SUBPROGRAMA DETECCIÓN DE MICROORGANISMOS EN ALIMENTOS

INFORME FINAL DE ENSAYO DE APTITUD PEEC- MA04-2012 Análisis cualitativo de Listeria monocytogenes

DEPARTAMENTO DE SALUD AMBIENTAL SUBDEPARTAMENTO DE METROLOGIA Y BIOTECNOLOGIA SECCION METROLOGIA AMBIENTAL Y DE ALIMENTOS

Departamento Salud Ambiental Instituto de Salud Pública de Chile Avda. Marathón 1000, Ñuñoa Santiago de Chile

Coordinador PEEC: Leonor Esquivel M. Autorizado por: Rubén Verdugo C. 20.08.2012 v.0 [email protected] Teléfono: (56)(2)5755475

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CONTENIDO

1. LISTA DE PARTICIPANTES

4

2. RESPONSABLES

6

3.

INTRODUCCIÓN

6

4.

MATERIAL DE ENSAYO

6

5.

CRONOGRAMA

7

6.

ANÁLISIS ESTADÍSTICO

7

7.

RESULTADOS INFORMADOS POR LOS PARTICIPANTES DEL PEEC

7

8.

ANÁLISIS ESTADÍSTICO DE LOS RESULTADOS INFORMADOS

7

9.

EVALUACIÓN DE DESEMPEÑO

7

10. COMENTARIOS Y SUGERENCIAS

7

11. GLOSARIO

8

12. REFERENCIAS

8

13. ANEXOS

9

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1. Lista de Participantes

5M S.A.

Talcahuano

Alimentos Multiexport S.A.

Puerto Montt

Aquagestión

Puerto Montt

Bioanálisis Ltda.

Osorno

Biotecmar Servicios

Talcahuano

BIOVAC S.A. Sede Puerto Aysén

Puerto Aysén

LABSER Puerto Montt (ex-BIOVAC S.A. Puerto Montt)

Puerto Montt

Centro de Análisis de Alimentos

Osorno

Centro de Estudios en Ciencia y Tecnología de Alimentos CECTA, Edificio de Alimentos USACH

Santiago

CERTILAB LABORATORIOS E.I.R.L

San Carlos

Cesmec S.A

Santiago

Cesmec S.A Sede Iquique

Iquique

Cesmec S.A. Sede Talcahuano

Talcahuano

Corthorn Quality Chile S.A

Santiago

Cultivos Marinos Chiloé S.A.

Ancud

Dictuc S.A.

Santiago

GCL, Gestión de Calidad y Laboratorio

Santiago

GCL, Gestión de Calidad y Laboratorio-Sede Concepción

Concepción

Intertek Labs And Testing Chile S.A.

Santiago

Laboratorio Ambiental de San Felipe de la SEREMI de Salud Región de Valparaíso

Valparaíso

Laboratorio Ambiental de Viña del Mar de la SEREMI de Salud Región de Valparaíso

Viña del Mar

Laboratorio Ambiental del Maule SEREMI de Salud Región del Maule

Talca

Laboratorio Ambiental Llanquihue SEREMI de Salud Región de Los Lagos

Puerto Montt

Laboratorio Ambiental O'Higgins SEREMI de Salud Región del Lib. B. O'Higgins

Rancagua

Laboratorio Ambiental SEREMI de Salud Región de la Araucanía

Temuco

Laboratorio Aquagross

Chillán

Laboratorio Aseguramiento Calidad de la Medición LACM

Valdivia

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Laboratorio ASISTEC. Escuela de Ingeniería de Alimentos. PUCV

Valparaíso

Laboratorio CTS de SGS Chile Sede Puerto Varas

Puerto Varas

Laboratorio CTS de SGS Chile Sede Santiago

Santiago

Laboratorio de Alimentos-Universidad Austral de Chile

Valdivia

Laboratorio de Microbiología Salmones Antártica S.A.

Chonchi

Laboratorio de Salud Ambiental Concepción

Concepción

Laboratorio de Salud Pública de la SEREMI de Salud Magallanes, Punta Arenas.

