Differentialdiagnostik autoimmuner ZNS-Erkrankungen Teil 1 – paraneoplastische Syndrome und Neuromyelitis optica
Dr. rer. nat. Jasmin Aldag EUROIMMUN AG EUROIMMUN
Stiff-Person-
Syndrom Autoimmun-
Autoimmun-
Enzephalitis
Neuropathie
Antikörper-assoziierte
Syndrome Zerebelläre
Myasthenie-
Syndrome
Syndrom Erkrankungen mit
Demyelinisierung EUROIMMUN
Autoantikörper in der Neurologie
Intrazelluläre Antigene
Zelloberflächen-/Synapsenantigene
Hu, Yo, Ri, CV2, Ma, SOX1,
NMDAR, AMPAR, GABABR, VGKC,
Zic4, ANNA-3, PCA-2, GAD
LGI1, CASPR2, mGluR1, mGluR5, GlyR, DPPX, D2R, AQP4, Tr, AChR
Abbildung modifiziert nach Lancaster and Dalmau, Nat Review Neurol 2012
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Paraneoplastische neurologische Syndrome (PNS)
• Erkrankungen des ZNS und PNS, die in unmittelbarem Zusammenhang mit einem Tumorleiden auftreten. • Nicht direkt durch den Tumor, seine Metastasen
oder Therapie und Bestrahlung verursacht.
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Klinische Bedeutung paraneoplastischer Syndrome • Antikörper können bis zu 5 Jahre vor einem Tumornachweis auftreten • Regelmäßige Tumorsuche mittels
PET-Scan (2-4/Jahr für 4 Jahre) Wikipedia
erforderlich
• Ziel: Frühzeitige (kurative) chirurgische Resektion des Tumors EUROIMMUN
Paraneoplastische neurologische Syndrome - Gut charakterisierte onconeuronale Antikörper • anti-Hu (ANNA-1)
SCLC, Neuroblastom
• anti-Yo (PCA-1)
Ovar, Mamma, Uterus
• anti-Ri (ANNA-2)
Mamma, SCLC
• anti-Amphiphysin
Mamma, SCLC
• anti-CV2 (CRMP5)
SCLC, Thymom
• anti-Ma1 (PNMA1)
Mamma, Various
• anti-Ma2/Ta (PNMA2)
Testis
• anti-Recoverin
SCLC
Graus et al., J. Neurol. Neurosurg. 2004; Leypold et al., Akt Neurol 2012
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Paraneoplastische neurologische Syndrome - Teilcharakterisierte onconeuronale Antikörper • anti-Tr (PCA-Tr)
Hodgkinlymphom, NHL
• anti-Zic4
SCLC
• anti-SOX-1 (AGNA)
SCLC
• anti-PCA-2
SCLC
• anti-ANNA-3
SCLC
Wahrscheinlichkeit für Tumor bei positivem Befund: >95% Graus et al., J. Neurol. Neurosurg. 2004; Leypold et al., Akt Neurol 2012
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„Klassische“ Paraneoplastische Syndrome
Subakute sensorische Neuronopathie (25%)
Hu, Amphiphysin, CV2, Ma
Subakute Kleinhirndegeneration (25%)
Hu, Yo, CV2, Ma, Ri, Tr, Amphiphysin etc.
Enzephalomyelitis (11%) Limbische Enzephalitis (10%)
Opsoklonus-Myoklonus Syndrom (2%)
Leypold et al., Akt Neurol 2012
Hu, CV2, Amphiphysin, Ma Hu, Ma, CV2 etc.
Ri, Hu, Ma, NMDAR
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Laboratoriumsdiagnostik von Antikörpern gegen intrazelluläre Antigene
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Paraneoplastische neurologische Syndrome - Strategie zur Antikörperbestimmung Methoden:
Indirekte Immunfluoreszenz
Yo (PCA-1)
Westernblot, Linienblot
Zielsetzung:
Nachweis und Bestätigung paraneoplastischer Antikörper
Graus et al., J. Neurol. Neurosurg. 2004; Leypold et al., Akt Neurol 2012
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Paraneoplastische neurologische Syndrome - Strategie zur Antikörperbestimmung 1.) Indirekter Immunfluoreszenztest: Färbemuster auf neuronalem Gewebe Primatenkleinhirn
Amphiphysin
Hu, Ri
Ma
Yo
CV2
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Amphiphysin CV2 PNMA2
2.) Bestimmung der Reaktivität mit den spezifischen Zielantigenen: Membran-basierte Testsysteme
Ri
Yo
(Linienblot, Westernblot)
Hu Recoverin
SOX Titin
Befundbericht:
Zic4 GAD65 Tr
Immer Ergebnis der IIFT und Blotuntersuchung berücksichtigen!
Control
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Empfehlungen zur Diagnostik eines PNS
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Leitlinien der DNG zur Diagnostik eines PNS
EUROIMMUN Aktuelle Neurologie 2012; 39: 60–73
Laboranforderung: Serum oder Liquor? Serum: Hu, Yo, Ri, Ma, CV2, Amphiphysin, Recoverin, SOX1, Zic4, Tr, PCA-2, ANNA-3 Intrazelluläre-Antigene
Liquor und Serum: NMDAR, GABABR, AMPAR, LGI1, CASPR2, GAD
Oberflächen-Antigene EUROIMMUN
Neuromyelitis Optica (NMO) Rezidivierende entzündliche Erkrankung, die zur Zerstörung der
schützenden Nervenummantelung der Sehnerven und des Rückenmarks führt.
