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REGISTRO DE LA PROPIEDAD INDUSTRIAL

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k ES 2 006 917 kN´umero de solicitud: 8801265 kInt. Cl. : C07D 215/22

11 N.◦ de publicaci´ on: 21

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˜ ESPANA

C07D 295/06 //A61K 31/47

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PATENTE DE INVENCION

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73 Titular/es: Cenavisa, S.A.

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72 Inventor/es: Freixas Bazaco, Joan

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74 Agente: Ungr´ıa Goiburu, Bernardo

22 Fecha de presentaci´ on: 26.04.88

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P. Prim, 34 Reus, Tarragona, ES

45 Fecha de anuncio de la concesi´ on: 16.05.89

46 Fecha de publicaci´ on del folleto de patente:

16.05.89

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A6

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54 T´ıtulo: Un procedimiento para la preparaci´ on del ´ acido 1-etil-6-fluor-4-oxo-7-morfolin-1,4-dihidro-

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-3-quinolincarbox´ılico.

57 Resumen:

La reacci´ on del ´acido 1 - etil - 6 - fluor - 7 - cloro - 4 - oxo - 1,4 - dihidro - 3 - quinolincarbox´ılico con morfolina proporciona el ´acido 1 - etil - 6 fluor - 4 - oxo - 7 - morfolin - 1,4 - dihidro - 3 quinolincarbox´ılico. Esta reacci´ on se lleva a cabo normalmente a una temperatura de unos 140◦ C durante un periodo de tiempo de unas 5 horas. Este compuesto posee una potente actividad antimicrobiana especialmente frente a germenes Gram - negativos.

Venta de fasc´ ıculos: Registro de la Propiedad Industrial. C/Panam´ a, 1 – 28036 Madrid

2 006 917 DESCRIPCION

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La presente invenci´on se encuadra dentro del campo de la s´ıntesis de las 6 - fluorquinolonas y concretamente de la s´ıntesis del ´acido 1 - etil - 6 - fluor - 4 - oxo - 7 - morfolin - 1,4 - dihidro - 3 - quinolincarbox´ılico el cual posee una potente actividad antimicrobiana, fundamentalmente frente a g´ermenes Gram - negativos. Se denominan quinolonas, fluorquinolonas, quinoleinas o inhibidores de la DNA - girasa, a un nuevo grupo de antibacterianos obtenidos por s´ıntesis y generados durante los u ´ltimos 5 ´o 10 a˜ nos, los cuales se caracterizan por tener un muy amplio espectro antibacteriano y una muy baja toxicidad. Su origen se remonta al a˜ no 1962, en que se descubri´ o el ´acido nalid´ıxico; posteriormente se fueron desarrollando nuevos compuestos como el a´cido oxol´ınico en 1967, la cinoxacina, en 1977, que fueron ampliando la eficacia del a´cido nalid´ıxico.

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No obstante, recientemente se ha desarrollado e investigado un nuevo tipo de quinolonas (las fluorquinolonas), de las cuales actualmente se conocen m´as de 25; entre las m´ as interesantes encontramos la norfloxacina, ofloxacina, amifloxacina, ciprofloxacina, enoxacina, perfloxacina, etc..., pudi´endose decir de ellas que son un altamente prometedor y brillante grupo de antibi´ oticos, caracterizados por tener un espectro de actividad que abarca pr´ acticamente cualquier microorganismo, con una potencia, ocasionalmente, hasta 100 veces mayor que el ´acido nalid´ıxico, una excelente farmacocin´etica y un perfil toxicol´ogico excepcionalmente bajo. En el esquema siguiente se muestra la estructura de las principales quinolonas y el n´ ucleo que comparten la mayor´ıa de las mismas.

(Ver Esquema en la p´agina siguiente) 30

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En las siguientes publicaciones se describe la s´ıntesis de alguna de estas 6 - fluor - 4 - quinolonas: 40

- Koga, H.; Itom, A., J. Med. Chem., 23, 1358 (1980) y Ktorin Pharm. Co., Fr. 2.391.210 (1978), describen la s´ıntesis de la norfloxacina. - Wentland, M.P., J. Med. Chem. 27, 1103 (1984), describe la s´ıntesis de la amifloxacina.

45

- Metzger, K., European Patent 0078362 (1983), describe la s´ıntesis de la ciprofloxacina. - Matsumoto, J., J. Med. Chem., 27, 292 (1984), describe la s´ıntesis de la enoxacina. - Albrecht, R., Prog. Drug. Res., 21, 9 (1977), describe la s´ıntesis del ´acido nalid´ıxico.