Punta Arenas

Laboratorio de Servicios Avanzados Labser Ltda

Rancagua

Laboratorio del Ambiente Bío Bío SEREMI de Salud Región del Bío Bío

Los Angeles

Laboratorio del Ambiente Osorno SEREMI de Salud Región de los Lagos

Osorno

Laboratorio del Ambiente SEREMI de Salud Región de Coquimbo

La Serena

Laboratorio del Ambiente SEREMI Salud Región de los Rios

Valdivia

Laboratorio del Ambiente SEREMI Salud Región de Tarapacá

Iquique

Laboratorio Interno Sopraval

La Calera

Laboratorio Lecyca Universidad del Bío Bío

Chillán

Laboratorio Pecuario Lo Aguirre Servicio Agrícola y Ganadero

Santiago

Laboratorio Regional SAG Osorno

Osorno

Laboratorio Sanitario Ambiental SEREMI Salud RM

Santiago

Laboratorio SeasLab

Santiago

Laboratorio SEMA Ltda.

Melipilla

Labotec Ltda.

Antofagasta

Mical

Santiago

Quality Lab Ltda.

Curicó

Sección Microbiología de Alimentos. Instituto de Salud Pública de Chile

Santiago

Silob Laboratorio Puerto Montt

Valparaíso

Taag Genetics S.A.

Santiago

Unidad de Calidad Facultad Cs. Químicas y Farmacéuticas Universidad de Chile

Santiago

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2. Responsables El personal que colaboró en el desarrollo de este trabajo fue: • • • •

Q. Leonor Esquivel TM. Fabiola Rojas Belen Paredes (Personal de Apoyo) T. Rosario Montecinos (Personal de apoyo)

3. Introducción El subprograma Detección de Microorganismos en Alimentos MA04-2012 del Programa de Evaluación Externa de la Calidad (PEEC) comprendió la evaluación cualitativa de Listeria spp en alimentos, específicamente la determinación de presencia o ausencia de Listeria monocytogenes. La importancia de el control de la Listeria monocytogenes en alimentos radica en que este microorganismo tiene la capacidad de desarrollarse a temperaturas de refrigeración y puede causar brotes alimentarios. Por esta razón los alimentos debieran ser continuamente controlados desde su proceso de producción hasta su distribución, para monitorear la presencia de microorganismos y asegurar así su calidad microbiológica. 4.

Material de Ensayo - Envío

El ítem de ensayo en estudio, que simula una muestra real de alimento consistió en una cepa liofilizada de Listeria innocua NCTC 11288, adquirido por el Instituto de Salud Pública de Chile. Cada uno de los laboratorios recibió una muestra debidamente etiquetada y sellada para la detección de Listeria monocytogenes según nota aclaratoria enviada el 07/06/2012 (ver nota en anexos). El resultado de detección para el ítem de ensayo fue establecido, en base al certificado y a un test de identificación realizado en el Instituto de Salud Pública de Chile.

Parámetros

Listeria monocytogenes

Resultado Detección

Ausencia

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Cada participante recibió las instrucciones para manipular el material de ensayo y realizar el análisis de rutina correspondiente. Asimismo, se indicó que debían cumplir con las prácticas estándares de seguridad durante el desarrollo del ensayo. Los participantes debían analizar las muestras de ensayo utilizando el método de rutina del laboratorio, idealmente incluyendo la muestra, dentro de una partida analítica. Además, se solicitó a los participantes que informaran el método de referencia, medio de dilución, medios de cultivo, métodos confirmatorios, entre otros utilizados para la realización del ensayo. 5.

Cronograma

Envío de material de ensayo Fecha límite de envío de resultados Envío informe preliminar de ensayo de aptitud

6.

04 de Junio 2012 29 de Junio 2012 27 de Julio 2012

Análisis estadístico

Los resultados coincidentes con el parámetro “Resultado de detección” se designan como “satisfactorio”. Los resultados no coincidentes con el parámetro “Resultado de detección”, se designan como “no satisfactorio”. El laboratorio participante deberá ubicarse en las tablas de acuerdo al código identificación de Laboratorio (CIL), el que fue notificado anteriormente.

