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˜ OFICINA ESPANOLA DE PATENTES Y MARCAS

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TRADUCCION DE PATENTE EUROPEA

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kN´umero de solicitud europea: 95920197.1 kFecha de presentaci´on: 21.06.1995 kN´umero de publicaci´on de la solicitud: 0 772 434 kFecha de publicaci´on de la solicitud: 14.05.1997

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54 T´ıtulo: Procedimiento de preparaci´ on de emulsiones y microc´ apsulas que contienen aceite natural

y uso del mismo.

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73 Titular/es: YISSUM RESEARCH

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72 Inventor/es: Magdassi, Schlomo;

30 Prioridad: 27.06.1994 US 266025

DEVELOPMENT COMPANY OF THE HEBREW UNIVERSITY OF JERUSALEM 36, Jabotinsky Street Jerusalem 91042, IL

45 Fecha de la publicaci´ on de la menci´on BOPI:

16.07.2002

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45 Fecha de la publicaci´ on del folleto de patente:

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16.07.2002

Aviso:

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Mumcuoglu, Kosta y Bach, Uri

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74 Agente: Carpintero L´ opez, Francisco

En el plazo de nueve meses a contar desde la fecha de publicaci´on en el Bolet´ın europeo de patentes, de la menci´on de concesi´on de la patente europea, cualquier persona podr´a oponerse ante la Oficina Europea de Patentes a la patente concedida. La oposici´on deber´a formularse por escrito y estar motivada; s´olo se considerar´a como formulada una vez que se haya realizado el pago de la tasa de oposici´ on (art. 99.1 del Convenio sobre concesi´on de Patentes Europeas). Venta de fasc´ ıculos: Oficina Espa˜ nola de Patentes y Marcas. C/Panam´ a, 1 – 28036 Madrid

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DESCRIPCION Procedimiento de preparaci´ on de emulsiones y microc´apsulas que contienen aceite natural y uso del mismo. ´ Ambito de la invenci´ on La invenci´on se refiere a un procedimiento para la preparaci´ on de emulsiones y microc´ apsulas que contienen aceite natural, biodegradable. Las emulsiones y microc´apsulas son particularmente u ´tiles como ingredientes activos para repeler piojos, y otros, tales como preparaciones de vitaminas, las cuales est´an igualmente abarcadas por la invenci´ on. Fundamentos de la invenci´ on La formaci´ on de microc´apsulas, c´apsulas o esf´erulas mediante quitosana ha sido sugerida para la encapsulaci´on de productos farmac´euticos, enzimas, c´elulas, etc. Los procedimientos informados se basan en: A. El uso de una combinaci´ on de quitosana, que es una substancia policati´ onica, con una sustancia poliani´ onica tal como goma ar´ abiga, mediante un procedimiento conocido como coacervaci´on de complejo (p. ej., JP 87-173464). Mediante este procedimiento, se produce una cubierta pol´ımera insoluble. B. La formaci´on de microc´apsulas mediante la dispersi´on de una soluci´ on acuosa, que contiene quitosana, en una fase aceitosa, seguida de gelificaci´ on (p. ej., JP 90-317739). Este procedimiento se basa en la formaci´on de una fase separada en aceite, seguida de gelificaci´on de la gotita acuosa, y no solamente la intercara. C. La reticulaci´on covalente, p. ej., de esf´erulas, mediante el uso de agentes de reticulaci´on especiales, seguido de irradiaci´ on UV (p. ej., WO 87-US1495). D. La formaci´ on de esferas pol´ımeras mediante el suministro de gotitas de soluci´ on de mon´ omero poliani´onico, que confluyen con una corriente de soluci´ on de mon´ omero policati´onico (p. ej., WO 92-US9781) Este procedimiento se basa en la tecnolog´ıa que permite puntos de contacto espec´ıficos entre los reactantes, estando controlado el tama˜ no de part´ıcula resultante mediante maquinaria. E. La formaci´ on de esf´erulas mediante la emulsificaci´on de una fase aceitosa directamente dentro de una soluci´ on de quitosana, la cual, a continuaci´ on, se agrega gota a gota dentro de una soluci´ on que contiene difosfato e hidrato de glioxal, lo cual conduce a la reticulaci´ on (p. ej., EP 543572). En este caso, no se produce un procedimiento de micro-encapsulaci´on en la intercara aceite-agua, sino una simple gelificaci´ on de la esf´erula completa. Tal como se muestra en la descripci´on siguiente, el procedimiento de la invenci´ on se basa en la formaci´ on de una pared insoluble alrededor de cada una, o de u ´nicamente unas pocas gotitas, de manera tal que esta pared separa cada gotita de aceite de la fase acuosa. La formaci´ on de emulsiones acuosas conteniendo quitosana o microc´apsulas de quitosana 2

