Biological Chemistry Hoppe-Seyler T H E OFFICIAL O R G A N OF T H E GESELLSCHAFT F Ü R B I O L O G I S C H E C H E M I E This Journal was founded in 1877 as Zeitschrift für Physiologische Chemie by F. Hoppe-Seyler and was continued after his death under the editorship of A . Kossei, F. K n o o p , Κ. Thomas, F. L y n e n , A . Butenandt and G . Weitzel as Hoppe-Seyler 's Zeitschrift für Physiologische Chemie [ V o l u m e 21 ( 1 8 9 5 ) - V o l u m e 365 ( 1 9 8 4 ) ] . Volume 367

January 1986

Number 1

Contents

Inhaltsverzeichnis

Newsletter 1986

Newsletter 1986 Nomenclature Committee of IUB and IUP AC Commission on Biochemical Nomenclature

Joint

Nomenclature Committee of IUB and IUPAC Commission on Biochemical Nomenclature

Joint

Reinigung und Charakterisierung einer 3-Phosphoadenylylsulfat: Chondroitin-6-Sulf otransferase aus Arteriengewebe J. Hollmann, R. Niemann und E. Buddecke

Purification and characterization of a 3-phosphoadenylylsulfate: chondroitin 6-sulfotransf erase from arterial tissue /. Hollmann, R. Niemann and E. Buddecke

Wechselwirkungen zwischen Lectinen und anderen Komponenten der Proteinkörper von Leguminosen W. Einhoff, G. Fleischmann, T. Freier, H. Kummer und H. Rüdiger

Interactions between lectins and other components of leguminous protein bodies W. Einhoff, G. Fleischmann, Τ. Freier, Η. Kummer and Η. Rüdiger

15

Isolierung, Auftrennung und partielle Charakterisierung der Lectine aus den Samen von Robinia pseudoacacia G. Fleischmann und Η Rüdiger

Isolation, resolution and partial characterization of two Robinia pseudoacacia seed lectins G. Fleischmann and H. Rüdiger

27

Das hochmolekulare Glycoprotein der Zelloberfläche von Halobacterium halobium: Physikalisch-chemische Charakterisierung bei niedriger und hoher Salzkonzentration K. Hecht, F. Wieland und R. Jaenicke

The cell surface glycoprotein of Halobacterium halobium: Physico-chemical characterization in the absence and presence of salt K. Hecht, F. Wieland and R. Jaenicke

33

Reduzierung des Abbaus von Herzstrukturproteinen im infarzierten Herzgewebe von Hunden durch den Cystein-Proteinase-Inhibitor Ep459 K. Tsuchida, H. Aihara, K. Isogai, K. Hanada und N. Shibata

Degradation of myocardial structural proteins in myocardial infarcted dogs reduced by Ep459, a cysteine proteinase inhibitor K. Tsuchida, H. Aihara, K. Isogai, K. Hanada and N. Shibata

39

Gegenseitiger Einfluß der Glucoseanomeren auf deren Phosphorylierung durch Hexokinase M.-H Giroix, A. Sener und W.J. Malaisse

Reciprocal influence of glucose anomers upon their respective phosphorylation by hexokinase M.-H. Giroix, A. Sener and W.J. Malaisse

47

Die Primärstruktur der Hämoglobine von Eisbär (Ursus maritimus, Carnivora) und Kragenbär (Ursus tibetanus, Carnivora) O. Hofmann, T. Schreitmüller, G. Branitzer und Η Wiesner

The primary structure of Polar Bear (Ursus maritimus, Carnivora) and Asiatic Black Bear (Ursus tibetanus, Carnivora) hemoglobin Ο. Hofmann, Τ. Schreitmüller, G. Braunitz er and H. Wiesner

53

Wirkung von Lokalanästhetika auf die Stearoyl-CoADesaturase von Τetrahy me na-Miktosomtn S. Umeki und Y. Nozawa

Effect of local anesthetics on stearoyl-CoA desaturase of Tetrahymena microsomes S. Umeki and Y. Nozawa

61

Untersuchungen an Cytochrom-c-Oxidase, X I I I : Die Aminosäuresequenz des kleinen Membran-Polypeptids V I I I c aus dem respiratoriischen Komplex I V von Rinderherzen L . Meinecke und G. Buse

Studies on cytochrome c oxidase, X I I I : Aminoacid sequence of the small membrane polypeptide V I I I c from bovine heart respiratory complex IV L . Meinecke and G. Buse