7.

Resultados informados por los participantes del PEEC

7.1.- Datos Los resultados enviados por los participantes se presentan en las tablas Nº 3, que se encuentran en los anexos. De los 56 laboratorios adscritos 48 laboratorios enviaron resultados dentro del plazo establecido, lo que se expresa en un 86% respuesta general. 7.2.- Métodos de referencia Respecto de los Métodos de referencia informados por los laboratorios se indica lo siguiente:

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Tabla Nº 1: Métodos de Referencia reportados por los participantes

Método de referencia

%

n

NCh 2657 Of. 2001

21

43

BAM on line 2003

12

24

Vidas

5

10

ISO 11290-1

4

8

AFNOR CHR-21/1-12/01

1

2

PT-07 mediante Técnica de PCR

1

2

AOAC 2000 cap 17 ALOA ISO 11290- NCh 2657/2 método rápido ALOA ONE DAY

1

2

1

2

ISP

1

2

Vidas LSX- AFNOR N° BIO 12/12-07/04

1

2

Vidas LM 02 AFNOR N°BIO-12/11-03/04

1

2

En general, los laboratorios utilizan mayoritariamente el Método de la NCh 2657 Of. 2001 y Bacteriological Analytical Manual (BAM) on line 2003.

8.

Análisis estadístico de los resultados informados

Se evaluaron los resultados informados y se obtuvo lo siguiente: Tabla Nº 2: Resumen resultados informados

Parámetros n Resultado Detección

Listeria monocytogenes 44 Ausencia

n= Número de resultados reportados

Se realizaron gráficas circulares para expresar los resultados satisfactorios obtenidos. Los resultados reportados se encuentran en anexos, tabla Nº 3.

9.

Evaluación de desempeño

La calificación respecto de la evaluación global se puede observar en la tabla Nº 3. Los gráficos circulares de la evaluación de desempeño se encuentran en los anexos gráficos Nº 1. El 88% de los laboratorios, obtuvo un resultado satisfactorio. Informe Final de Ensayo de Aptitud MA04-2012

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10.

Comentarios y Sugerencias a) Fueron evaluados todos los resultados indicados en planilla de resultados en referencia a Listeria monocytogenes, tal como se indica en nota aclaratoria enviada el 07 de Junio de 2012. La cual se consideró mandatoria para el reporte de resultados. b) Los Laboratorios que informaron presencia de Listeria spp no fueron incluidos en el informe final, por no reportar resultados de acuerdo a lo solicitado en el punto a). No obstante, en consideración a que reportaron en el plazo establecido se les hará llegar un summary report. c) Los resultados informados muestran un alto porcentaje de resultados satisfactorios (88%), para la ronda. Mientras que el porcentaje restante 12% obtuvo resultados Insatisfactorios. d) Sugerimos a los laboratorios que cuenten con una evaluación insatisfactoria, evaluar las causas de falsos positivos en sus resultados, a fin de realizar las correspondientes medidas correctivas.

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11.

Glosario

Material de Referencia (MR): Es el material o sustancia en el cual uno o más valores de sus propiedades son suficientemente homogéneos y están bien definidos para permitir utilizarlos para la calibración de un instrumento, la evaluación de un método de medición o la asignación de valores a los materiales. Valor Asignado: Valor atribuido a una propiedad particular de un ítem de ensayo de aptitud. i) Valor conocido con resultados determinados mediante una formulación especifica del ítem de ensayo de aptitud (fabricación o dilución). ii) Valor de referencia certificado según lo determinado mediante los métodos de ensayo o medición definitivos para ensayos cuantitativos. iii) Valores de referencia, como los determinados mediante análisis medición o comparación del ítem de ensayo de aptitud junto con un material de referencia o patrón trazable a un patrón nacional o internacional iv) Valores consensuados por participantes expertos (que en algunos casos pueden ser laboratorios de referencia) los que deberían tener competencia demostrable en la determinación del o de los mensurandos a ensayar, utilizando métodos validados que se sepa son altamente exactos y comparables a los métodos utilizables en general. v) valores consensuados por los participantes utilizando los métodos estadísticos descritos en ISO 13528 y en el protocolo armonizado internacional de IUPAC, teniendo en cuenta los efectos de los valores atípicos. Desviación estándar para la evaluación de la aptitud: Es la medida de la dispersión utilizada en la evaluación de los resultados de la escala de valores y la escala diferencial, sobre los ensayos de aptitud, basados en la información disponible. Z-score: Puntuación estadística estándar, puntuación típica, puntuación de la Z. Corresponde a una puntuación estadística. El Z-score es el valor de una medida en un individuo dado comparado con un grupo similar, se calcula, en base a la media y la desviación estándar del grupo o el valor de referencia establecido, es decir, representa el número de DS por encima o debajo del valor medio o de referencia.