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Sobre el n´ ucleo 4 - quinolona aparece, muy frecuentemente, una sustituci´on alif´atica del H de la poon 3, un a´tomo de fl´ uor en posici´on 6 y una sustituci´ on de car´ acter sici´on N1 , un grupo carboxilo en posici´ variable en posici´ on 7, aunque usualmente suele ser un n´ ucleo de piperacina o similar; otra cuesti´on, aparentemente interesante es la existencia de un grupo metilo en el anillo de piperacina, el cual parece incrementar la biodisponibilidad del f´ armaco en los seres humanos. Las quinolonas de segunda generaci´ on son bactericidas de acci´ on muy r´ apida; una exposici´ on de tan solo 1 ´o 2 horas, a una concentraci´on de f´ armaco de entre 1 a 4 veces la CMI, causa pr´acticamente la muerte de cualquier microorganismo sensible.

60

Su mecanismo ´ıntimo es complejo y no exactamente conocido, aunque est´e claro que act´ uan a nivel de los mecanismos de s´ıntesis del DNA cromos´omico bacteriano, de la forma que describiremos a continuaci´ on. El mecanismo exacto por el cual la bacteria muere, parece ser causado por el corte de los 3

2 006 917 filamentos del DNA por la DNA - Girasa, y la inhibici´ on de la s´ıntesis de prote´ınas bacterianas pues el proceso de muerte bacteriana es antagonizado por la rifampicina y el cloramfenicol.

5

El blanco exacto de acci´on parece ser el enzima bacteriano responsable del mantenimiento del superenrollamiento del DNA.

10

En las celulas bacterianas, el cromosona est´ a compuesto por una enorme cadena de DNA, fuertemente enrollada sobre si mismo, y a su vez, sobre un n´ ucleo del RNA; la raz´on de este superenrollamiento es que la mol´ecula de DNA pueda ser ubicada en el interior de la c´elula bacteriana, ya que, de no producirse, ser´ıa pr´ acticamente imposible que cupiese.

15

Este plegamiento organizado, o superenrollamiento es catalizado por la DNA - Girasa o Topoisomerasa II, caracteriz´andose el mismo por realizarse en sentido contrario al enrollamiento de las hebras o filamentos del DNA (superenrollamiento negativo) y, adem´as, se produce sobre ´areas espec´ıficas del DNA, llamadas “dominios”, conoci´endose, por ejemplo, en el E. Coli 65 dominios; el n´ umero de superenrollamientos que se producen por dominio es de unos 400; a su vez, los dominios se superenrollan simult´ aneamente.

20

Para producirse estos u ´ltimos superenrollamientos, la DNA - Girasa corta moment´aneamente la cadena del DNA (para poder superenrollarla en sentido negativo), la superenrolla y la vuelve a sellar en el punto donde la cort´o.

25

La DNA - Girasa est´a compuesta por cuatro subunidades; dos mon´ omeros alfa, con un peso molecular de 100 kilodaltons, y dos mon´ omeros beta, de 90 kilodaltons; las subunidades alfa son las responsables de producir los cortes espec´ıficos en la cadena de DNA y, posteriormente, su reparaci´on, y las subunidades beta se ocupan de superenrollar los filamentos cortados por la subunidad alfa.

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Bien, asi las cosas, parece ser que las quinolonas act´ uan inhibiendo espec´ıficamente las unidades alfa de la girasa, impidiendo concretamente la reparaci´on de la cadena del DNA una vez cortado, inhibiendo el resellado, con lo cual, adem´as de desorganizar el cromosoma bacteriano, la generaci´on de filamentos cromos´omicos dispara la producci´ on de exonucleasas, que provocan la muerte bacteriana.

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La teor´ıa m´ as reciente, respecto al mecanismo ´ıntimo de acci´ on, indica que m´ as que bloquear la topoisomerasa (girasa) por interacci´on directa, las quinolonas se unen a los locus espec´ıficos de uni´ on de las girasas sobre las cadenas de DNA; la girasa entonces podr´ıa formar un complejo fuertemente unido al DNA, impidiendo la funci´ on de las DNA polimerasas.