67

Carnitin-Stoffwechsel in isolierten Nierenrindentubuli der Ratte S. Wagner, T. Deufel und W. G. Guder

Carnitine metabolism in isolated rat kidney cortex tubules S. Wagner, T. Deufel and W. G. Guder

75

Indexed

Instructions

in Current

Contents

to authors after page 80

Biol. Chem. Hoppe-Seyler Vol. 367, pp. 53-59, January 1986

Die Primärstruktur der Hämoglobine von Eisbär (Ursus maritimus, Carnivora) und Kragenbär (Ursus tibetanus, Carnivora)* 3

3

3

Ottmar HOFMANN **, Thomas SCHREITMÜLLER *** und Gerhard BRAUNITZER unter Mitarbeit von Henning WiESNER b

3

b

Max-Planck-Institut für Biochemie, A b t . Proteinchemie, Martinsried bei München Tierpark Hellabrunn, München

(Der Schriftleitung zugegangen am 22. November 1985) ieme

Ce travail est dedie ά Monsieur le Professeur Jean Roche a Voccasion de son 85

Zusammenfassung: Die Erythrocyten des Eis­ bären (Ursus maritimus) und des Kragenbären (Ursus tibetanus) enthalten jeweils nur eine Hä­ moglobinkomponente. Die vollständigen Se­ quenzen der a- und ß-Ketten beider Arten wer­ den angegeben. Die Bestimmung ihrer Primär­ strukturen erfolgte an tryptischen Peptiden und

anniversaire

dem Prolylpeptid. Diese wurden über Gelchro­ matographie und RP-HPLC aufgetrennt. Die Hämoglobinketten von Eis- und Kragenbär zei­ gen identische Sequenzen. Evolutionäre Aspekte und Aspekte der Systematik werden diskutiert. Es wird eine Tabelle verschiedener Spezies mit identischen Hämoglobinsequenzen gegeben.

The Primary Structure of Polar Bear ( Ursus maritimus, Carnivora) and Asiatic Black Bear (Ursus tibetanus, Carnivora) Hemoglobin Summary: The adult Polar and Asiatic Black Bear have one hemoglobin component each. The complete amino-acid sequences of their a- and /3-chains are presented. Their primary structures were determined by sequencing the tryptic and prolyl peptides. The alignment of these peptides Key

was deduced from homology to human hemo­ globin chains. The hemoglobin sequences of the two species proved to be identical. The evolu­ tionary aspects of this result are discussed. A table of identical hemoglobin sequences from different species is given.

words: Tetrameric hemoglobin, Polar Bear, Asiatic Black Bear, primary structure, identical hemoglobin sequences.

Die vorgelegte Arbeit steht im größeren Rahmen einer Untersuchung an Carnivoren, um auf mole­ kularbiologischer Ebene die Frage zu beantwor­ ten, ob Großer und Kleiner Panda (Ailuropoda melanoleuca und Ailurus fulgens) Vertreter der Bären (Ursidae), der Kleinbären (Subursiden)

121

oder einer eigenen Familie sind . Wir haben deshalb die Sequenz der Hämoglobine zweier Vertreter der Bärenfamilie (Ursidae), nämlich die des Eisbären (Ursus maritimus) und des Kragen­ bären (Ursus tibetanus) ermittelt.

Enzym: Trypsin (EC 3.4.21.4). Abkürzungen: Hb = H ä m o g l o b i n ; TosPheCH Cl = (iV-Tosyl-L-phenylalanyl)chlormethan; Quadrol = Ν,Ν,Ν',W'-Tetrakis(2-hydroxypropyl)ethylendiamin; Propin = Diethylaminopropin; CM-Cellulose = Carboxymethylcellulose; Tp = tryptisches Pep­ t i d ; RP-HPLC = reversed-phase high performance liquid chromatography. * 89. Mitteilung über Hämoglobine; 87. und 88. Mitteilung s . l . c . l > l . ** Auszug aus der Dissertation von Ottmar Hofmann, F a k u l t ä t Chemie und Pharmazie der Universität München, 1986, in Vorbereitung. *** Auszug aus der Diplomarbeit von Thomas Schreitmüller, F a k u l t ä t Chemie und Pharmazie der Universität Mün­ chen, 1985. 2

l3

b

Copyright © by Walter de Gruyter & Co · Berlin · New York

54

Ο. Hofmann, Τ. Schreitmüller, G. Braunitzer und H. Wiesner

Vol. 367 (1986)

