DIAGNOSTICO DE LA RABIA POR LABORATORIO MVZ DANTE SILVA AGUILAR AGOSTO DEL 2010

HISTORIA DE LA RABIA

En la cultura de Mesopotanea, Babilonia y Egipto se describe “perros locos”

HISTORIA DE LA RABIA • Pasteur publicó su primer informe sobre rabia en 1881 • En 1884, un año de mucha rabia en Francia, y da a conocer sus avances. • En 1885, la vacuna de la rabia fue probada

HISTORIA DE LA RABIA • 6 de Julio de 1885 • Niño Joseph Meister de 9 años, mordido 14 veces perro rabioso • Se hicieron 13 inoculaciones sucesivas con medulas de virulencia progresiva • El niño nunca desarrolló rabia

¿ QUE ES LA RABIA ? UNA ZOONOSIS

• La RABIA es un enfermedad causada por un virus. Este virus se encuentra en la saliva de los animales como el perro y el gato cuando están enfermos. • Está presente también en otros animales que puede enfermarse como los murciélagos, zorros, zorrillo, lobos mapaches y coyotes.

CICLO DE TRANSMISION DE LA RABIA URBANA

CICLO DE TRANSMISION DE LA RABIA EN FAUNA SILVESTRE

POBLACION SUCEPTIBLE A LA RABIA

CICLO DE TRANSMISION DE LA RABIA AEREA

RABIA EN ROEDORES

NOM-011-SSA2-1993 • Perros o gatos agresor sometido a observación durante 10 días a partir de la fecha de agresión, y observar • • • • • • • •

Cambios de conducta retraimiento Excitación y agresividad Fotofobia y anisocoria Parálisis faríngea progresiva Dificultad en la deglución Incoordinación de movimientos Postración Muerte LITOGRAFIA DE PERRO CON RABIA

SIGNOS DE LA ENFERMEDAD EN CANINOS • Se presenta en 4 fases: – Fase prodrómica 2-3 días – Fase excitativa 3-5 días – Fase paralítica 2- 3 días – Muerte.

NOM-011-SSA2-1993 25 – ENERO – 1995 • En las especies domésticas generalmente se presenta datos clínicos de rabia paralítica • Pelo erizado • Somnolencia • Secreción nasal • Temblores musculares • Inquietud • Hipersensibilidad en el sitio de lesión • Dificultad en la deglución • Falta de rumia • Parálisis de las extremidades posteriores • Muerte

NOM-011-SSA2-1993 • • • • • • • • • • •

En el humano con la presentación de: Cefalea Fiebre Dolor radial en la agresión Angustia Hidrofobia Parálisis Salivación excesiva Delirio Convulsiones Muerte

PATOGENIA DE LA RABIA

EL VIRUS SE TRANSPORTA CENTRIPETAMENTE A TRAVES DE LOS CORDONES NERVIOSOS, SE HA COMPROBADO EXPERIMENTALMENTE QUE AVANZA 3 mm POR HORA

BIOLOGIA MOLECULAR VIRUS RABICO • • • • • •

Posee 5 proteínas: Proteína L 190 kDa Proteína G 65-80 kDa Nucleoproteína N 58-62 kDa Fosfoproteína Ns 35-40 kDa Proteína Matrix M 22-25 kDa

Rhabdoviridae

METODOS DE DIAGNOSTICO • INMUNOFLUORESCENCIA DIRECTA • • • • •

PRUEBA BIOLOGICA – IFD HISTOLOGIA REACCION EN CADENA POLIMERASA PCR ANTICUERPOS NEUTRALIZACION ELISA

TOMA Y ENVIO DE MUESTRAS • CADAVER • CABEZA DEL ANIMAL SOSPECHOSO • MUESTRAS FRESCAS, REFRIGERADAS O CONGELADAS • SOL. GLICERINA 50% + SOL. FOSFATASA • TODAS MUESTRAS ACOMPAÑADAS DEL HISTORIA CLINICO

HOJA CLINICA • • • • • • • • •

FECHA TELEFONOS NOMBRE DE AGREDIDO O PROPIETARIO DIRECCION MUNICIPIO ESPECIE RAZA EDAD SEXO VACUNACION PREVIA COMO MURIO? ARMA DE FUEGO FECHA Nº DE AGREDIDOS ZONA DEL CUERPO AFECTADA DATOS CLINICOS DEL ANIMAL – – – –

AGRESIVIDAD TIMIDEZ CONVULSIONES ANOREXIA

• RESPONSABLE

DEGLUTACION DIFICIL MANDIBULAS TRABADAS LAGAÑA MUERTE SUBITA

REQUISITOS DE UN BUEN RESULTADO POR INMUNOFLUORESCENCIA

• BUENA CALIDAD DE LA MUESTRA • CONDICIONES ACEPTABLES DE TRANSPORTE DE LA MUESTRA • OBTENCION DEL RESULTADO EN EL TIEMPO ESTABLECIDO • DIFUSION DEL RESULTADO