40

En los animales superiores y en el hombre, tambi´en existen Topoisomerasas o girasas que ejercen acciones como la descrita en E. Coli; no obstante, en las c´elulas humanas la girasa es diferente, actuando solo en una primera fase de la reducci´ on; consta de 2 subunidades de 172 kilodaltons y, aunque muestra una m´ınima sensibilidad frente a las quinolonas, la topoisomerasa bacteriana es 100 veces m´as sensible que su hom´ ologa eucarionte.

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Desde el punto de vista de resistencia bacterina, u ´nicamente se conoce que se produzca resistencia bacteriana a las quinolonas por mutaci´on de genes cromos´omicos; no se han encontrado resistencias ligadas a genes de pl´ asmidos o transposones.

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La mutaci´on conocida que confiere resistencia consiste en una modificaci´on de los monos´ omeros alfa de la Topoisomerasa II, de E. Coli, que provoca resistencia a los ´acideos nalid´ıxico y oxol´ınico, con una andose resistencia cruzada con otras quinolonas, como norfloxacina, enoxafrecuencia de 10−6 - 10−8 , d´ cina o ciprofloxacina, con unas frecuencias inferiores a 10−9 . No obstante, teni´endose en cuenta la extraordinariamente alta actividad de las quinolonas, ocurre que esta resistencia no es pr´acticamente significativa, ya que las capas mutadas se consiguen inhibir con concentraciones de antibi´ otico, a´ un dentro del rango alcanzable a las dosis terap´euticas.

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Por lo que se refiere a la actividad antimicrobiana, las fluorquinolonas se caracterizan por su gran actividad antibacteriana, que en muchas ocasiones alcanza cotas de nanogramos por mililitros, y con un espectro que abarca a pr´ acticamente todas las bacterias responsables de la patolog´ıa infecciosa; enterobacteri´aceas, Pseudomas, Haemophylus, Neisseria, estafilococos, estreptococos, bacterias anaerobias, Legionela, microbacterias, ricktesias, micoplasmas, etc. Se pueden comparar, por cuanto a su eficacia antimicrobiana se refiere a los antibi´ oticos betalact´amicos 4

2 006 917 de tercera generaci´on o a los aminogluc´ osidos, siendo, usualmente, su espectro m´ as potente sobre Gram - negativos que sobre Gram - positivos.

5

En la Tabla I se muestran algunos ejemplos de la actividad de las m´ as conocidas fluorquinolonas (enoxacina, norfloxacina, ofloxacina, ciprofloxacina, amifloxacina, pefloxacina) comparativamente a conocidas penicilinas (mezlocilina, piperacilina, amoxicilina), cefalosporinas (cefotaxima y ceftriaxona) y aminogluc´ osidos (gentamicina).

10

De una forma amplia, puede decirse que las fluorquinolonas son muy activas frente a cocos y bacilos Gramnegativos (como Pseudomona aeruginosa, Haemophylus influenza, etc.), mostrando, igualmente, una excelente actividad frente a microorganismos del tracto gastrointestinal, como son E. Coli, Salmonella, Shigella, Yersinia, etc.

15

Tambi´en suelen ser muy activas frente a la mayor´ıa de las bacterias aerobias y facultativas (lo mismo sean Gram - positivas que gram - negativas), comport´andose como potentes agentes bactericidas a concentraciones entre 1 a 4 veces la CMI; su eficacia es menor sobre las bacterias anaerobias, pero se pueden encontrar CMI muy interesantes. Las fluorquinolonas son inactivas frente a los hongos.

20

En el caso de ser necesario el tratamiento de pacientes infectados con m´ ultiples microorganismos, o en caso de tener que hacer frente a cuadros multirresistentes, las quinolonas pueden asociarse, sin el menor problema, con otros antibi´ oticos, como, por ejemplo enoxacina con penicilina, clindamicina, metronidazol o gentamicina, puesto que se ha demostrado que, al menos in vitro, no se produce sinergismo ni antagonismo; igualmente se ha ensayado con ´exito la combinaci´on de norfloxacina y tobramicina para el tratamiento de ciertos bacilos Gram - negativos.