Material und Methoden Die untersuchten Blutproben stammten von einem Eis­ bären des Münchner Tierparks Hellabrunn, bzw. einem Kragenbären des Frankfurter Zoos. Zur Verhinderung der Koagulation waren sie mit Heparin versetzt. Nach Abzentrifugieren der Erythrocyten wurden diese zwei­ mal mit isotonischer Kochsalzlösung gewaschen: zur Lyse wurde mit der 1.5fachen Menge (v/v) destillierten Wassers versetzt. Das Entfernen der Lipide erfolgte durch Zugabe eines Viertel Volumenanteils CC1 und anschließender Zentrifugation. 4

3

Der Hämoglobingehalt wurde nach Cannan b e s t i m m t ' ' . Die Anzahl der H ä m o g l o b i n k o m p o n e n t e n der Lösung wurde durch Disk-Gelelektrophorese' ! bestimmt, die der verschiedenen Untereinheiten über Triton-Gelelek­ trophorese' J. 4

5

6

Die H ä m a b s p a l t u n g erfolgte nach der I.e.' !, die Tren­ nung der Globinuntereinheiten durch lonenaustauschchromatographie' ! über CM-Cellulose (Whatman CM52). Die Fraktionen wurden durch Gelfiltration ent­ salzt. Die Bestimmung der P r i m ä r s t r u k t u r erfolgte durch Sequenzieren der Ketten sowie durch Sequenzbestim­ mung ihrer tryptischen Peptide. 7

Die Globinketten wurden sowohl in ihrer nativen, wie auch oxidierten F o r m e l mit TosPheCH Cl-behandeltem Trypsin (Worthington) gespalten' !. Die Spaltungsdauer betrug 4 h bei Raumtemperatur ( p H 10.9-9.4). Die Fraktionierung der tryptischen Peptide erfolgte über Sephadex G-25 bzw. G-50 (fine) mit 0.1 Μ Essigsäure. Zur weiteren Fraktionierung wurde RP-HPLC eingesetzt. Als Säulenmaterialien fanden hierbei Li-Chrosorb RP2 und RP18 Anwendung. 2

a

b

c

d

Abb. 1. Disk-Gelelektrophorese des E i s b ä r e n h ä m o ­ globins (a) und Triton-Gelelektrophoresen des Gesamtglobins (b) sowie der a- und ß-Ketten (c, d). Das Globin des Kragenbären zeigte analoges Verhalten.

9

Beim Kragenbären wurden die nativen α-Ketten einer Asp-Pro-Spaltung unterzogen' !. Die Reinigung des Peptids wurde auf einer Sephadex-G-50-fine-Säule durch­ geführt. 10

Die Analysen wurden in einem Biotronik-Aminosäureanalysator Model LC 5000 vorgenommen. Hydrolysiert wurden jeweils 3—4 nmol Peptid oder Protein in 200 μΐ 5.7M HCl bei 1 10 °C 20 h. Die Tryptophanbestimmung erfolgte in Gegenwart von 6% Thioglycolsäure.

zwei Fraktionen erhalten. Die ß-Ketten, die zwei Tryptophanreste enthalten zeigten die höhere Extinktion bei 280 nm (Abb. 2). Nach Bestimmung der Bruttoformeln wurden 42 Reste der nativen α- und j3-Ketten nach der auto­ matischen Edman Methode sequenziert. Die tryptischen Spaltungen und deren anschlie­ ßende Fraktionierung über Sephadex-Gelchromatographie und RP-HPLC lieferten für die a-

11

Sequenziert w u r d e ' ! in Beckman-Sequenzern 890 Β und C, wobei sowohl das Q u a d r o l - P r o g r a m m ' ' ! (für große- und Lysin-Peptide), als auch das Propin-Pro­ g r a m m ' ! (für Arginin- und Lysin-Peptide) Anwendung fanden. Die Identifizierung der PhenylthiohydantoinDerivate der Aminosäuren erfolgte durch DünnschichtC h r o m a t o g r a p h i e ' ' ! oder H P L C ' > ! . 12

13

0.3

14

14

15

1 6

1 7

Ergebnisse Das Hämolysat des Eis- bzw. Kragenbärenbluts zeigte je eine Bande bei der Disk-Elektrophorese, nach Hämabspaltung ergaben sich jeweils zwei Banden bei der Triton-Elektrophorese (Abb. 1). Bei der Chromatographie des Globins auf CM-Cel­ lulose ( 8 M Harnstoff, 0.05M Natriumacetat, 0 . 0 1 % Dithioerythrit, pH 5.8; linearer NaClGradient von 0 . 0 2 M - 0 . 1 M NaCl) wurden daher

8

400 l / [m/1

800

e

Abb. 2. Trennung der o> und 0-Ketten des Eisbärenhä­ moglobins auf CM-Cellulose (pH = 5.8). Die Trennung von Kragenbärglobin ist unter gleichen Bedingungen identisch.

