, 目

种新发现的宿主。

All Rights Reserved. South China Fisheries Science http://www.schinafish.cn

南 方 水 产 科 学

6 表3 Tab. 3 抗生素 antibiotic

第 10 卷

菌株 ZS201364-1 对 17 种抗生素药敏试验结果 Sensibility of strain ZS201364-1 to 17 antibiotics 每片含量 / μg content

抑菌圈直径 / mm diameter of inhibition zone

阿米卡星 amikacin

30

22

卡那霉素 kanamycin

30

23

链霉素 phytomycin

10

10

23. 75 /1. 25

6

庆大霉素 gentamicin

10

20

头孢唑啉 cephazoline

30

27

四环素 tetracycline

30

11

头孢拉定 cefradine

30

24

利福平 rifampicin

5

6

强力霉素 doxycycline

30

10

林可霉素 lincomycin

2

7

头孢

30

41

左氟沙星 levofloxacin

5

31

诺氟沙星 norfloxacin

10

34

300 units

12

新霉素 neomycin

30

25

环丙沙星 ciprofloxacin

5

36

复方新诺明 complex sinomin

肟 cefotaxime

多粘菌素 Bpolymyxin B

该研究中根据分离菌的形态学特征、生理生化

果, 可为在对由迟缓爱德华菌引起的杂交鳢感染症

特性 的 检 测 结 果, 参 考 《常 见 细 菌 系 统 鉴 定 手

防治用 药 时 提 供 参 考。 该 研 究 的 结 果 与 薄 清 如

[ 18 ]

等

[ 3 2]

报 道 的 鳗 鲡 源 迟 缓 爱 德 华 菌 菌 株、 叶 旭 红

测定该菌株的 16S rRNA 基 因序列 并进 行分 析, 显

等

[ 2 4]

报道的高体 革

示该菌株与迟缓爱德华菌 的同源 性最 高, 达 99% 。

素的敏感性, 以 及邓 显 文等

经 计 算 菌 株 ZS201364-1 和 ZS201364-2 对 杂 交 鳢

缓爱德华菌菌株对四环素的敏感性, 均有很大的差

册》

, 鉴定 2 株致病菌均为迟缓爱德 华菌。通过

5

LD50 依次 为 7. 1 ×10 cfu・g 根据鱼类致 病 菌 划 分 标准

- 1

[ 2 8]

5

- 1

源迟 缓 爱 德华 菌 菌 株 对链 霉 [ 20 ]

报 道 的罗 非 鱼 源迟

和 5. 6 ×10 cfu・g 。

异。这种差异可能是由菌株自身引起, 也可能是养

, 2 株 致 病菌 对 杂 交

殖过程中药物的使用导致了某些菌株对某些药物产

鳢均具有很强的致病力。

生抗性的结果。

关于 迟 缓 爱 德 华 菌 的 生 长 特 性, WAKABAYASHI 和 EGUSA

[ 2 9]

研 究 表 明, 该 菌 在 培 养 基 中

NaCl 质量分数 为 0 ～4% 内 能 生长, pH 5. 5 ～9 能

参考文献: [ 1] 中国 水产科 学研究 院珠 江水产 研究 所 , 上 海水 产大学 , 华 南 师

生长, LB 肉汤中培养时 15 ～42 ℃能生长。该研究

范大 学 , 等 . 广东 淡水鱼 类志 [ M] . 广 州 : 广东 科 技 出 版 社 ,

中的菌株 ZS201364-1 的生 长 特 性与 上 述 报 道 的相

1990: 511 - 514.

比, 耐盐性基本一致, 但 pH 和温 度的 范围 有所不 同。 同 时, [ 30 ]

KUSUDA

菌 株 ZS201364-1 与 ISHIHAZA 和 报道的最适生 长温 度为 30 ℃ 的结 论一

致, 但与 XIAO 等

[ 3 1]