25

La ciprofloxacina es, aparentemente, la mol´ecula m´as potente, siendo unas cuatro veces m´as activa que la norfloxacina, del mismo modo que la norfloxacina es m´ as potente que el a´cido oxol´ınico y ´este, a su vez, que la cinoxacina o el a´cido nalid´ıxico, precursor, ´este u ´ ltimo, de las quinolonas y, en cierto modo, considerado como un tipo de patr´ on. 30

(Ver Tabla I en la p´ agina siguiente) 35

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Por lo que se refiere a la farmacocin´etica, en general, puede decirse que las quinolonas poseen un perfil farmacocin´etico excepcional, de cara a una elevada utilidad cl´ınica; poseen una excelente absorci´ on oral, que no suele ser interferida por la ingesta; muy elevadas biodisponibilidades, concentraciones tisulares, s´ericas y especialmente urinarias, superiores a la CMI, por lo cual su eficacia est´a generalmente garantizada contra la mayor´ıa de microorganismos Gram - negativos y buena parte de los Gram - positivos. Finalmente, se caracterizan tambi´en de forma general, por unas semividas relativamente largas, que permiten per´ıodos de administraci´ on de entre 8 y 12 horas, o m´ as en algunos casos. Las principales quinolonas revisadas (cinoxacina, norfloxacina, pefloxacina, enoxacina, ofloxacina y ciprofloxacina), a unas dosis de alrededor de 500 mg., son perfectamente absorbidas por v´ıa oral, provocando, aproximadamente, unas concentraciones m´ aximas de 1 mcg/ml, obteni´endose las mayores absorciones desde el tracto gastrointestinal, en el caso de la ciprofloxacina y la cinoxacina, y las menores en el caso de la norfloxacina. Cuando se administra la cinoxacina con los alimentos, resulta interferida su absorci´ on, disminuyendo aproximadamente en un 30 por 100, aunque, al parecer, no var´ıa sustancialmente el ´area bajo la curva, lo cual quiere decir que la interferencia afecta u ´ nicamente a la velocidad de absorci´ on, en vez de la biodisponibilidad real del f´ armaco. Los niveles s´ericos, tras la administraci´on intravenosa, son similares a los obtenidos tras la administraci´on oral.

20

Generalmente, el grado de uni´on a prote´ına plasm´ atica es relativamente bajo, oscilando entre un 15 30 por 100, hecho que contrasta cuando se tiene en cuenta que las quinolonas de la primera generaci´ on, como por ejemplo el a´cido nalid´ıxico o el ´acido oxol´ınico, mostraban uniones a prote´ınas plasm´aticas de entre un 60 y un 90 por 100. 25

Los vol´ umenes de distribuci´ on suelen ser elevados, siendo excepcionalmente altos en el caso de la ciprofloxacina (170 litros) y enoxacina (100 l), aunque en el caso de la cinoxacina alcanzan escasamente los 18 - 20 litros. 30

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La distribuci´on es excelente, alcanzando pr´acticamente todos los tejidos, siendo especialmente interesante el l´ıquido cefalorraqu´ıdeo, pleural, prost´ atico, secreci´on bronquial, esputos, saliva, etc. ..., as´ı como exudados inflamatorios, incluso alcanzando el l´ıquido amni´ otico y el cord´ on umbilical. A modo de ejemplo, se puede comentar que, 3 horas despu´es de la administraci´on, a ratas, de 100 mg. de pefloxacina, por v´ıa oral, se detectaron concentraciones entre 7,2 y 43,8 mcg/gramo (o ml) en la mayor´ıa de los tejidos estudiados, siendo caracter´ısticas de esta quinolona unas CMI de entre 0,2 y 1 mcg/ml para una gran variedad de microorganismos. Asimismo, la mayor´ıa de las quinolonas muestran una excelente penetraci´ on en los tejidos inflamados. Las vidas medias de las quinolonas suelen ser bastante largas, desde 3 - 4 horas para la norfloxacina y ciprofloxacina, hasta 7 - 11 horas para la ofloxacina y la pefloxacina, ello trae como consecuencia una periodicidad de administraci´ on que oscila entre 2 - 3 veces al d´ıa, lo cual convierte a los fluorquinolonas en unos preparados ideales para el tratamiento ambulatorio de pacientes, asegurando un elevado grado de cumplimiento de la prescripci´ on m´edica. El metabolismo de las quinolonas no es especialmente amplio (15 - 30 por 100), siendo m´ aximo en el caso de la ciprofloxacina (44 por 100) y pefloxacina (60 por 100); los principales mecanismos de biotransformaci´ on pasan por la desmetilizaci´on del N, la formaci´ on de N - ´oxidos y la apertura del anillo piperaz´ınico de la posici´on 7; los metabolitos no tienen actividad bacteriana, o la tienen muy disminu´ıda, respecto al compuesto original.