C
CC
A
Eugène Devic (1858-1936)
EUROIMMUN
Neuromyelitis Optica (NMO) Rezidivierende entzündliche Erkrankung, die zur Zerstörung der
schützenden Nervenummantelung der Sehnerven und des Rückenmarks führt.
C
CC
A
→ akute Sehstörungen (Erblindung) → Muskelschwäche bzw. Lähmung → Kontrollverlust von Darm- und
Eugène Devic (1858-1936)
Harnblase EUROIMMUN
Neuromyelitis Optica (NMO) Patienten mit NMO sprechen auf Plasmapherese und immunosuppressive
Medikamente an!
CC C
A
Eugène Devic (1858-1936)
B
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Neuromyelitis Optica (NMO) Patienten mit NMO sprechen auf Plasmapherese und immunosuppressive
Medikamente an! Autoantikörper Marker:
NMO-IgG (Lennon et al. 2004), gerichtet gegen
CC C
A
Eugène Devic (1858-1936)
Aquaporin-4 (AQP-4) (Lennon et al 2005).
B Überarbeitete diagnostische Kriterien für NMO (Wingerchuk et al. 2006) geben den Antikörpern eine bedeutende Rolle. EUROIMMUN
Identifizierung von Autoantikörpern bei NMO mittels indirekter Immunfluoreszenz
Immunofluorescence pattern of bound NMO-IgG in mouse CNS Lennon et al., Lancet 2004
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Laboratoriumsdiagnostik von Antikörpern gegen AQP4/ NMO-IgG
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Recombinant Cell IIFT (RC-IIFT) Insertion ins Plasmid
Synthese von DNS
Antigen
Plasmid mit DNS
DNS
Transfektion von Zellen
Expression des Antigens Bestimmung von Aak mit IIFT
Transfizierte Zelle EUROIMMUN
Serologische Diagnose von NMO Anti-AQP-4:
NMO-IgG: (Muster)
HEK (rek. AQP4)
Sehnerv
HEK
Kleinhirn
Sensitivität NMO (Wingerchuk-Kriterien): Spezifität (vs. MS, ADEM, SLE etc.):
78% (RC-IFT), 73% (IHC) 100%
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Aquaporin-4: Testsysteme P.J. Waters, V.A. Lennon, A. Vincent et al. Neurology 2012
Serumproben: - 35 NMO
- 25 NMO Spektrum-Erkrankungen (NMOSD) - Kontrollen: 39 schubförmig remittierende MS, 25 verschiedene autoimmune Erkrankungen, 22 gesunde Blutspender Sechs Testmethoden:
Tested at Mayo Clinic
Tested at Oxford University
IIF for NMO-IgG (in house)
FIPA-O (in house)
ELISA for AQP4 (RSR)
CBA-O (in house)
FIPA-M (in house)
FACS
CBA-E (EUROIMMUN)
CBA-E (EUROIMMUN) EUROIMMUN
Aquaporin-4: Testsysteme P.J. Waters, V.A. Lennon, A. Vincent et al. Neurology 2012
FIPA-M/
Cohort
n
IIFT
FACS
CBA-O
CBA-E
ELISA
NMO
35
17
25
24
21
18
16/ 16
NMOSD
25
12
21
20
20
18
16/ 16
Sensitivity
60
48.3%
76.7%
73.3%
68.3%
60.0%
53.3%
Controls
86
0
0
0
0
0
2/ 0
Specificity
86
100%
100%
100%
100%
100%
97.7%/ 100%
FIPA-O
Assays basierend auf AQP4 transfizierten HEK293 Zellen zeigten die besten Sensitivitäten!
CBA-E eignet sich sehr gut als Test für die Routinediagnostik! EUROIMMUN
Laboranforderung: Serum oder Liquor? Serum: Hu, Yo, Ri, Ma, CV2, Amphiphysin, Recoverin, SOX1, Zic4, Tr, PCA-2, ANNA-3 Intrazelluläre-Antigene AQP4 Oberflächen-Antigen
EUROIMMUN
Zusammenfassung o Diagnostikstrategie: klassische PNS Antikörper IIFT (Gewebe) und Immunblot
Antikörper gegen AQP4 IIFT (RC-IIFT (oder Gewebe)) o Untersuchungsmaterial: Serum (klassische PNS Ak, AQP4) Liquor und Serum (GAD)
EUROIMMUN
Zusammenfassung o Antineuronale Ak können mit verschiedenen neurologischen Syndromen assoziiert sein o Ak gegen „klassische“ intrazelluläre Antigene sind oft das erste Anzeichen eines zugrundeliegenden Tumors o Serologische Differenzierung prognostisch schlechterer NMO von klassischer MS mittels Anti-AQP4
EUROIMMUN
Danke für Ihre Aufmerksamkeit
EUROIMMUN