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de liberaci´ on sostenida biodegradables, que tengan buenas propiedades adherentes a superficies cargadas negativamente es deseable, y tendr´ıan una ventaja particular para proporcionar composiciones repelentes de piojos de larga actuaci´on biodegradables conteniendo aceite natural. El n´ umero de casos de infestaci´on humana por piojos en el mundo se estima en cientos de millones cada a˜ no (Taplin, D. y T.L. Meinking, Sem. Dermatol., vol. 6, p´ ags. 125-135, (1987)). El tratamiento convencional para los piojos de la cabeza consiste en el uso de ingredientes sint´eticos, que son pediculicidas. Sin embargo, estos compuestos qu´ımicos no solucionan el problema de la reinfestaci´on, que frecuentemente se produce entre los ni˜ nos. Por ello, resulta evidente la necesidad de un repelente de piojos. Los repelentes de insectos operan fundamentalmente a partir de una distancia, confundiendo los mecanismos de orientaci´ on de los insectos y cerr´ andolos definitivamente al actuar como bloqueadores sensoriales (Wright, R. H., Sci. Amer., vol. 233, p´ ags. 104-111, (1975)). Hacen que el animal hu´esped deje de ser atractivo y, de esta forma, protegen al animal hu´esped de las picaduras de insectos o de garrapatas y de la mayor´ıa de los microorganismos pat´ ogenos que ellos transfieren. Normalmente, los repelentes son vol´atiles y, en consecuencia, permanecen sobre el usuario durante un per´ıodo de tiempo limitado. En el pasado, se us´ o el aceite de lavanda para proteger a los ni˜ nos de la infestaci´on por piojos de la cabeza (Burgess, I. Br. J. Dermatol., vol. 128, p´ ags. 357-358, (1993a)). Recientemente, se ha introducido el piperonal (1,3-benzodioxol-5-carboxaldeh´ıdo) como un repelente en el mercado (Burgess, I. Pharmaceutical J., vol. 15, p´ ags. 674-675, (1993b)), sin embargo, m´ as recientemente se ha mostrado que esta substancia posee igualmente actividad pediculicida (Moore, W., JAMA, vol. 71, p´ ags. 530-531, (1918)). El ej´ercito de los Estados Unidos de Am´erica ha aplicado durante largo tiempo los siguientes repelentes para la ropa contra los piojos del cuerpo: M-1960 (30 % de 2-butil-2-etil-1,3-propanodiol, 30 % de benzoato de bencilo, 30 % de n-butilacetanilidina y 10 % de Tween 80), 90 % de benzoato de bencilo y una combinaci´ on de 75 % de N-N’-dietil-n-toluamida (DEET) y 25 % de etanol. El piretrum se ha usado para impregnar la ropa interior, y posee tanto un efecto repelente como t´oxico (Eldridge, B. F. en “El control de piojos y de enfermedades originadas por piojos”, PAHO/WHO Sci. Pub. No. 263, p´ ags. 177-178, (1973)). Actualmente, los ej´ercitos de los Estados Unidos de Am´erica y de Australia est´an usando permitrina y di-butilftalato como un tratamiento para la ropa frente a un cierto n´ umero de artr´ opodos m´edicamente importantes, particularmente mosquitos y a´caros (Gubta, R. K. u otros, J. Am. Mosq. Control Assn., vol. 3, p´ ags. 556-560, (1987); Frances, S. K. y otros, J. Med. Entomol., vol. 29, p´ ags. 907-910, (1992)). El repelente DEET, el cual se ha usado ampliamente contra diversos artr´ opodos de importancia m´edica, muestra diversos efectos secundarios que incluyen diversos efectos cardiovascula-