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En cuanto a la excreci´on, fundamentalmente se produce por v´ıa renal (98 por 100 para la ofloxacina, m´asdel 50 por 100 para la ciprofloxacina); de hecho, la norfloxacina (con un 14 - 40 por 100 de excreci´ on renal) es la excretada realmente en menor grado. La excreci´on por v´ıa fecal var´ıa seg´ un la mol´ecula en concreto, pero oscila entre un 3 y un 20 por 100. Esta elevada eliminaci´on renal hizo que, en un principio, se clasificaran a estos compuestos, casi exclusivamente anti - infecciosos renales (donde alcanzan hasta 100 veces la concentraci´on plasm´atica). En condiciones normales, el aclaramiento plasm´ atico es mayor que la filtraci´ on glomerular, lo que implica una secreci´ on tubular, que se puede comprobar en algunos casos (norfloxacina), puesto que la administraci´ on de probenecia disminuye el porcentaje de la mol´ecula excretada por orina. La pefloxacina, no obstante, posee un aclaramiento plasm´ atico de solo un 15 p´ or 100 del porcentaje normal de filtraci´ on glomerular, lo cual pone de manifiesto la ausencia, en este caso, del citado mecanismo.

7

2 006 917 En la Tabla II se muestran par´ametros cin´eticos de algunas fluorquinolonas.

TABLA II

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Par´ ametros farmacocin´eticos de las principales fluorquinolonas

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Producto

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Ciprofloxacina Ofloxacina Enoxacina Norfloxacina Pefloxacina

Dosis diaria (mg)

Adsorci´on intestinal ( %)

Tiempo medio (h)

Metabo lismo ( %)

Niveles s´ericos (mcg/ml)

Uni´ on a proteinas ( %)

200 400 400 800 800

95 80 80 60 90

4,0 7,0 6,2 3,5 10

44 8 - 10 — 25 - 30 60

0,8 - 1,5 3,5 - 6,8 1,2 - 3,1 1,5 - 2,5 10

30 30 — 15 25

Habida cuenta de las caracter´ısticas farmacol´ogicas y farmacocin´eticas de estos preparados, cabe decir que las quinolonas pueden llegar a ser una aut´entica revoluci´on terap´eutica, sugiri´endose indicaciones cl´ınicas potenciales, adicionales a las hasta ahora conocidas infecciones de tracto urinario y gonorrea. De forma general, las fluorquinolonas parecen poder tenerse en cuenta como alternativas v´ alidas a los aminogloc´ osidos o los beta - lact´amicos, en el tratamiento de infecciones m´ ultiples causadas por bacterias resistentes. Como ya se dec´ıa con anterioridad, la principal indicaci´ on de las quinolonas es el tratamiento de las infecciones urinarias; la norfloxacina, la m´ as conocida de las fluorquinolonas, se encuentra comercializada en m´as de 20 pa´ıses, incluyendo Espa˜ na.

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A la dosis de 1 comprimido de 400 mg., dos veces al d´ıa, ha demostrado ser eficaz, o m´as, que la amoxicilina, nalid´ıxico o trimetoprim - sulfametoxazol, en el tratamiento de infecciones urinarias no complicadas; igualmente en casos de infecciones complicadas (pacientes cateterizados, ancianos, infecciones por P. aeruginosa, etc.), se han obtenido resultados de 85 - 95 por ciento de curaciones, tras la administraci´on de ciprofloxacina durante cinco d´ıas. Se obtienen tambi´en, resultados alentadores en el tratamiento de las infecciones ginecol´ogicas y de transmisi´on sexual; as´ı, por ejemplo, se ha encontrado que 2 dosis de 600 mg de norfloxacina, por v´ıa oral, son tan eficaces como 2 gramos de espectomicina, v´ıa intramuscular, en el tratamiento de la gonorrea, y tambi´en se han encontrado buenos resultados en afecciones como cervicitis, protatitis e infecciones causadas pro Clamidia. Son poco eficaces contra Gardenella vaginalis. En algunos casos, pueden aplicarse, t´opicamente, en forma de gotas, para administrarse ocular y ´oticamente.

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Son eficaces en el tratamiento de las infecciones gastrointestinales, incluso agudas (gastroenteritis), resultando sensibles Salmonellas (S. tiphy), Shigella, Campylobacteriaceas y Vibrios; asimismo, tambi´en se sugiere su uso en procesos para descontaminaci´ on selectiva del tracto digestivo, no afectando a la flora anaer´ obica, infecciones de v´ıas biliares, etc.