报道的 最 适生 长的 NaCl 质量

分数为 2% 结论不同。这可能 与菌株 差异 有关, 也 可能与不同菌株所处的咸淡水环境有关。 菌株 ZS201364-1 对 17 种抗生素的 敏感 性的结

[ 2] 马建 波 , 茅 沈丽 , 卓孝 磊 , 等 . 杂 交鳢池 塘高 效养殖 技 术 [ J] . 水产 养殖 , 2010( 10) : 33 - 35. [ 3 ] 杨 小强 . 闽 香鳢 遗传生 物 学研 究 Ⅰ -子 代 和 亲 本形 态 比 较 [ J] . 福建 水产 , 2004, 10( 2) : 41 - 44. [ 4] 张 诚 , 刘 年峰 , 杨小 强 , 等 . 闽香 鳢及 其亲本 染色 体组 型 的 比 较[ J] . 上海海 洋大 学学报 , 2005, 14( 2) : 103 - 107. [ 5] 姚 桂桂 , 刘新 轶 , 谢 楠 , 等 . 杂交 鳢杭 鳢 1 号 胚胎发 育 过 程 的 观察 [ J] . 江西 农业 学报 , 2010, 22( 11) : 133 - 135.

All Rights Reserved. South China Fisheries Science http://www.schinafish.cn

陈言峰等: 养殖杂交鳢迟缓爱德华菌的分离鉴定

第5期

[ 6] 王 宇 希 , 冯 晓 宇, 李行先 , 等 . 杂交鳢 和乌 鳢池塘 养殖 对比试 验 [ J] . 水 产 科 学, 2009, 28 ( 11) : 683 - 686. [ 7] 卓 孝 磊 , 梁 日 深, 陈言 峰 , 等 . 杂 交 鳢 ( 乌 鳢 ♂ ×斑 鳢 ♀ ) 及 其 亲 本 血 液 指 标 的 比 较 分 析 [ J] . 淡 水 渔 业 , 2010, 40 ( 3 ) :

7

[ 18] 东秀 珠 , 蔡 妙英 . 常见 细 菌 系 统鉴 定 手 册 [ M] . 北 京 : 科 学 出版 社 , 2001 : 76 - 77. [ 19] HOSHINA T. On a new bacterium Paracolobactrum anguillimortiferum n. sp [ J] . Bull Jpn Soc Sci Fish, 1962 , 28: 162 - 164. [ 20] 邓显 文 , 谢 芝勋 , 刘加 波 , 等 . 罗 非 鱼迟 缓 爱 德 华氏 菌 的 分

72 - 75. [ 8] 刘 新 铁 , 王 宇 希, 谢楠 , 等 . 杂 交鳢及 其亲 本肌肉 营养 成分分 析 [ J] . 齐 鲁 渔 业, 2010, 27( 5) : 24 - 26.

离与 鉴定 [ J] . 水生 态学杂 志 , 2009 , 2 ( 1) : 114 - 117. [ 21] 邓显 文 , 谢 芝勋 , 刘加 波 , 等 . 广 西斑 点 叉 尾

[ 9] 陈 昌 福 , 刘 毅 . 斑 鳢细 菌 性 败 血 症病 原 菌 的 分 离 与 鉴 定 [ J] . 中 国 兽 医 学 报, 1998, 18( 2 ) : 144 - 146.

爱德 华 氏 菌

的分 离鉴定 [ J] . 广 西农业 科学 , 2008, 39 ( 2) : 231 - 235. [ 22] 闫茂 仓 , 王 雪鹏 , 丁雷 . 养殖 黑 鲷迟 缓 爱德 华 菌 的分 离 鉴 定

[ 10] 曹 铮 , 沈 锦 玉 , 谢荣 林, 等 . 乌鳢 结 节 病 病原 ——— 诺卡 氏 菌 的 分 离 与 鉴 定 [ J] . 水 生 生 物 学 报 , 2009, 33 ( 2 ) : 338 -

[ J] . 山 东畜牧 兽医 , 2010, 31 ( 4) : 19 - 22. [ 23] 贺宝 玲 , 张 玉芬 , 何生 美 , 等 . 漠 斑 牙鲆 迟 缓 爱 德华 氏 菌 的 分离 与 鉴 定 [ J] . 安 徽 农 业 科 学, 2009 , 37 ( 12 ) : 5529 -

341. [ 11 ] TUNG M C, TASAI S S, HO L F, et al. An acute septicemic in-

5530.

fection of Pasteurella organism in pond-cultured Formosa snakehead

[ 24] 叶旭 红 , 林 先贵 , 王一 明 . 养 殖 澳洲 宝 石鱼 迟 缓 爱德 华 氏 菌

fish ( Channa maculata Lacepède) in Taiwan [ J] . Fish Pathol,

的分 离鉴定 及致病 基因 的检测 [ J] . 淡水 渔业 , 2010, 40( 1) :

1985, 20 ( 2 / 3) : 143 - 148.