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res, encefalopat´ıas, reacciones al´ergicas y psic´oticas (Robbins, P. J. y M. G. Cherniak, J. Toxicol. Envirol. Health, vol. 18, p´ ag. 503, (1986); Edwards, D. L. y C.E. Johnson, Clin. Pharm., vol. 6, p´ ags. 496-498, (1987); Leach, G. J. y otros, J. Toxicol. Envorol. Health., vol. 25, p´ ag. 217, (1988)). De acuerdo con lo anterior, resulta obvio por qu´e se requiere una composici´on repelente de piojos natural, especialmente si se formula de una manera tal que se desea un rendimiento de larga duraci´ on de la repelencia de piojos. Las preparaciones de liberaci´on sostenida de otros agentes activos aceitosos, tal como la vitamina E o fotoprotectores de radiaci´ on UV solubles en aceite, han encontrado igualmente problemas. Por ejemplo, se requieren las propiedades ´opticas de los fotoprotectores mientras permanecen sobre la piel. Sin embargo, el contacto entre la piel y el fotoprotector es, frecuentemente, un problema debido a la composici´on qu´ımica del protector, el cual podr´ıa ocasionar efectos alerg´enicos y, en algunos casos, igualmente, causar enfermedades de la piel. P. F¨ aldt, B. Bergenst¨ahl y P. D. Claesson en Colloids and Surfaces A: Physicochemical and Engineering Aspects, vol. 71, p´ ags. 187-196, (1993), describen la estabilizaci´ on mediante quitosana de emulsiones de aceite de soja recubiertas con emulsificadores de ´acido glicoc´olico y fosfol´ıpidos. En una primera realizaci´ on, la presente invenci´on proporciona un procedimiento para la preparaci´ on de una emulsi´ on acuosa de un aceite que comprende las etapas de: (a) formaci´ on de una emulsi´ on de aceite en agua mediante la homogeneizaci´on de dicho aceite dentro de una soluci´ on acuosa que contiene un emulsificador ani´ onico, y (b) adici´ on a la emulsi´on obtenida en (a) de una soluci´on acuosa de quitosana, caracterizado porque dicha etapa de adici´on se lleva a cabo sin la homogeneizaci´on continua de la mezcla con el fin de obtener una emulsi´ on estable a un pH tan bajo como de 3,5. En una segunda realizaci´on, la invenci´ on se refiere a un procedimiento para la microencapsulaci´on de gotitas de aceite finas dispersadas en una soluci´on acuosa que comprende las etapas de: (a) formaci´ on de una emulsi´ on de aceite en agua, mediante la homogeneizaci´on del aceite, agua y un emulsificador ani´ onico; (b) adici´ on a la emulsi´on obtenida en (a) de una soluci´ on acuosa de quitosana sin homogeneizaci´on continua de la mezcla para obtener una emulsi´ on estable a pH tan bajo como de 3,5 y, opcionalmente, diluci´ on de esta emulsi´ on estable en agua o una soluci´ on acuosa adecuada; (c) adici´ on a la emulsi´on obtenida en (b) de un electr´ olito de reticulaci´ on soluble en agua que es capaz de incrementar el pH de la soluci´on y de reticular las cadenas pol´ımeras de quitosana, formando, de esta forma, una capa insoluble de quitosana alrededor de las gotitas de aceite, manteni´endose un pH de desde aproximadamente 5 hasta aproximadamente 7,5 mediante la adici´ on de un a´cido adecuado y agitaci´ on de la mezcla durante un per´ıodo de tiempo adecuado para obtener una dispersi´ on de microc´apsulas finas en agua, y (d) la separaci´ on opcional de la

