El Laboratorio en la Vigilancia de Influenza QBP MANUEL ARROYO ROJAS Laboratorio de Virus Respiratorios del InDRE

Laboratorio de Virus respiratorios

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TIPOS DE MUESTRAS

¾Exudado Faríngeo ¾Exudado Nasofaríngeo ¾Aspirado Bronqueoalveolar ¾Suero (pareados)

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Tipo de muestra

Nasofaríngeo o Faríngeo

Lavado bronquioalveolar

Conjuntiva

Suero

Tejido (autopsia)

Medio/contenedor/ forma de envío

Tiempo

Hisopo: usar só sólo hisopo esté estéril de dacró dacrón o rayó rayón con mango de plá plástico

Viales esté estériles en 2.5 ml de medio de transporte viral. Enviar con refrigerantes de 4 a 8°C

Durante la fase inicial de la enfermedad (primeros 4 días de iniciado los síntomas).

Inmunofluorescencia Cultivo viral RTRT-PCR

La muestra debe ser tomada só sólo por un médico o una persona experimentada en el proceso (Hospital).

Viales esté estériles en 5 ml de medio de transporte viral. Enviar con refrigerantes de 4 a 8°C

Cuando sea clí clínicamente apropiado en paciente intubado, con enfermedad pulmonar severa. (primeros 4 dí días de iniciado los sí síntomas).

Inmunofluorescencia Cultivo viral RTRT-PCR

Hisopo: usar só sólo hisopo de dacró dacrón o rayó rayón con mango plá plástico.

Viales esté estériles en 2.5 ml de medio de transporte viral. Enviar con refrigerantes de 4 a 8°C

En caso de conjuntivitis, tan rá rápido como sea posible en el curso de la enfermedad. (primeros 4 días de iniciado los síntomas).

Inmunofluorescencia Cultivo viral RTRT-PCR

Por venopunció venopunción, en tubos sin anticoagulante

>1ml Enviar con refrigerantes de 4 a 8°C

Fase aguda: tan rá rápido como sea posible (hasta 7 días)

Detecció Detección de anticuerpos totales por inhibició inhibición de la hemaglutinació hemaglutinación

Pulmó Pulmón

Contenedor esté estéril con medio de transporte viral fresco, congelado a -70° 70°C

(primeros 4 dí días de iniciado los sí síntomas).

Inmunofluorescencia. Inmunofluorescencia. Cultivo viral RTRT-PCR

Método

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Técnica

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.

EXUDADO FARINGEO

4-8°C

SE RECOMIENDA PARA NIÑOS MAYORES DE 5 AÑOS Y ADULTOS Laboratorio de Virus respiratorios

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EXUDADO NASOFARINGEO

Hisopo de Rayon o dacrón

4-8°C

RECOMENDADO PARA NIÑOS MENORES DE 5 AÑOS

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EXUDADO CONJUNTIVAL

Girar el hisopo

Hisopo de rayón o dacrón Laboratorio de Virus respiratorios

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TÍTULO VIRAL Y SEVERIDAD DE LOS SÍNTOMAS

Título Viral y Severidad de los Síntomas de la Influenza.

SEVERIDAD SEVERIDAD DE DE LOS LOS SÍNTOMAS TÍTULO TÍTULOVIRAL VIRAL

1 INICIO SÚBITO DE LOS SÍNTOMAS Laboratorio de Virus respiratorios

2

3

PICO DE REPLICACIÓN VIRAL

4

5

6

7

TIEMPO (DIAS) InDRE

TÉCNICAS USADAS PARA LA IDENTIFICACION DEL VIRUS DE INFLUENZA

Ê Ê Ê Ê Ê

Inmunofluorescencia Indirecta Aislamiento en Cultivo Celular Inhibición de la Hemaglutinación RT-PCR RT-PCR En Tiempo Real

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PROCEDIMIENTOS DE LABORATORIO Inmunofluorescencia Indirecta

Células epiteliales infectadas con virus de influenza tipo A

•Tiempo de desarrollo de la técnica: 4 horas •Permite identificar entre influenza: Tipo A y B Subtipos: H3, H1 y H5 •Importancia clínica y epidemiológica

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Diagrama de Flujo para el Diagnóstico de Influenza Registro en el laboratorio

Registro en Base de datos

Tratamiento de la muestra Inmunofluorescencia Indirecta Notificación inmediata al Centro de Salud ó LESP y a la DGE

Aislamiento en cultivo de células MDCK o en Embrión de Pollo

IFI Influenza A/B Positiva

IFI Subtipificación ( A/H1, A/H3)

IFI Negativo

Captura de resultados Infolab

Impresión de resultados Subtipificación por RT-PCR (A/H1, A/H3, A/H5, B)

Subtipificación por Inhibición de la Hemaglutinación

Entrega de resultados a Recepción de Muestras

Envío de cepas al CDC(Atlanta) Para Referencia Internacional

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ACTIVIDADES DE LA RED DE LABORATORIOS DE INFLUENZA LABORATORIO DE REFERENCIA NACIONAL „

„ „ „ „ „ „

AISLAMIENTO VIRAL: „ CULTIVO CELULAR (MDCK) „ HUEVO EMBRIONADO HEMAGLUTINACION: PRESENCIA VIRAL. INHIBICIÓN DE LA HEMAGLUTINACION: SUBTIPIFICACION. RT-PCR PCR en Tiempo Real Secuenciación DIAGNOSTICO DIFERENCIAL (OTROS VIRUS RESPIRATORIOS)

LABORATORIOS REGIONALES „ „

INMUNOFLUORESCENCIA INDIRECTA: TAMIZADO Y TIPIFICACION. RT-PCR

LABORATORIOS ESTATALES „ „

INMUNOFLUORESCENCIA INDIRECTA: TAMIZADO Y TIPIFICACION. PRUEBAS RAPIDAS

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ENVÍO DE MUESTRAS

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TRANSPORTE DE LAS MUESTRAS ™ Asegurarse de mantener la muestra 4°-8° C ™ En medio de transporte vial, las muestras se recibirán hasta 5 días después. ™ Las muestras mantenidas en solución salina debe enviarse de inmediato. ™ Utilizar una hielera aislantes y resistente a impactos ™ Debe contener refrigerantes ™ Las muestras deben permanecer en posición vertical ™ La tapa de la hielera debe sellarse con cinta adhesiva. Laboratorio de Virus respiratorios

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MEDIO DE TRANSPORTE VIRAL

ƒ ƒ ƒ ƒ ƒ ƒ

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Albúmina bovina Gentamicina Penicilina – Estreptomicina Fungizona Bicarbonato de sodio Solución balanceada de Hank´s

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SISTEMA DE TRIPLE EMBALAJE Y UN 4º CONTENEDOR PARA TRANSPORTE EN FRÍO O EN CONGELACIÓN

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MANUALES RECOMENDADOS ¾

1999: Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories, CDC.

www.cdc.gov

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Equipos Comerciales para el Diagnóstico Rápido de Influenza

Directigen

FLU OIA

QuickVue

ZstatFlu

Flu A + B Laboratorio de Virus respiratorios

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