50 - 54.

[ 12] CHEN S C. Study on the pathogenicity of Nocardia asteroids to the Formosa snakehead,

Channa maculata,

and largemouth bass,

Micropterus salmoides [ J] . J Fish Dis, 1992, 15 ( 1 ) : 47 53.

[ 25] 秦蕾 , 王印 庚 , 张晓君 . 迟钝 爱 德华 氏 菌感 染 大 菱鲆 的 病 理 学研 究 [ J] . 中 国水 产科学 , 2009, 16( 3) : 411 - 419. [ 26] MAUEL M J,

MILLER D L, FRAZIER K S, et al. Bacterial

pathogens isolated from cultured bullfrogs ( Rana castesbeiana )

[ 13] CHEN Y F, LIANG R S, ZHUO X L, et al. Isolation and characterization of Aeromonas schubertii from diseased snakehead, Channa maculata ( Lacepède) [ J] . J Fish Dis, 2012, 35 ( 6 ) : 421 - 430.

[ J] . J Vet Diagn Invest, 2002, 14( 5) : 431 - 433. [ 27] 吴中 明 , 王 欢 , 敖弟书 , 等 . 大 鲵的 迟 钝爱 德 华菌 感 染 [ J] . 遵义 医学院 学报 , 2007, 30 ( 4) : 464 - 466. [ 28] SANTOS Y, TORANZO A E,

[ 14] LIU J Y, LI A H. First case of Aeromonas schubertii infection in the freshwater cultured snakehead fish,

Ophiocephalus argus

( Cantor) , in China [ J] . J Fish Dis, 2012 , 35 ( 5 ) : 335 342.

BARJA J L, et al. Virulence

properties and enterotoxin production of Aeromonas strains isolated from fish [ J] . Infect Immun, 1989, 56 ( 12) : 3285 - 3293. [ 29] WAKABAYASHI H, EGUSA S. Edwardsiella tarda ( Paracolobactrum anguillimortiferum) associated with pond-cultured eel disease

[ 15] CAO H, HOU S, HE S, et al. Identification of a Bacteriovorax

[ J] . Bull Jpn Soc Sci Fish, 1973 , 39( 9) : 931 - 936.

sp. isolate as a potential biocontrol bacterium against snakehead

[ 30] ISHIHAZA S, KUSUDA R. Experimental infection of elvers and

fish-pathogenic Aeromonas veronii [ J] . J Fish Dis, 2014, 37

anguillettea with Edwardsiella tarda bacteria [ J] . Bull Jpn Soc Sci

( 3) : 283 - 289.

Fish, 1981 , 47( 8) : 999 - 1002.

[ 16] 刘 春 , 李 凯 彬 , 王庆, 等 . 杂 交鳢( 斑 鳢♀ ×乌鳢 ♂ ) 内脏 类

[ 31] XIAO J F, WANG Q Y, LIU Q, et al. Isolation and identifica-

结 节 病 病 原 菌 的 分 离 、 鉴 定 与 特 性 分 析 [ J] . 水 产 学 报 ,

tion of fish pathogen Edwardsiella tarda from mariculture in China

2012, 36 ( 7) : 1119 - 1125.

[ J] . Aquac Res, 2009 , 40( 1 ) : 13 - 17.

[ 17] 李 杰 . 致 病 性 迟缓 爱德 华氏菌 的鉴 定、 PCR 检测及 esaC 基 因 的 功 能 鉴 定 [ D] . 青 岛 : 中国海 洋大 学 , 2008.

[ 32] 薄清 如 , 黄 新民 , 郑帆 , 等 . 鳗鲡 爱 德华 菌 病 的 诊断 和 病 原 学研 究 [ J] . 中 国兽 医学报 , 1999, 19( 3) : 258 - 260.

All Rights Reserved. South China Fisheries Science http://www.schinafish.cn