55

Las infecciones tor´acicas, asi como las infecciones respiratorias comunes, podr´ıan ser tambi´en una indicaci´on interesante para este tipo de preparados, puesto que estos f´ armacos poseen un espectro antimicrobiano, in vitro, que cubre bastantes, aunque no todos, de los pat´ ogenos presentes com´ unmente en este tipo de infecciones, como por ejemplo, Haemophilus influenza, agentes causantes de la neumon´ıa, como Micoplasmas, legionellas y psitacosis.

60

Finalmente, las nuevas fluorquinolonas tambi´en se est´an ensayando con resultados prometedores en el tratamiento de procesos infecciosos graves y/o cr´onicos, como puedan ser las infecciones sist´emicas, 8

2 006 917 infecciones postquir´ urgicas, infecciones osteoarticulares, - como la osteomielitis - , as´ı como diversas infecciones de tejidos blandos; m´ as recientemente, la existencia de diversos preparados disponibles en forma de administraci´on de inyectables, incrementan a´ un m´ as el cuadro de pacientes susceptibles de ser tratados con estas nuevas quinolonas, por estar gravemente infectados e imposibilitados para el tratamiento oral. 5

10

Desde el punto de vista de efectos secundarios, por el momento, los u ´ nicos efectos adversos conocidos son aqu´ellos detectados en los pocos ensayos cl´ınicos realizados con estos productos, no siendo, en general, ni m´ as frecuentes, ni m´ as graves que los ya conocidos con el ´acido nalid´ıxico; y cuando se han realizado ensayos comparativos, los compuestos del tipofluorquinolonas resultan menos t´ oxicos que agentes como trimetroprim - sulfametoxazol, o amoxicilina, tanto en lo que se refiere a frecuencia de los efectos adversos, como en lo que se refiere a la gravedad de los mismos.

15

De entre las modernas fluorquinolonas, las m´ as conocidas en cuanto a sus efectos secundarios, por ser m´as antiguas y haberse experimentado cl´ınicamente con mayor amplitud, son la norfloxacina, la enoxacina y ofloxacina.

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La norfloxacina ha presentado una incidencia global de efectos secundarios entre un 3,5 por 100 y un 15 por 100 m´ aximo; los efectos indeseables m´as abundantes hasta un 5 por 100, han sido de tipo gastrointestinal, siguiendo en importancias los del sistema nervioso central (2,5 por 100) y de tipo tegumentario (1 por 100).

25

La enoxacina, administrada a la misma dosis que la anterior (400 mg. dos veces al d´ıa), ha demostrado un perfil toxicol´ ogico similar, siendo u ´ nicamente de destacar molestias estomacales, n´auseas y dolor de cabeza, alteraciones en el proceso de excreci´on de la teofilina, alteraciones hematol´ogicas leves, elevaci´on de las transaminasas, artralgias, etc.

30

35

La ofloxacina, m´ as reciente que las anteriores, adem´as de los ya mencionados efectos de tipo gastrointestinal (n´auseas, anorexia, v´omitos) y alteraciones a nivel del sistema nervioso central (v´ertigo, cefalea), tambi´en muestra alteraciones de tipo hematol´ogico y enzim´atico (transaminasas). Todas ellas, lo mismo que en los dos casos anteriores, a unas incidencias muy bajas, que oscilan entre un 0 y un 10 por 100 de forma global, aunque es necesaria una mayor experimentaci´ on cl´ınica para concretar el perfil real de toxicidades de estos productos. Otras manifestaciones t´ oxicas, asociadas a las fluorquinolonas, podr´ıan ser, cristaluria, cuando se usan dosis altas, diferentes manifestaciones a nivel del sistema nervioso central, y principalmente toxicidad a nivel de los cart´ılagos en crecimiento, pues se han observado malformaciones en los cart´ılagos de animales tratados con fluorquinolonas, por lo cual, de confirmarse tal extremo, este tipo de compuestos podr´ıan constituir una contraindicaci´ on en pacientes menores de 18 a˜ nos de edad, as´ı como durante la lactancia y el embarazo. De cualquier modo, este tipo de toxicidad a´ un no se ha detectado en seres humanos.

