ACTUALIZACION TOMA DE MUESTRAS VIROLOGICAS Abril 2014

MV. Judith Mora R. Jefe Subdepto. Enfermedades Virales ISP

METODOS DE DIAGNOSTICO VIRAL A. DETECCION DE VIRUS •Aislamiento viral en cultivos celulares. •Inoculación en animales de laboratorio •Inoculación en huevos embrionados B. DETECCIÓN INDIRECTA O PRODUCTOS VIRALES. •Inmunofluorescencia (IFD). •Inmunoensayo enzimático (ELISA) C. DETERMINACION DE ANTICUERPOS Métodos serológicos (sueros pareados o muestra única) •ELISA (IgM –IgG) •Inmunofluorescencia (IFI). D. DETECCION DE MATERIAL GENETICO VIRAL • Reacción de polimerasa en cadena (PCR)

CONSIDERACIONES PARA TOMA Y ENVIO DE MUESTRAS PARA ESTUDIO VIROLOGICO • PERIODO OPTIMO DE RECOLECCION – Ej: Aislamiento viral en fase aguda • TIPO DE MUESTRA – Ej: Sangre c/EDTA • SITIO DE OBTENCION

– Ej: Deposición • TECNICA DE OBTENCIÓN DE LA MUESTRA – ANF vs Tórula faríngea • RECOLECCION DE LAS MUESTRAS – Envase estéril, cierre hermético, etc • TRANSPORTE DE LAS MUESTRAS – Temperatura, medio transporte, etc

1º

Tº

2º: protege el embalaje/envase secundario de los daños físicos durante el transporte.

3º

identificar al remitente y al destinatario.

Incluir formularios de datos relativos a la muestra

Organigrama Subdepartamento Enfermedades Virales

Laboratorio Nacional de Referencia y cumple acciones de vigilancia establecidas en el Reglamento sobre Notificación de Enf. Transmisibles de Declaración Obligatoria .

R.R.H.H: Profesionales

26

Técnicos, Auxiliares, Administrativos

24

Total

50

32.000 muestras Exámenes por Algoritmos Diagnósticos

Virus Entéricos • Vigilancia PFA Apoyo a erradicación del virus Polio Último caso en América 1991 (Perú)

• Meningitis Viral Estudio brotes

Diarreas agudas con diferentes etiologías:

• Vigilancia Rotavirus Hospitales centinelas (V, VIII, RM) MINSAL-OPS • Vigilancia Gastroenteritis virales (Norovirus, ADV, Astrovirus, Rotavirus): – Centinelas ambulatorios – Estudio Brotes

Nombre exámen / Prestación

Método

Tipo de muestra

Requisitos previos

Volumen de muestra

Transporte y conservación

Plazo de respuesta en días hábiles

Deposición: envase estéril, tapa rosca. sin medio de transporte Aislamiento Aislamiento LCR: envase estéril, 0-5 días de de en cultivos tapa rosca. evolución Enterovirus celulares Liq.pericárdico: envase estéril tapa rosca

Deposición: Congelar (-18º 1 cuch. de té a -20ºC) o LCR o Líq refrigerar (2º a Pericard: 1 8ºC) con envio ml ped inmediato 2 ml adulto

15

Vigilancia Aislamiento Poliovirus en cultivos (sospechos celulares os PFA)

Congelar (-18º 10 grs. (1 a -20ºC) y cuch. de té) enviar en frío 2º a 8ºC. .

15

Deposición sin medio de transporte en 0-14 días de envase estéril tapa evolución rosca

Vigilancia de Virus * Deposición sin * 0-3 días de Gastroenteri medio de transporte en evolución en cos: Inmunoquím envase esteril tapa niños menores 5 10 grs. (1 Adenovirus ica y RT-PCR rosca . años : cuch. de té) entéricos, **5 a 10 muestras por Centinelas Astrovirus, Brotetificado) ambulatorios Norovirus y otros Técnicas Vigilancia Serológicas Deposición sin medio Rotavirus Inmunoenzi de transporte, envase (Centros máticas esteril tapa rosca Centinelas) ytipificación

0-5 días de evolución en niños, hasta 5 años de edad, hospitalizados

Congelar (-18º a -20ºC) y enviar en frío 2º a 8ºC. .

21

Congelar (-18º 10 grms. (1 a -20ºC) y cuch. de té) enviar en frío 2º a 8ºC. .