Vol. 367 (1986)

Ketten 14, für die j3-Ketten 16 Peptide. Diese wurden sowohl quantitativ charakterisiert (Tab. 2—5, Ergänzendes Material) als auch sequenziert.

ΝΑ Hu E/K E/K Hu

α α ß ß

55

Hämoglobine von Eis- und Kragenbär

Schließlich konnten die Primärstrukturen der beiden Bärenhämoglobine abgeleitet werden (Abb. 3).

A

AB Β

ihr 10 Val- -Leu-Ser-Pro-Ala-Asp-ty^ Val-His-Leu-7Tir-Gly-Glu-Gl^ Pro 9 Ala ΝΑ

Ala

Gly

Val

24

-Asn-Val-As[>Glu-Val20

Ala

Α

AB C

Hu E/K Ε/Κ Hu

Ala 20

Β

CD

α Ala 30 Met Leu α -Gly-Gly-Glu-Ala-Lei>Glu-Arp-^ ß -Gly-Gly-Glu-Ala-LeihGly-Ar^-Leu-Leu-M^ ß 30

40

48 -Asp-Leu40

C

Glu

48

CD

Ε Hu α His Gly 60 Ε/Κ α -Ser-Pn> -Gly-Ser-Ala-Gln-Val-Lys-Ala4tis-Gly-Lys-Lys-^^^ E/K ß -Ser-Ser-Ala-Asp-Ala-I l e - M e t - A s r v A s r h P r r > L y s - V a l - L y s - A l a 4 ü s - G ^ Hu ß

TTir-Pno

Val

Ö

Gly

60

Gly-Ala

α Val-Ala Val Met α -Ala-Ala-Gly-His-Leu-Asp-Asp-Leu-^ ß -Gly-LeihLys-Asi>Lei>Asp-Asrv^ ß Ala-His 80 EF

F Asn

FG 80

90 Thr

90

F

FG

G Hu E/K E/K Hu

α α ß ß

73

Ε EF

Hu E/K E/K Hu

67 Asn

GH

99 Leu -Asp-Pnc^Val-AsivPhe-Lys-Phe-Leu-Ser-His-Cys-Leu-Leu-Val-TTir-L -Asp-Pro-Glu-Asi>Rie-Lys-Leu-L 100 Ang 110

110 Ala

Η

Leu 120

G

Η

(GH

HC Hu E/K E/K Hu

α 120 α -PrxKAla-Val-His-Ala-Ser-Le(>As^ ß -Prr>Gln-Val-GlivAla-Ala-Tyr-G^ ß Pro 130

128 Leu-Ala-Ser

140 140 HC

Abb. 3. Die Aminosäuresequenzen der a- und 0-Ketten der Eis- und K r a g e n b ä r e n h ä m o g l o b i n e (Ursus maritimus und Ursus tibetanus) i m Vergleich zu denen des H u m a n h ä m o g l o b i n s ( H b A ) .

56

O. Hofmann, Τ. Schreitmüller, G. Braunitzer und H. Wiesner

Vol. 367 (1986)

Tab. 1. Identische Hämoglobine.

Diskussion Physiologie

Species

Die Sequenz des Eis- bzw. Kragenbärenhämo­ globins weist gegenüber Human-HbA 22 (α-Ket­ ten) und 15 (jß-Ketten) Unterschiede auf , wo­ von nur zwei funktionell wichtige Bereiche des Moleküls betreffen [al/j32-Kontakt: 043 (CD2) Glu Asp; al/j31-Kontakt: a34(B15)Leu -> Ala; α ϊ 11(G 18)Ala -> Ser und 0125(H3)Pro -» G i n ] ' ' . Da die Austausche zwischen Amino­ säuren gleichen oder doch sehr ähnlichen Cha­ rakters erfolgten, sollten analoge physiologische Eigenschaften zu erwarten sein. 1181

19

Erwähnenswert ist, daß beide Bärenhämoglobine zu der Gruppe von Säugerhämoglobinen gehö­ ren, die eine hohe intrinsische Sauerstoffaffinität aufweisen (Pos. β NA 2 ist H i s ) ' .