METODO DE INMUNOFLUORESCENCIA

DIAGNOSTICO EN EL LABORATORIO • EL DIAGNOSTICO DE LABORATORIO DE LA RABIA EN UN ANIMAL, PERMITE EL INICIO O LA INTERRUPCION DEL TRATAMIENTO ANTIRRABICO EN UNA PERSONA. • O EN SU CASO EL DETERMINAR LAS MEDIDAS NECESARIAS PARA LA PREVENCION Y CONTROL EN LA ESPECIE AFECTADA

QUE ES LA INMUNOFLUORESCENCIA? • LA INMUNOFLUORESCENCIA (IF) ES LA PARTE DE LA MICROSCOPIA DE FLORESCENCIA QUE ABARCA EL CAMPO DE LA COMPROBACION ESPECIFICA DE AGENTES PATOGENOS (Ag) MEDIANTE INMUNORREACCIONES (Ab)

MICROSCOPIO DE EPIFLUORESCENCIA

MICROSCOPICO COMPUESTO FUENTE DE LUZ FLUORESCENTE

CONJUGADO:

IFD (+) =

Ac

+

= FLUOROCROMO (ITCF)

+

Ac

Ag rábico

Ac

=

Ag Ac rábico

LUZ UV

IFD (-) =

Ac

+

Ag rábico

= No IF

FUNDAMENTO DE LA PRUEBA INMUNOFLUORESCENCIA DIRECTA

EQUIPO DE PROTECCION

EXTRACCION DE ENCEFALO

EXTRACCION DE ENCEFALO

ESTRUCTURA DEL ENCEFALO CANINO

CORTEZA CEREBELO

MEDULA OBLONGA

HIPOCAMPO

HIPOCAMPO o ASTA DE AMON

CONTROL POSITIVO

CVS

CRN

MUESTRA SOSPECHOSA

PREPARACION DE MUESTRAS

SITIOS DE PREPARACION DE IMPROTAS POR CADA ESPECIE ASTA DE AMMON, CEREBELO, CORTEZA, MEDULA OBLONGA CORTEZA, CEREBELO MEDULA OBLONGA CEREBELO, ASTA DE AMMON, BULBO OLFATORIO IMPRONTA TRASVERSAL DEL ENCEFALO CEREBELO, CORTEZA, CORNEAS, CUERO CABELLUDO O SALIVA

MATERIAL PARA EL DIAGNOSTICO IFD • • • • • • • • •

Porta y cubreobjetos Caja de copplin Abatelenguas de madera Jeringas de insulina Pinzas y tijeras Estufa bacteriológica a 37ºC Cámara húmeda Microscopio de luz ultravioleta 490 nm Equipo de protección obligatorio, guantes, gafas cubre bocas

REACTIVOS ESPECIFICOS • • • • • • •

FLUOROCROMO CONJUGADO CRN Cerebro de ratón normal CVS Virus estandar de confrontación subtipo 1 ACETONA AGUA DESTILADA SOLUCION FOSFATADA BUFERADA ACEITE DE INMERSION AMORTIGUADA

PREPARACION DE LAS MUESTRAS NOM-056-ZOO-1995 • Marcar las laminillas • Hacer cortes del cerebelo, asta de Ammon, corteza cerebral o bulbo respiratorio • Realizar dos improntas en los cortes del cerebro • Con papel absorbente secar las improntas • En el vaso de copplin con acetona 30 minutos en congelación • Agregar el conjugado CVS y CRN

PREPARACION DE IMPRONTAS

PREPARACION DE IMPRONTAS

PREPARACION DE IMPRONTAS

UNION ANTIGENO ANTICUERPO

CRITERIOS DE LECTURA

• CORPUSCULOS DE COLOR VERDE MANZANA. • INTENSIDAD DE FLUORESCENCIA. • EL CONTRASTE DE LA TINCION. • POLVO ANTIGENICO. • POSITIVO O NEGATIVO

CONSERVACION DE LAS MUESTRAS • LAS MUESTRAS SE CONSERVAN EN CONGELACION A -20ºC. • TIEMPO DE RETENCION DE 3 MESES. • DISPOSICION EN EL MANEJO DE R.P.B.I

DIRECCION

• LABORATORIO DE PATOLOGIA ANIMAL DE MORELIA – AV. ACUEDUCTO 1093 – Col. MATAMOROS C.P. 58240 – TEL/FAX 443 319 8282 [email protected]

GRACIAS !!!!