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fase acuosa de la dispersi´on obtenida en (c) para obtener un polvo. En el procedimiento de acuerdo con la segunda realizaci´on de la invenci´ on, la formaci´ on de la pared de la c´apsula es junto a la intercara de aceiteagua, obteni´endose, de acuerdo con ello, microc´apsulas, y no esf´erulas. En un aspecto adicional, la invenci´ on proporciona una preparaci´ on repelente de piojos biodegradable de liberaci´on sostenida obtenible mediante un procedimiento de acuerdo con la presente invenci´on, comprendiendo dicha preparaci´on como ingrediente activo un agente repelente de piojos que comprende al menos un aceite natural seleccionado entre el grupo formado por aceite de citronela, aceite de romero y aceite de eucalipto, o al menos un componente de aceite natural seleccionado entre el grupo formado por citronelal y geraniol o mezclas de los mismos; un emulsificador ani´ onico; quitosano; y comprendiendo, opcionalmente, otros aditivos, veh´ıculos o diluyentes aceptables dermatol´ogicamente. Igualmente, la presente invenci´on proporciona el uso de una preparaci´ on de acuerdo con este aspecto de la invenci´on para la preparaci´ on de un medicamento para uso en la prevenci´on y tratamiento de la infestaci´ on por piojos en animales. Adem´as, la invenci´on proporciona una preparaci´on de liberaci´ on sostenida obtenible mediante un procedimiento de acuerdo con la presente invenci´on, comprendiendo dicha preparaci´ on como ingrediente activo vitamina E o un fotoprotector de radiaci´ on UV; un emulsificador ani´ onico; quitosana; y, opcionalmente, comprendiendo otros aditivos, veh´ıculos o diluyentes aceptables farmac´euticamente. La presente invenci´on se describe a continuaci´ on con mayor detalle con referencia a las figuras adjuntas, en las cuales: Figura 1: ilustra el efecto repelente de piojos de los aceites de citronela, romero y eucalipto; Figura 2: ilustra el efecto repelente de piojos del citronelal y del geraniol; Figura 3: ilustra la eficacia repelente de piojos de diversas dosis de geraniol y citronelal (expresadas como % de componente puro); Figura 4: ilustra el efecto repelente de piojos de emulsiones de aceite en agua de romero o citronela preparadas con lecitina y quitosana; y Fotograf´ıa 1: muestra la adherencia de gotitas de emulsi´ on recubiertas con quitosana (microc´apsulas) sobre fibras del cabello (ampliaci´on x400). En el procedimiento de la invenci´ on, dicho aceite puede ser un aceite natural, un aceite sint´etico, un componente de aceite natural, aceite de soja, vitamina E, fotoprotectores de radiaci´ on UV solubles en aceite, D-limoneno, un extracto de fruta o un extracto aromatizante o una mezcla de los mismos. Para la preparaci´ on de las preparaciones repelentes de piojos de la invenci´on, dicho aceite es un aceite natural, preferiblemente aceite de romero, aceite de citronela, o aceite de eucalipto o una mezcla de los mismos, o un componente de aceite natural, preferiblemente citronelal o geraniol o una mezcla de los mismos, o mezclas de 3