Identische Ketten

Homo sapiens, Pan paniscus und P. trog­ lodytes

α, β

Homo sapiens, und P. troglodytes

7

Camelus dromedarius und C. ferus bactrianus

α, β

Lama guanicoe und L . vicugna

ß

Bos primigenius und B. grunniens

7

Branta canadensis und Cygnus olor

ß

Ursus maritimus und U. tibetanus Chironomus thummi thummi

α, ß I, la

Ch. thummi thummi und Ch. thummi piger

III

201

zeitlicher Distanz ebenfalls identische Hämo­ globinkomponenten v o r ' ' . 27

Evolution Durch die vollständigen Sequenzen kann die Vermutung B. Brimhalls' bestätigt werden, daß es drei, für die Sequenz von Carnivora-Hämoglobinen charakteristische Reste gibt: 211

a 3 2

1) Rest T h r im Gegensatz zu anderen Säu­ gern, die hier Met haben 2) Rest T y r mit Ausnahme von Eis- und Kra­ genbär, die hier wie die anderen Säuger, ein His aufweisen. 3) Rest P r o ° , wobei Katze und Löwe, wie die anderen Säuger, hier ein His haben. a 8 9

a5

Vergleicht man die Sequenzen des Waschbä­ r e n ' mit denen von Eis- bzw. Kragenbär, er­ geben sich bezüglich der α- und j3-Ketten 9 bzw. 10 Austausche. Bei einer Evolutionsrate von 1.5 χ 10~ pro Aminosäure pro J a h r ' er­ gibt sich, daß sich Ursidae und Procyonidae von den Canoidae vor 22 Mio. Jahren getrennt haben m ü s s e n ' , gut in Einklang mit der Paläontolo­ gie. 221

9

23,241

251

Ebenfalls weitgehende Übereinstimmung mit der Paläontologie ergibt sich beim Sequenzvergleich Eisbären-/Braunbärenhämoglobin; die beiden Untergattungen sollen sich vor 1.5 Mio. Jahren getrennt haben' . Hier liegt bzgl. der ersten 42 Reste in den α-Ketten ein Austausch vor, die ß Ketten sind soweit identisch*. 251

Schwarz- und Braunbärenstamm sollen sich vor 5-10 Mio. Jahren getrennt haben und dement­ sprechend sollten sich ihre Hämoglobinsequen­ zen in 3 - 5 Resten unterscheiden' ' . Tatsäch­ lich sind sie jedoch identisch. Als Analogon, so­ wohl auf phänotypischer, wie auch auf moleku­ larer Ebene, erweist sich der Vergleich zwischen Hominiden (Homo sapiens) und Pongiden (Pan paniscus, P. troglodytes). Hier liegen bei gleicher

281

Die Antwort auf die Frage, warum keine Unter­ schiede zu verzeichnen sind, kann nur spekula­ tiver Art sein. Deutlich wird auf jeden Fall die Unabhängigkeit der molekularen Evolution von der p h ä n o t y p i s c h e n ' ' . 24,29

301

Das Phänomen identischer Hämoglobine zeigt sich außer im oben genannten Fall noch bei fol­ genden Species (Tab. 1): Dromedar (Camelus dromedarius) und Trampel­ tier (C. ferus bactrianus) : allerdings handelt es sich beim Trampeltier um einen domestizier­ ten Abkömmling des Wildkamels (C. ferus ferus). {21]

Interessant ist der Zusammenhang zwischen Lama guanicoe und L. vicugna (die zweite noch wildlebende Lamagattung)' ; hier sind die (3-Ketten identisch, während in den α-Ketten drei Austausche gefunden wurden' '** . 25,261

27

1

Als letztes Säugerbeispiel soll erwähnt werden, daß Yak (Bos grunniens) und Rind (Bos primi­ genius) identische 7-Ketten besitzen' '*** . 31

1

Bei Vögeln haben Kanadagans (Branta cana­ densis) und Höckerschwan (Cygnus olor) iden­ tische j3-Ketten' . Bei Insekten sind ebenfalls identische Hämoglobine bekannt. So sind die Komponenten der Larven von Chironomus thummi thummi CTT I und CTT Ia identisch' . Desweiteren existieren für die Komponenten CTT I I I und CTP I I I (Ch. thummi piger) je 2 Gene, wobei je eines identisch ist**. 321

331

25 261

* Braunitzer, G., Stangl, Α., Müller, E., unveröffentlichte Er­ gebnisse. ** Braunitzer, G. & Kleinschmidt, T., unveröffentlichte Er­ gebnisse. *** Lalthantluanga, R. & Braunitzer, G., unveröffentlichte Ergebnisse.