40

Dentro del contexto t´ecnico definido en los apartados anteriores de esta memoria, la presente invenci´ on proporciona un procedimiento para la preparaci´ on del compuesto de f´ ormula (I) :

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(I) 60

Dicho procedimiento est´a caracterizado porque comprende las siguientes etapas: a) hacer reaccionar 3 - cloro - 4 - fluoranilina de f´ ormula: 9

2 006 917

5

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(II) con etoximetilenmalonato de dietilo de f´ormula: CO2 C2 H5

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/ (CH3 CH2 O) CH =C \ CO2 C2 H5

20

(III) 25

para dar 3 - cloro - 4 - fluoranilino metilenmalonato de dietilo de f´ormula:

30

35

(IV) 40

b) ciclar el producto obtenido en la etapa anterior para dar 6 - fluor - 7 - cloro - 4 - hidroxiquinol´ın 3 - carboxilato de etilo de f´ ormula: 45

50

55

(V)

60

c) N - alquilar el producto de la etapa anterior para dar 1 - etil - 6 - fluor - 7 - cloro - 4 - oxo - 1,4 dihidro - 3 - quinolincarboxilato de etilo de f´ ormula:

10

2 006 917

5

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15

(VI) d) hidrolizar el producto de la etapa anterior para dar el a´cido 1 - etil - 6 - fluor - 7 - cloro - 4 - oxo 1,4 - dihidro - 3 - quinolincarbox´ılico de f´ ormula:

20

25

30

(VII)

35

e) hacer reaccionar el producto de la etapa anterior con morfolina para dar el a´cido de f´ ormula (I) deseado. 40

45

La etapa a) se efectua en etanol como disolvente calentando a una temperatura de 120/130◦C. La etapa (b) se lleva a cabo a una temperatura alta que coincide normalmente con la temperatura de reflujo del disolvente empleado para la ciclaci´on. por su parte, la etapa (c) se realiza en dimetilformamida a una on. Por temperatura de 87/90◦C. La etapa (d) se efectua a la temperatura de reflujo de la mezcla de reacci´ u ´ ltimo, la etapa (e) se lleva a cabo empleando la propia morfolina como disolvente y a una temperatura ◦ de unos 140 C. A continuaci´ on se expone un ejemplo ilustrativo del procedimiento de la invenci´on que tiene car´acter meramente explicativo, por lo que no debe considerarse una limitaci´on del mismo. Ejemplo

50

Etapa (a) En un reactor de 250 ml., de capacidad, provisto de calefacci´ on, se a˜ naden 14.6 g. de 3 - Cloro - 4 Fluor Anilina y 21.6 g. de E.M.M.E. se calienta durante 2 horas a 120◦ /130◦C. 55

Se produce un reflujo de Alcohol Et´ılico. Transcurrido el tiempo, se destila el alcohol et´ılico y se deja enfriar, se a˜ naden 75 ml. de Heptano. Se produce una cristalizaci´ on, se filtra y se deja secar al aire.

60

Rendimiento: 27 g. (p.f.: 67◦C.) (C14 H15 NO4 F Cl)

11

2 006 917 Etapa (b)

5

A un reactor de 1 lt., de capacidad provisto de calefacci´ on y reflujo, se a˜ naden 54.5 g. de 3 - Cloro 4 - Fluor - Anilina metilenmalonato de dietilo. Seguidamente se adicionan 500 ml. de Oxido de Difenilo y se calienta a reflujo durante 1 hora. Transcurrido el tiempo se deja enfriar, produci´endose un precipitado, se filtra y se lava con heptano. Rendimiento: 35.5 g. (p.f. 325◦C., con descomposici´on) (C12 H19 N O3 Cl)

10

Etapa (c)

15

En un reactor de 250 ml., de capacidad, provisto de calefacci´ on, agitaci´ on y reflujo, se a˜ naden 12 g., de 6 - Fluor - 7 - Cloro - 4 - Hidroquinolin - 3 - Carboxilato de Etilo, 15.3 g. de Carbonato pot´ asico, 34.7 g. de Ioduro de Etilo y 90 ml. de Dimetilformamida. on La mezcla reaccionante se calienta durante 10 horas a una temperatura de 87◦/90◦ C., con agitaci´ constante.

20

Transcurrido el tiempo, se destila la DMF a sequedad y se extrae el residuo seco con 75 ml. de Cloruro de Metileno. El extracto se lava con agua y se evapora a sequedad el cloruro de Metileno. El residuo se diluye con agua, se filtra y se seca. Rendimiento: 11.5 g. (p.f.: 136◦ C) (C14 H13 N O3 FCl)

25

Etapa (d) En un reactor provisto de calefacci´ on, reflujo y agitaci´ on, se a˜ naden 11.5 g. de 1 - Etil - 6 - Fluor - 7 - Cloro - 4 - Oxo - 1,4 - Dihidro - 3 - Quinolincarboxilato de Etilo y seguidamente se adicionan 107 ml., de una soluci´ on de Hidr´ oxido s´ odico 2N.