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estos aceites naturales y componentes de aceites naturales. El emulsificador ani´ onico puede ser dodecil sulfato s´ odico, un fosfol´ıpido o una mezcla de fosfol´ıpidos tal como lecitina, o un jab´ on, tal como estearato, oleato o palmitato de sodio, potasio o amonio. La lecitina es un emulsificador preferido. En el procedimiento de la invenci´ on, el pH de la soluci´on de quitosana usada en la etapa (b) es de aproximadamente 1-2,5 y el pH final de la emulsi´ on estable obtenida es de aproximadamente 3,5. El pH puede ajustarse mediante cualquier ´acido adecuado, por ejemplo, a´cido c´ıtrico al 10 % o ´acido ac´etico al 10 %. En el procedimiento de acuerdo con la segunda realizaci´on, el electr´olito de reticulaci´ on es un polifosfato soluble en agua, tal como tripolifosfato, preferiblemente tripolifosfato s´ odico o pot´ asico. En la etapa (c) de este procedimiento, el a´cido usado es, preferiblemente, un ´acido org´ anico, tal como ´acido c´ıtrico, ac´etico o fum´ arico, y dicho per´ıodo de tiempo adecuado es desde 2 hasta 6 horas. En la etapa (d) de este procedimiento, la fase acuosa puede separarse de la dispersi´on obtenida en la etapa (c) mediante liofilizaci´on, secado por pulverizaci´ on o secado en estufa de vac´ıo a una temperatura adecuada. En ambas realizaciones, el procedimiento de acuerdo con la invenci´ on puede comprender adem´as, despu´es de la etapa (b), la adici´ on de un agente dispersante que puede ser un tensioactivo ani´ onico o cati´ onico. Por ejemplo, puede usarse dodecil sulfato s´odico (SDS) o CTAB. La adici´ on del tensioactivo previene la aglomeraci´on de part´ıculas durante dicha etapa (c). Igualmente, la invenci´on se refiere a preparaciones repelentes de piojos biodegradables de liberaci´on sostenida obtenibles mediante un procedimiento de la invenci´on y que comprenden, como ingrediente activo, un agente repelente de piojos que comprende al menos un agente natural seleccionado entre el grupo formado por aceite de citronela, aceite de romero y aceite de eucalipto, o al menos un componente de aceite natural seleccionado entre el grupo formado por citronelal y geraniol o mezclas de los mismos; un emulsificador ani´ onico; quitosana; y, opcionalmente, comprendiendo adem´ as aditivos, veh´ıculos o diluyentes aceptables dermatol´ogicamente. La preparaci´ on repelente de piojos biodegradable de liberaci´ on sostenida puede presentarse en la forma de una emulsi´on acuosa de dicho agente. El emulsificador ani´ onico es un fosfol´ıpido o una mezcla de fosfol´ıpidos, siendo preferida la lecitina. La composici´on repelente de piojos biodegradable de liberaci´ on sostenida de acuerdo con la invenci´on, en la forma de una emulsi´ on de aceite en agua, se prepara mediante el procedimiento de acuerdo con la primera realizaci´on de la invenci´on. Como alternativa, el ingrediente activo en la preparaci´ on biodegradable repelente de piojos de acuerdo con la invenci´ on, puede presentarse en la forma de microc´ apsulas de quitosana. Las microc´apsulas de quitosana se preparan mediante el procedimiento de acuerdo con dicha segunda realizaci´on de la invenci´ on. 4