Vol. 367 (1986)

Hämoglobine von Eis- und Kragenbär

Wie in der Einleitung erwähnt stehen diese Da­ ten im Zusammenhang mit den Untersuchungen der Hämoglobine des Kleinen und Großen Pan­ dabären, deren Daten zu einem späteren Zeit­ punkt veröffentlicht werden.

15 16 17 18

Wir danken Frau B. Schrank, F r l . R. Gautsch, F r l . E. Müller, Frau B. Bless und Herrn C. Krombach für die Ar­ beiten an Sequenator und Analysator. Herzlichen Dank an Dr. R. Faust, Direktor des Zoologischen Gartens der Stadt Frankfurt, für die Bereitstellung des Kragenbären­ blutes. Literatur la

lb 2 3 4 5

6 7 8 9 10 11

12 13 14

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19

20 21

22 23 24

25 26

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28 29

30 31 32

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Ottmar Hofmann, Thomas Schreitmüller und Prof. Dr. Gerhard Braunitzer, Max-Planck-Institut für Biochemie, Abteilung Proteinchemie, D-8033 Martinsried bei M ü n c h e n . Priv.-Doz. Dr. Henning Wiesner, Tierpark Hellabrunn, D-8000 München 90, Siebenbrunner Str. 6.

57

58

O. Hofmann, Τ. Schreitmüller, G. Braunitzer und H. Wiesner

Vol. 367 (1986)

Ergänzendes Material Tab. 2. Aminosäurezusammensetzung der α-Ketten und der tryptischen Peptide des Eisbärenhämoglobins. In Klammern steht die aus der Sequenzbestimmung ermittelte Anzahl der Aminosäuren, sofern die Analysen­ werte zu weit abweichen.

Pos. Asx Thr Ser Glx Pro Gly Ala Cys Val Met lie Leu Tyr Pre His Trp Lys Arg Surre

Pos. Asx Ihr Ser Glx Pro Gly Ala Cys Val Met lie Leu Tyr Phe His Trp Lys Arg Sume

Tpl 1-7

Tp2 8-11

Tp3 12-16

0.95

0.99

0.95 0.94

—

—

0.82

0.89

—

— — —

0.97 —

0.92 —

— —

1.01

1.12

— — — — — —

— — — — — — —

0.99

0.87

1.24

—

0.95 2.87

— —

—

— — —

— —

_

0.93 1.38(1) 0.93

— — — —

—

0.77(1) 0.96

TplO 91-92

Tpll 93-99

0.94 — —

6.44(6)

1.89

1.04

— —

— —

2.92

— — —

—

1.12 —

0.96

29

2

_

— — —

TP9 62-90

—

_

1.02 0.97

5

—

2.93 0.98

4.00 2.15

4

0.95 1.94 7.00

Tp5 32-40

1.25

—

— — — — — — — — — —

_

—

7

3.92 1.84 1.88

Tp4 17-31

— — —

1.18

0.96 — —

0.83(1) 15

— —

2.07 —

1.05

9

1.11 1.81 1.86 2.86 2.84 0.77(1) 2.40(2) —

_ —

1.03

—

3.98 1.G2 1.93

0.99 — —

0.99 —

7

_

1.02

— —

5.46(5) —

1.96 3.76(4)

—

_ _

2.05 1.23(1) —

1.99

—

— —

1.04

1.01

-

2B

Tp7 57-60

Tp8 61

_ _ 1.16

1.01

—

—

—

—

__ 1.24(1) 0.88 2.03 1.14 0.78(1)

_ _

1.01

16

Tp12 Tp13 Tp14 100-127 12&-139 140-141

—

— — — —

0.98 0.90 1.72 0.92 2.02 0.99 1.04

—

—

1.97

Tp6 41-56

_ —

— — — — — —

0.97 — —

_

—

—

1.02

12

2

_

1.04

-

__ __

1.00

4

Ketten­ analyse 12.03(11) 10.86(11) 13.25(14) 5.20( 5) 7.89( 8) 8.55( 8) 18.16(19) 1.03( 1) 10.30(10) 0.97( 1) 16.31(16) 2.60( 3) 9.37( 9) 10.09(10) 1.05( 1) 10.98(11) 2.66( 3) 141

1

Tab. 3. Aminosäurezusammensetzung der 0-Ketten und der tryptischen Peptide des Eisbärenhämoglobins.