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12.

Referencias

1. “Robust Statistics: a Method of Coping with Outliers”. Royal Society of Chemistry, Analytical Methods Committee, Nº 6, A 2. ISO 13528:2005 (E). Statistical methods for use in profiency testing by interlaboratory comparisons. 3. The International Harmonized Protocol for Profiency testing of analytical chemistry laboratories (2006). Pure Appl. Chem. Vol78, pp 145-196. 4. AMC technical brief (2006). Representing data distribution with kernel density estimates.

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13. Anexos Tabla Nº 3. Resultados de detección reportados por los laboratorios y evaluación de desempeño Código Laboratorio MA0585 MA0587 MA0589 MA0591 MA0593 MA0599 MA0601 MA0605 MA0607 MA0609 MA0611 MA0613-CM MA0613-SZL MA0615 MA0617-MC MA0617-KU MA0621 MA0623 MA0625 MA0631 MA0635-RE MA0635-CC MA0639 MA0643-LE MA0643-BC MA0655 MA0663 MA0665 MA 0669 MA0671-GA MA0671-PQ MA0671-PAM MA0673 MA0677 MA0679 MA0685 MA0693 MA0697 MA0705

Resultado detección

Listeria monocytogenes Ausencia Ausencia Ausencia Presencia Ausencia ** Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Presencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia ** Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia ** Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia ** Ausencia ** Presencia ** Ausencia

Evaluación de desempeño Satisfactorio Satisfactorio Satisfactorio Insatisfactorio Satisfactorio Satisfactorio Satisfactorio Satisfactorio Satisfactorio Insatisfactorio Satisfactorio Satisfactorio Satisfactorio Satisfactorio Satisfactorio Satisfactorio Satisfactorio Satisfactorio Satisfactorio Satisfactorio Satisfactorio Satisfactorio Satisfactorio Satisfactorio Satisfactorio Satisfactorio Satisfactorio Satisfactorio Satisfactorio Satisfactorio Satisfactorio Insatisfactorio

Satisfactorio **= No reporta resultado de acuerdo a lo solicitado en nota enviada a los participantes el 07/06/2012.

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Tabla Nº 3. Resultados de detección reportados por los laboratorios y evaluación de desempeño (Continuación). Código Laboratorio MA0715 MA0717 MA0723 MA0725 MA0729-KV MA0729-EV MA0731 MA0739 MA0741 MA0745 MA0747 MA0761 MA0767 MA0769 MA0771 MA0775

Resultado detección

Listeria monocytogenes Ausencia Ausencia Presencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia ** Presencia ** ** Ausencia Ausencia **

Evaluación de desempeño Satisfactorio Satisfactorio Insatisfactorio Satisfactorio Satisfactorio Satisfactorio Satisfactorio Satisfactorio Satisfactorio Insatisfactorio

Satisfactorio Satisfactorio

**= No reporta resultado de acuerdo a lo solicitado en nota enviada a los participantes el 07/06/2012. Grafico Nº 1. Distribución % de Evaluación de desempeño

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Figura N°1. Copia de Correo de Nota Aclaratoria Enviada el 07/06/2012 a los participantes.

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