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Tanto en la forma de emulsi´ on como en la forma de microc´apsulas de quitosana, dicho aceite natural repelente de piojos activo es, preferiblemente, citronela y dicho componente de aceite natural repelente de piojos activo es geraniol. Las preparaciones repelentes de piojos de la invenci´ on pueden, por supuesto, contener una mezcla de aceite natural activo y de componentes de aceites naturales. Los Ejemplos siguientes describen la preparaci´on de emulsi´on de aceite en agua y de microc´apsulas en dispersi´ on en agua para aceite de romero. Se entiende que dentro de los conocimientos del experto en la t´ecnica, entra el uso de otros aceites o componentes de aceites de una manera similar. En principio, el procedimiento de la invenci´ on se basa en las etapas siguientes: formaci´ on de una emulsi´ on de aceite en agua, mediante el uso de un emulsificador natural tal como, p. ej., lecitina; y adici´on de la soluci´on de quitosana a un pH bajo a la emulsi´ on anterior, mientras se homogeiniza continuamente. En esta etapa, se obtiene preferiblemente una emulsi´ on estable a pH 3,5. A continuaci´ on, la emulsi´on obtenida puede diluirse en agua destilada. En el procedimiento para la preparaci´ on de microc´apsulas de quitosana, la emulsi´ on estable as´ı obtenida, la cual preferiblemente ha sido diluida, se somete a lo siguiente: adici´on, gota a gota, de soluci´ on de tripolifosfato s´ odico dentro de la emulsi´ on diluida anterior, mientras el pH se mantiene constante a 5,3. En esta etapa, se obtiene una dispersi´on de microc´apsulas finas en agua. Al final del procedimiento, se obtiene una dispersi´on de microc´apsulas en agua. Es posible obtener microc´ apsulas en polvo, simplemente mediante liofilizaci´on o secado en lecho fluidizado de la dispersi´on anterior. En el procedimiento(s) anterior, se forma una emulsi´ on mediante un emulsificador, el cual es capaz de reaccionar con quitosana. En los procedimientos de la t´ecnica anterior que usan quitosana, p. ej. EP-A-543572, se agrega material de n´ ucleo dentro de la soluci´on de agente endurecedor. Esta diferencia permite la formaci´ on de microc´apsulas finas en comparaci´ on con las esf´erulas grandes que se obten´ıan mediante los otros procedimientos. Es innecesario decir que, las esf´erulas grandes no son adecuadas para los fines de las preparaciones de la invenci´ on. Las preparaciones repelentes de piojos de la invenci´ on pueden aplicarse al cabello tal cual, o pueden mezclarse con champ´ us o preparaciones acondicionadoras para el cabello. Una de las propiedades destacadas de las emulsiones de aceite en agua que contienen quitosana y de las microc´apsulas de quitosana de la invenci´ on, es la capacidad de las gotitas, en la emulsi´ on o las microc´apsulas, para adherirse sobre fibras del cabello, las cuales est´an generalmente cargadas negativamente. Esta adherencia se demuestra en la Fotograf´ıa 1. Esta propiedad es de gran importancia para la presente invenci´on, puesto que los aceites o componentes de aceites repelentes de piojos activos se adhieren al cabello y, de acuerdo con ello, ser´ an liberados lentamente,

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dando lugar a una formulaci´ on de liberaci´ on sostenida biodegradable. Las microc´apsulas de quitosana que contienen preparaciones repelentes de piojos de la invenci´on pueden adherirse, igualmente, a medios soporte adecuados, tal como cintas decorativas, horquillas o pendientes, a utilizar por el usuario. La preparaci´ on repelente de piojos de la invenci´on puede usarse, igualmente, para la prevenci´on y tratamiento de la infestaci´ on por piojos de animales, particularmente animales dom´esticos. Pueden usarse en la forma de polvos o soluciones, o adherirse a medios soporte veterinarios adecuados tales como collares y similares. En otra realizaci´ on a´ un, la invenci´ on se refiere a preparaciones de liberaci´on sostenida obtenibles mediante un procedimiento de la invenci´ on, y que comprenden como ingrediente activo vitamina E o un fotoprotector de radiaci´ on UV; un emulsificador ani´ onico; quitosana; y, opcionalmente, comprendiendo adem´ as aditivos, veh´ıculos o diluyentes aceptables farmac´euticamente. La vitamina E puede presentarse en cualquier forma compatible biol´ ogicamente de ∝-tocoferol, o mezclas de formas compatibles diferentes. Los fotoprotectores de radiaci´ on UV pueden ser, por ejemplo, octilmetoxi cinnamato. En estas preparaciones, el ingrediente activo puede estar presentes en la forma de una emulsi´on acuosa, la cual se prepara mediante la primera realizaci´on del procedimiento de la invenci´ on, o en la forma de microc´ apsulas de quitosana, preparadas mediante dicha segunda realizaci´ on del procedimiento de la invenci´on. Ejemplos Material y procedimientos Piojos Los piojos del cuerpo humano, Pediculus humanus humanus, se desarrollaron alimentando los piojos cada 48 horas sobre conejos. Los piojos se colocaron sobre el abdomen afeitado de conejos de Nueva Zelandia blancos y se dejaron alimentar hasta saciedad. Fuera del hu´esped, los piojos se mantuvieron a una temperatura de 30◦ C y una humedad relativa de 70-80 %. Para cada ensayo, se usaron 20 piojos hembras, los cuales se hab´ıan alimentado 24 horas antes. Compuestos qu´ımicos Se usaron los aceites naturales de citronela, romero, eucalipto, lavanda y D-limoneno y los componentes de aceites esenciales tales como citronelal, geraniol, linalol, acetato de bornilo, alcanfor, cineol, pineno, canfeno y borneol. El etanol absoluto sirvi´ o como control negativo y DEET como control positivo. Bioensayo Se us´ o el procedimiento de placa Petri para examinar la repelencia del aceite, de los componentes del aceite y de las soluciones de control usados. Sobre las placas Petri se colocaron discos de papel de filtro Whatman 4 (5,5 cm de di´ ametro). Sobre un parche de pana (1,5 cm2 ) se dejaron caer en forma de gotas 100 ml de la soluci´on de ensayo. El material se dej´ o secar en una incubadora a 35◦ C y una humedad relativa del 85-90 %. De la misma manera, se trataron parches de control. Los parches se colocaron en la periferia del papel de filtro separados una dis-