Pos. Asx Thr Ser Glx Pro Gly Ala Cys Val Met lie Leu Tyr Phe His Trp Lys Arg

Tpl 1-8

Asx Thr Ser Glx Pro Gly Ala Cys Val Met lie Leu Tyr Phe His Trp Lys Arg Sume

Tp3 18-30

_

2.06

0.75(1) 0.79(1) — 1.24(1) — 1.88(2) —

1.23(1) — —

0.80(1) — —

1.07 — —

1.04 —

1.06

3.03

— —

— —

— —

0.97

2.00 1.06

1.69(2) — — —

0.72(1) 0.93

TplOa 83-87

2.95

1.95 — — — —

•—

— — —

0.92

9

— —

1.10 1.14

3.07 1.06

8

— — — — — — —

1.95

1.81

—

Tp9b 77-82

1.14

— —

— —

Tp4 31-40

—

—

—

Sorme

Pos.

Tp2 9-17

0.98 — — —

1.03 0.96(1) — — — — — —

0.99 — —

— —

1.67(2)

_

Tp5 41-59

0.86(1) 13

0.88(1) —

1.00 10

Tp7 62-65

0.96

—

— — — —

0.91 2.13 0.90 0.99 1.09

2.01 0.95 1.00 2.94

— —

— —

— —

2.88

4.39(4)

—

—

0.94 1.96

0.94 1.88

—

—

0.94

1.00

1.04

2.00

—

—

—

~

6

5

17

16

Tp9a 67-76 1.76(2)

_

2.51(3)

—

1.26(1) 1.43(1) 2.09

„

_

—

0.27(1) 0.96 1.13

_

1.72(2)

—

1.34(1)

—

— —

0.92

_ —

1.05 0.95

_ _

—

1.41(1) 2.17

_

1.00

1.04

1.02

1.00

1.00

—

—

19

2

4

1

2.71(3) —

-

Tp10b11 Tp12 Tp14 Tp13 Tp15 88-104 105-120 121-132 133-144 144-146 3.21

Τρβ 66

5.05

— — —

Tp6 60-61

_ 0.95 —

4.28 0.95 —

2.02 —

1.17 — — —

0.65(1) 0.94

1.14 — —

_ 1.21 3.92

_

2.15(3) — —

1.18

— —

_ _

_

— — —

_

— —

0.94

— —

1.11

1.05

1.01

1.15

—

—

12

_

12

—

2

1.11

_

-

Ketten­ analyse 17.25(17) 5.03( 5) 6.49( 7) 10.51(11) 3.66( 4) 12.83(13) 12.74(12) 2.17( 2) 16.89(17) 0.85( 1) 1.19( 1) 19.35(19) 3.37( 3) 8.10( 8) 8.58( 8) 2.15( 2) 13.56(14) 2.21( 2) 146

1.00

-

Vol. 367 (1986)

Tab. 4. Aminosäurezusammensetzung der α-Ketten, des Prolylpeptids und der tryptischen Peptide des Kragenbärenhämoglobins.

Pos. Asx Trir Ser Glx Pro Gly Ala Cys Val Mst lie Leu Tyr Phe His Trp Lys Arg Same

Tpl 1-7

Tp2 8-11

Tp3 12-16

Tp4 17-31

Tp5 32-40

1.14

0.99

0.99 1.06

—

2.® 1.02

_ 1.06

_ 0.87

—

— — —

0.91 —

1.09 0.86 — —

_ _

—

— — — —

— — — —

1.20

1.15

7

4.42(4) 1.94 1.91 0.97 1.95 6.76(7) 0.88 6.24 3.02 1.03

Surme 29

__ —

0.92 3.08 __

_

1.00

4.15 2.00

0.98

1.15

Τρθ Pos. 62-90 Asx Thr Ser Glx Pro Gly Ala Cys Val Met lie Leu Tyr Phe His Trp Lys Arg