21

Virus Respiratorios • Vigilancia Virus Respiratorios : ADV, VRS, PI , Metapneumovirus) e Influenza A y B – IRAG complicación frecuente de la Influenza – Red Lab. Hosp. Centinelas IFI – Red Lab. Regionales PCR – Centro Nacional Influenza para OMS Aislamientos Recepción hasta 12:00 hrs por tipo procesamiento

Nombre exámen / Prestación Método

Aislamiento Aislamiento de Influenza en cultivos AyB celulares

Aislamiento Virus Respiratorio Sincicial , Adenovirus, Parainfluenza

Inmunofluorescencia Indirecta para Virus Influenza A, B

Aislamiento en cultivos celulares

Tipo de muestra

a) Gargarismo b) Aspirado ANF Máximo 3 días de c) Tórula con evolución secreción NF d) Biopsia tejidos

a) ANF b) Tórula secreción NF c) Biopsia tejidos Hasta 5 días de d )ADV: Tórula evolución secreción conjuntival

Inmunofluore Frotis fijado scencia Aspirado NF

PCR para Influenza A, B PCR

Requisitos previos

Aspirado nasofaríngeo o tórula secreción nasofaríngea o biopsia pulmón

Hasta 3 días de evolución Otros VR :Hasta 5 días de evolución

Hasta 3 días desde inicio de los síntomas

Volumen de Transporte y muestra conservación

Medio transporte viral Hanks´s 0,5% gelatina +antibiótico en frío c/refrigerante s T° 2 – 8 C Medio transporte viral Hanks´s 0,5% gelatina +antibiótico en frío c/refrigerante s T° 2 – 8 C

Plazo de respuesta en días hábiles

15

15

En frío con refrigerantes. T° 2-8°C

3

Medio transporte viral Hanks´s 0,5% gelatina c/antibiótico c/refrigerante s T° 2 - 8 C

5

Virus Exantemáticos • Vigilancia Integrada Sarampión-Rubéola: • Pacientes con exantema macular que puede ser acompañado de fiebre, conjuntivitis, artralgia, linfoadenopatías , etc • SRC malformaciones congénitas (1er trimestre embarazo) Recomendaciones: – Muestra para aislamiento ideal Aspirado – En su defecto, orina: mínimo 50 ml, enviar siempre junto a la muestra de suero. • Otras: CMV, Herpes

Nombre exámen / Prestación

Método

Requisitos Tipo de muestra previos

Volumen Volumen de de muestra muestra adulto pediátrica

Suero extraído 1 ml en forma estéril Enviar ELISA, IF, 2 ml suero. suero. enviar en tubo muestras con aislamiento, ANF en ANF en estéril tapa formulario de Vigilancia Sarampión RT-PCR medio de medio de rosca. En casos vigilancia con la Rubeola (según transport transporte seleccionados totalidad de los e viral o viral o 50 algoritmo ANF antecedentes ISP) 50 ml ml orina (Orina a solicitados orina solicitud)

Estudio Inmunidad Sarampión

Vigilancia Síndrome Rubeola Congénita .

Suero extraído Inmunofluor en forma estéril escencia enviar en tubo No tiene (IF) (IgG) estéril tapa rosca ELISA IgM (algoritmo ISP)

Serología IgG RubéolaELISA IgG

Suero en tubo estéril tapa rosca . Suero, en tubo estéril tapa rosca .

1 ml

2 ml

Recién nacidos 1 ml de < 1 año suero

1 ml de suero

3 ml suero

Transporte y conservación

Plazo de respue sta en días hábile s

Aspirado con medio de transporte viral Hanks´s con 0,5% gelatina mas antibiótico. Enviar con unidades refrigerantes Tº 2-8ºC.

4

En frío Tº 2-8ºC. Con unidades refrigerantes

5

En frío Tº 2-8ºC. Enviar con unidades refrigerantes En frío Tº 2-8ºC. Enviar con unidades refrigerantes

10

10

Nombre exámen / Prestación

Requisitos previos

Método

Tipo de muestra

ELISA

Suero en tubo estéril tapa rosca .

Estudio transplante

Serología IgM Citomegalovirus

ELISA

suero, en tubo estéril tapa rosca.

IgM recién nacidos < 3 meses con Síndrome de TORCH

Aislamiento de Citomegalovirus

Orina,Recolecciò Aislamiento n: segundo 24 horas de en cultivos chorro. Envase evolución celulares estéril, tapa hermética

Aislamiento Herpes Simplex

a) LCR en tubo estéril tapa rosca o de goma b) Contenido Aislamiento vesicular en cultivos De 0- 2 días (Líquido de celulares lesión) c) Tórula Secreción Vaginal

Serología IgG CITOMEGALOVIRUS

Aislamiento Aislamiento de Virus Tórula de lesión en cultivos Hasta 3 días Varicela Zoster vesicular celulares

Volumen de Volumen de Transporte y muestra muestra conservación pediátric adulto a

Plazo de respu esta en días hábile s

En frío Tº 2-8ºC. Enviar con unidades refrigerantes

10

1 ml de suero

En frío Tº 2-8ºC. Enviar con unidades refrigerantes

10

3 ml

3 ml

Refrigerar sin medio de transporte viral

21

LCR: 1 ml

Con medio de transporte viral Hanks´s con 0,5% gelatina mas antibiótico. Enviar con refrigerantes T° 2–8C

7

En frío Tº 2-8ºC. Enviar con unidades refrigerantes

15

1 ml de suero

LCR: 1 ml

3 ml suero

SIDA • Enfermedad causada por VIH: Confirmación de muestras reactivas al tamizaje en el país