30

La mezcla reaccionante se calienta a reflujo durante 2 horas. Transcurrido el tiempo se acidifica con Acido Ac´etico, form´andose un abundante precipitado, que se filtra y se seca. 35

Rendimiento: 8 g. (p.f.: 282◦ C.) (C12 H9 N O3 F Cl). Etapa (e)

40

En un reactor provisto de calefacci´ on, reflujo y agitaci´ on se a˜ naden 8 g. de Acido 1 - Etil - 6 - Fluor - 7 - Cloro 4 - Oxo - 1,4 - Dihidro - 3 - Quinolincarbox´ılico y 16 g. de Morfolina. on. Se calienta a reflujo a 140◦C. durante 5 horas, manteniendo la agitaci´

45

Transcurrido el tiempo, se destila el excesede Morfolina a presi´on reducida y se a˜ nade agua. Se produce un precipitado que se filtra y se seca. Rendimiento: 6 g. (p.f.: 255◦ C.) ( C16 H17 N2 O4 F)

50

M´ aximo de absorci´on UV: 273 y 343 nm. en Hidr´ oxido s´ odico 0.01N. Actividad antimicrobiana experimental Microorganismos

55

Se ensayaron un total de 100 cepas de Escherichia Coli obtenidos de o´rganos lesionados de animales enfermos. Concentraciones m´ınimas inhibitorias (M.I.C.)

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Las M.I.C. se determinaron por la t´ecnica de diluciones dobles seriadas en Medio M¨ ueller - Hinton o transcurridas 18 horas de incubaci´ on s´olido. Se inocularon 105 n.f.c. la lectura de los resultados se realiz´ a 35◦ C. 12

2 006 917

Las concentraciones del antibacteriano oscilaron entre 256 y 0.0625 µg/ml. El valor de M.I.C. 90 fu´e de 0.125 µg/ml. 5

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2 006 917 REIVINDICACIONES 1. Un procedimiento para la preparaci´ on de a´cido 1 - etil - 6 - fluor - 4 - oxo - 7 - morfolin - 1,4 dihidro - 3 - quinolincarbox´ılico de f´ormula: 5

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cuyo procedimiento est´ a caracterizado porque comprende hacer reaccionar el ´acido 1 - etil - 6 - fluor 7 - cloro - 4 - oxo - 1,4 - dihidro - 3 - quinolincarbox´ılico de f´ormula:

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con morfolina. 35

2. Un procedimiento para la preparaci´ on de a´cido 1 - etil - 6 - fluor - 4 - oxo - 7 - morfolin - 1,4 dihidro - 3 - quinolincarbox´ılico, seg´ un la reivindicaci´ on 1, donde la reacci´ on se efectua a una temperatura de unos 140◦C. 40

45

3. Un procedimiento para la preparaci´ on de a´cido 1 - etil - 6 - fluor - 4 - oxo - morfolin - 1,4 - dihidro - 3 - quinolincarbox´ılico, seg´ un la reivindicaci´ on 1, donde la reacci´ on se efectua durante un periodo de tiempo de unas 5 horas. 4. Un procedimiento para la preparaci´ on de a´cido 1 - etil - 6 - fluor - 4 - oxo - 7 - morfolin - 1,4 dihidro - 3 - quinolincarbox´ılico, seg´ un la reivindicaci´ on 1, donde el a´cido 1 - etil - 6 - fluor - 7 - cloro 4 - oxo - 1,4 - dihidro - 3 - quinolincarbox´ılico se obtiene por reacci´on de 3 - cloro - 4 - fluoranilina con etoximetilenmalonato de dietilo para dar 3 - cloro - 4 - fluoranilino metilenmalonato de dietilo, el cual se cicla para dar 6 - fluor - 7 - cloro - 4 - hidroxiquinolin - 3 - carboxilato de etilo, que a continuaci´on se N - alquila para dar 1 - etil - 6 - fluor - 7 - cloro - 4 - oxo - 1,4 - dihidro - 3 - quinolincarboxilato de etilo que por hidr´ olisis proporciona el a´cido mencionado.

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