-

—

—

_

0.91 1.02 0.93

— — — —

0.76 1.18 —

4

TplO 91-92

_ — —

_

5

Tpll 93-99

_ —

0.97 15

2.02 — — — —

— — —

0.83

— —

_

—

0.91

7

—

1.11 —

0.96

_

—

—

2.05 —

0.98

9

Tp6 41-56 0.97 1.05 2.18 1.08 1.54(2) 1.12 1.04

—

4.02 0.98 1.68(2) —

_

5.36

_

— —

1.06 —

1.92 — —

1.14

—

—

2.08 3.86

1.86

_

0.96

-

28

—

0.98

Tp8 61

1.01 0.97

— —

— — — —

Asx Thr Ser Glx Pro Gly Ala

— — — — —

-

0.99 0.93 2.19 1.11

0.97

—

—

— — — — — — —

0.90

1.06

1.00

16

— — — — — — — — — — —

0.89 — — — —

—

1.11

12

2

Cys Val Met lie Leu Tyr Phe His Tn? Lys Arg

—

—

4

Ketten­ analyse 11.58(11) 10.46(11) 13.54(14) 5.15( 5) 7.62( 8) 8.46( 8) 18.97(19) 0.99( 1) 9.75(10) —

0.97( 1) 16.45(16) 3.33( 3) 9.08( 9) 9.78(10) 0.89( 1) 10.96(11) 2.92( 3) 141

Tab. 5. Aminosäurezusammensetzung der 0-Ketten und der tryptischen Peptide des Kragenbärenhämoglobins.

Pos.

„

— — — —

__

„

1.93 3.11

Tp7 57-60

0.92

Tp14 Tp13 Tp12 100-127 128-139 140-141

1.10 2.00 3.14 1.00 1.49(1) 1.90

— — —

2

1.01

__ —

— — —

1.14

—

1.67(2)

— — —

0.86

59

Hämoglobine von Eis- und Kragenbär

1

Sume

ProlylPeptid

Pos.

2.47(2) 3.84(4) 5.72(6) 1.44(1) 2.79(3) —

4.83(5) 0.95(1) 4.45(5) — —

6.01(6) 1.19(1) 4.49(5) 3.73(4) —

3.24(3) 0.96(1) 47

Asx Thr Ser Glx Pro Gly Ala Cys Val Met lie Leu Tyr Phe His Trp Lys Arg Surme

Tpl 1-8

Tp2 9-17

Tp3 18-»

_

1.81

1.31(1) 0.93 — 1.04 — 2.44(2)

1.18

_

5.21

—

2.13

3.02

1.12 1.19

—

_

—

1.27

2.06

3.15 1.19

0.86

1.10

2.77

—

-

Tp5 41-59

— —

—

~

Tp4 31-40

_

-

1.34(2)

—

— —

— —

— —

1.20

2.24

1.02

— —

— — —

— — — — —

2.22 1.02

0.91 1.22

0.67 0.95

—

—

8

—

Tp9b 77-β2 3.16 — — — — — — — — — —

1.83 — — — —

1.02

6

— —

0.88 —

0.93

1.06

9

13

10

Tp10a 83-87

Tp10b 88-95

Tpll 96-104

1.05 —

_

—

0.99 1.04

_

— —

_ _ — 0.90

1.07

_ 1.04 0.98 —

_

—

0.89

—

1.07 1.04 2.14 0.71 0.74 1.24

— —

1.04

—

3.18

~

19

_

_

— — — — —

Tp9a 67-76

_

2.07

— —

1.72

— — —

-

—

— — — — — — —

0.90

1.25

1.00

—

—

2

4

0.81

1

1.20

__

—

— —

3.95 0.82

— —

2.00 1.13 0.98 2.87

— —

— —

1.92

1.23

4.05

1.00

0.95 0.89

_

0.99 0.95

0.99

1.02

—

— —

_

— — —

_

_ __

Tp8 66

Tp14 Tp12 Tp13 Tp15 105-120 121-132 133-144 145-146 1.04

— —

-

— — — — — — —

—

0.* 0.95

„

— — — — —

Tp7 62-65

1.10

2.00

_

Tp6 60-61

_

1.02 1.94

_

1.99

1.31 3.87

1.13

2.01(3)

—

__

— — —

0.99 1.12. —

_

— — —

1.37

— — — — — — — — — — —

1.04

—

—

0.99

0.96

—

—

—

1.02

1.10

1.03

0.97

1.01

1.14

— —

—

—

—

—

~

—

8

9

16

12

12

-

5

2

— — —

1.03

-

0.97 — —

2.16 —

0.96 — —

1.09 —

10

Ketten­ analyse 17.02(17) 5.35{ 5) 7.1K 7) 10.72(11) 3.86( 4) 12.99(13) 12.37(12) 1.94( 2) 16.59(17) 1.05( 1) 1.17( 1) 18.84(19) 3.07( 3) 8.09{ 8) 8.09( 8) 1.59( 2) 13.84(14) 2.16( 2) 146