Verificar clave en CI • Diagnostico SIDA pediátrico (< 2 años) Recepción lu a Ju por tipo procesamiento

• Estudios Genotipificación, FRVIH http://formularios.ispch.cl

NOMBRE DE LA PRESTACIÓN

ENSAYOS

TIPO DE MUESTRA

REQUISITOS PREVIOS

CRITERIO DE VOLUMEN ACEPTACION, MUESTRA ALMACENAMIENTOTRANSPORTE

PLAZO DE RESPUESTA (DIAS HABILES)

Suero o plasma: En frío Tº 2 - 8ºC. Enviar Determinación * Suero o plasma con unidades de Ag HIV (Técnicas Técnicas Muestra refrigerantes. Ac IgG anti HIV serológicas) serológic doblemente 12 días, VIH ADULTO as: 1 ml * Sangre con reactiva al Sangre con 90,6% año CONFIRMACION Ácidos Técnicas anticoagulante tamizaje de VIH anticoagulante: 2013) nucleicos: EDTA (téc. molecula Temperatura ambiente provirus y res: 4 ml moleculares) (15-25 ºC) no más de RNA de HIV 48 hrs desde la extracción.

Detección de AntígenoSangre con VIH PEDIATRICO anticuerpo virus anticoagulante CONFIRMACION VIH, Ag P24, EDTA virus VIH (PCR , RNA)

En > 2 años a solicitud. En a 8 días de suero y 1 ºC con y 2 ml de evolución. ml de unidades LCR LCR refrigerantes

10

10

Virus Oncogénicos, otros • Vigilancia HTLV I/II (Virus linfotrópico de células T humano) Confirmar muestras reactivas tamizaje país y casos sospecha de Leucemia Linfotrópica y Paraparesia Espástica http://formularios.ispch.cl/Externo/Form ularioExterno.aspx • Diagnóstico y estudios Virus Papiloma Humano : El VPH puede causar verrugas genitales y ciertos cánceres (CaCu). • Estudio brotes Parotiditis : infección aguda con aumento volumen glándula parótida.

gp46 HTLV-I

9 5 CELLULAR RECEPTOR

k d

Tax (p40), Rex (p27,p21)

HTLV-I p14

Nombre exámen / Prestación

Método

Tipo de muestra

Requisitos previos

Confirmación HTLV I/II

Muestra Doblemente reactiva y casos de ELISA , IF, Sangre con PCR (según anticoagulante sospecha de algoritmo) (EDTA o citrato) Leucemia Linfotrópica y Paraparesia Espástica

Volumen de Volumen Transporte y muestra de muestra conservación pediátric adulto a

3ml

5 ml

En frío Tº 2-8ºC. Enviar con unidades refrigerantes. No más de 4 ds. desde extracción a la recepción en laboratorio

Estudio de Brotes de Serología, Parotiditis PCR

En frío de 2 a 8 ºC con unidades 1 ml Suero o plasma Sólo estudio de 3 ml suero refrigerantes. No suero y 3 y Orina en tubo brote según y 3 ml de más de 4 ds. ml de estéril circular MINSAL orina desde extracción orina a la recepción en laboratorio

Virus Papiloma Humano (VPH)

Tórula de lesión o raspado de zona sospechosa de infección genital / Biopsias de tejidos / condiloma ; tubo estéril tapa rosca con medio de transporte.

PCR

En frío de 2 a 8 ºC con unidades refrigerantes. No más de 4 ds. desde extracción a la recepción en laboratorio

Plazo de respu esta en días hábil es

15

7

10

RABIA • Sd neurológico agudo (encefalitis ) que progresa a coma , insuficiencia respiratoria y muerte. Pacientes con antecedentes contacto con animal sospechoso.

•Estudio de inmunidad en mascotas . •Vigilancia virus Rábico: Animales sospechosos: murciélagos, perros, gatos (*) Recepción 24 horas •Caracterización antigénica para determinar variantes virales circulantes Recomendaciones: Cumplir normas de transporte, bioseguridad • Diagnóstico de Rabia en humanos

NOMBRE DE LA TIPO DE MUESTRA PRESTACIÓN

REQUISITOS PREVIOS

Sangre s/anticoagulante, o suero en un tubo INMUNIDA plástico estéril con D PARA tapa rosca o tapón RABIA de goma. ESTUDIO En caso de sospecha de rabia humana (*)

Animal VIRUS RABICO En caso de VIGILANCI sospecha de rabia A humana (*)

VOLUMEN MUESTRA ADULTO PEDIATRICO

30 días después de 2 ml de la sangre o 1 vacunación ml suero antirrábica.

Sospecha No Aplica de rabia.

* Ver siguiente tabla

PLAZO DE DESCRIPCION DE ALMACENAMIENTOTRAN RESPUESTA PRESTACION SPORTE (DIAS HABILES)