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tancia m´ axima unos de otros. Se colocaron 20 piojos hembra en el centro del papel de filtro y las placas Petri junto con los piojos se cubrieron con una caja oscura con el fin de eliminar cualquier influencia de la luz. El n´ umero de piojos encontrados sobre los parches tratados y de control, as´ı como sobre el ´area comprendida entre los parches, se registraron despu´es de 10 minutos. Cada componente se ensay´ o tres veces. La duraci´ on de la repelencia se examin´ o ensayando los parches tratados cada 3-4 d´ıas. La concentraci´on a la cual una substancia dada se mantuvo a´ un activa, se examin´o mediante la preparaci´ on de diluciones seriadas y examinando el efecto un d´ıa despu´es del tratamiento de los parches. C´ alculos La repelencia se calcul´o de acuerdo con la ecuaci´on siguiente: % de repelencia = [(1/2A-n)/1/2A] x 100 en donde: A = n´ umero total de piojos, n = n´ umero de piojos encontrados en el parche tratado. De acuerdo con esta ecuaci´on, cuando los piojos se distribuyeron por igual entre los parches tratados y no tratados (n = 1/2A), el % de repelencia es igual a cero, y cuando no qued´o ning´ un piojo en el parche tratado (n = 0), la repelencia es del 100 %. Repelencia a los piojos de aceites naturales y componentes de aceites naturales Usando los procedimientos de evaluaci´ on anteriores, se ensayaron 14 aceites y componentes de aceites. Los diversos componentes de aceites se ensayaron en su forma bruta, sin purificaci´ on o formulaci´ on especial. Los resultados se resumen en la Tabla 1. Tal como se muestra en la Tabla 1, de los 14 aceites y componentes de aceites, u ´ nicamente 5 muestras proporcionan actividad repelente a largo plazo (aproximadamente 1 semana). Estos son el aceite de citronela, aceite de romero y aceite de eucalipto, y los componentes de aceite activo espec´ıficos son el geraniol y el citronelal. TABLA 1 Duraci´ on de la actividad repelente de aceites naturales y sus ingredientes Compuesto

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Citronela Romero Eucalipto Lavanda D-limoneno Citronelal Geraniol Linalol Linalol Acetato de bornilo Alcanfor Cineol Pineno Canfeno Borneol Emulsi´ on de citronela Emulsi´ on de romero

Actividad en d´ıas >29 >18 >8 >1 15 >8 >1 >1 >1 >1